軍人同志
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軍人同志范文第1篇
根據國務院《退役士兵安置條例》和《省人民政府關于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》（府〔〕80號）精神，結合我市實際，現就做好我市年冬季退役士兵接收安置工作通知如下：
一、接收安置對象
年冬季退役士兵接收安置對象為：符合國務院《退役士兵安置條例》和《省人民政府關于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》（府〔〕80號）規定的年冬季退出現役的士兵。
二、安置原則
年冬季退役士兵安置工作實行“扶持就業為主，重點安置為輔”的安置原則。對重點安置對象實行“按系統分配任務，包干安置”的原則，由各級政府下達指令性計劃一次性安置就業，并務必于接收退役士兵的6個月內，開出安置介紹信，并督促有關單位盡快落實，確保退役士兵真正上崗就業。待安置工作期間，由安置地人民政府按最低生活保障標準發給其生活補助費。對于無正當理由不服從分配者，政府不再負責安置。本人選擇自謀職業的，按規定發給一次性安置補助金。一般安置對象，沒有選擇自主就業的城鎮退役士兵，可領取自謀職業一次性安置補助金，選擇自主就業的城鎮退役士兵，可領取一次性經濟補助金；沒有選擇自主就業的農村退役士兵，可領取一次性生產生活補助金，選擇自主就業的農村退役士兵，可領取一次性經濟補助金。一般安置對象由政府提供優惠政策扶持就業。
（一）重點安置對象（符合下列條件且未選擇自主就業安置的退役士兵，可以選擇由政府安排工作或者自謀職業的方式安置）。
1、服現役滿12年的士官；
2、服現役期間獲得大軍區以上（含大軍區）單位授予榮譽稱號、平時榮立二等功以上獎勵或者戰時榮獲三等功以上獎勵的士兵；
3、因戰致殘被評定為5級至8級殘疾等級的士兵；
4、烈士子女士兵；
5、服現役滿10年、11年符合全程退役條件的士官；
6、服現役滿上士軍銜規定年限的直接從非軍事部門招收的士官；
7、因公致殘被評定為5級至8級殘疾等級的士兵；
8、退出現役前父母已雙亡的退伍義務兵和退出現役前父母已雙亡的未婚退役士官。
（二）除重點安置對象外，其余的退役士兵為一般安置對象。
（三）年冬季開始，在退出現役1年內，退役士兵可自主選擇參加高等職業教育、成人高等教育、普通高等教育和最短不少于3個月職業技能培訓，每人只能選擇其中1項，退出現役1年以上的，參加職業技能培訓按《國務院關于加強職業培訓促進就業的意見》（國發〔〕36號）規定執行。
三、補助金標準及資金來源
（一）、和區補助金標準
1、城鎮退役士兵一次性安置補助金（一次性經濟補助金）標準，根據全市上年度在崗職工人均工資收入水平確定，即中心城區城鎮退伍義務兵、服役滿一、二期的城鎮復員士官基本補助金標準按我市上年度在崗職工人均工資收入的100%發放，轉業士官基本補助金按我市上年度在崗職工人均工資收入的150%發放，從服滿義務兵年限后第一年算起，每多服役一年，增加上年度在崗職工人均一個月工資的補助。
2、農村退役士兵一次性生產生活補助金（一次性經濟補助金）標準，根據當地上年度農村居民人均純收入確定，即農村退伍義務兵、服役滿一、二期的復員士官基本補助金按照當地上年度農村居民人均純收入的100%發放，從服滿義務兵年限后第一年算起，每多服役一年，增加上年度農村居民人均一個月純收入。
3、獲得大軍區以上（含大軍區）單位授予榮譽稱號或榮立二等功（含二等功）以上的、烈士子女、弟妹接槍入伍、退役時父母已雙亡的退役士兵，以及七、八、九、十級殘疾軍人增發20%的補助金；五、六級殘疾軍人增發50%的補助金。
（二）、和區經費來源
金平、龍湖和濠江區的城鎮退役士兵的一次性安置補助金（一次性經濟補助金）及市舉辦的職業技能培訓費用（培訓標準每人按800元計），由市、區財政按1:1比例負擔。農村退役士兵一次性生產生活補助金（一次性經濟補助金）由區財政負擔，省財政按照當地上年度農村人均純收入的50%給予補助。
（三）、、區和縣可根據上述（一）、（二）原則，制定具體補助標準，資金來源按原財政渠道解決。
軍人同志范文第2篇
【關鍵詞】人格教育；心理素質
一、通過人格教育構建學員健全的心理結構
人格是人的素質的重要組成部分，是人心理面貌的集中反映。人格教育是著眼于發展受教育者全部心理面貌的教育，其目標是使個體具有良好的心理素質與健康的心理狀態，促進個體心理結構的健全發展，構建一個多層次、高效能的心理調節與控制系統，使個體潛力得到最大的發揮。通過人格教育可以促進知、情、意協調統一，建立一種完整和健全的心理結構，提高人的總和心理素質，從而有助于個體更好地適應社會環境。軍隊院校人格教育的基本內容應該從認知、情感和自我意識三個方面入手。首先是認知教育。軍校教育不僅要幫助學員掌握先進的軍事理論和廣泛的軍事知識，更要培養學員適應未來現代化戰爭所應具備的快速的思維能力、精準的判斷力，合理的認知方式和健全的認知結構。其次是情感教育。情緒是心理健康的晴雨表，要使學員認識常見的負性情緒，學會調節和控制自己的情緒，防止負性情緒對心理健康的傷害，使自己經常保持穩定的情緒狀況，以適應高強度、超負荷的現代化戰爭。第三是自我意識教育。自我是人格的核心，只有正確地認識自己，才能形成健全的人格，正確的自我認知是心理全面發展的基礎。對自己能有正確認識的人是自尊、自強、自信的人。能正確認識自己的人往往具有較強的親和力與團隊合作精神，具備自我調控能力，能努力改變和發展自身的能力素質，適應不斷變化的客觀環境。
二、通過人格教育鍛造學員堅韌的意志品質
學員健康人格的形成是與克服脆弱、魯莽、多疑等性格弱點和各種困難相聯系的。戰爭是以鮮血和生命為代價的激烈角逐，學員身系重大責任，將面對未來高技術戰爭下異常的心理壓力，因而必須塑造他們勇敢頑強、堅忍不拔的意志品質。堅韌的意志品質不是與生俱來的，只有經過后天的培養和有意識、有目的的磨礪才能獲得。這就要求在教學與訓練中要有意識地創設困難情境，指導、鼓勵學員刻苦磨練，鍛造他們堅毅頑強的優良性格。實踐證明，在越困難的環境下，越有能力克服困難完成任務的人，人格越完善，才能是越有希望取得成功的人。具有堅韌意志品質的軍人，往往有更強的心理承受能力，面對各種應激事件時能應付自如，處變不驚，臨危不懼，更好的適應戰場環境，完成任務使命。因此，鍛造堅韌的意志品質應成為軍校學員人格教育的一項重要內容。
三、通過人格教育幫助學員樹立堅定、正確的信念。保持統一的人格
信仰危機最容易造成人們心理上的崩潰，沒有了精神支柱，人很難承受各方面強大的心理壓力。軍校學員正處在人生觀、價值觀的形成時期。作為年輕人他們看問題往往容易偏激和片面，常常不能正確對待和處理好自己在現實生活中遇到的挫折和困難，以致引起心理沖突和矛盾，如果長時間不能排解，就有可能積聚成心理疾患。同時，由于他們的知識和經驗有限，對復雜社會問題的分析判斷能力還不高，對不健康的思想意識往往缺乏分辨力和抵抗力，容易形成一些錯誤的態度，甚至做出非理性的行為。因此，通過人格教育，幫助學員樹立和鞏固正確的人生價值目標的同時，引導他們把個人理想與遠大理想、社會期望結合起來，把個人的興趣、愛好同軍隊發展的實際結合起來，引導他們從點滴做起，從現在做起，要讓他們真正明白由“小”到“大”、不積跬步，無以至千里的道理。最終要落實在具體行動上，落實在日常的學習、訓練、生活中，在實踐中不斷完善自己的人格，保持主觀世界客觀世界的和諧統一。
軍人同志范文第3篇
【摘要】 目的 了解門診婦科病人兩種不同PH值范圍真菌感染狀況，為臨床婦科醫生治療這類病人提供參考資料。方法 收集門診婦科白帶常規檢查病人的白帶鏡檢資料，同時對每個送檢標本用3.8—5.4的PH精密試紙進行白帶的PH直接測試，而后，將所有的檢查資料分成PH≤4.5或PH＞4.5兩個PH值范圍進行歸類統計分析。結果 總人次中PH≤4.5的白帶1128人次，PH＞4.5的白帶856人次。PH≤4.5的白帶中有真菌感染的病人352人次，占PH≤4.5的白帶的32%。PH＞4.5的白帶中真菌感染的病人328人次，占PH＞4.5的白帶的39%，兩個百分率的卡方值為：x2=0.0800 P ＞0.05。結論 門診婦科病人白帶不同PH范圍真菌感染率無顯著性差異，兩種不同PH狀況下存在同樣的感染風險。
【關鍵詞】 菌群失調 真菌感染 PH值
【Abstract】Goal: Understood that outpatient service gynecology department patient two kind of different PH the value scope fungal infections condition， treats this kind of patient for clinical gynecology department doctor to provide the reference. Method: The collection outpatient service gynecology department leucorrhea routine inspection patient's leucorrhea microscopic exam material， simultaneously delivers examines the specimen to each to carry on the leucorrhea with 3.8-5.4 PH precise indicator papers the PH direct test， then， all inspection material will pide into PH≤4.5 or PH>4.5LIANG the PH value scope carries on the classification statistical analysis. Finally: Always people of PH≤4.5 leucorrhea 1128 people， PH>4.5 leucorrhea 856 people. PH≤4.5 in the leucorrhea has the fungal infections patient 352 people， occupies PH≤4.5 leucorrhea 32%. In the PH>4.5 leucorrhea fungal infections's patient 328 people， occupy PH>4.5 the leucorrhea 39%， two percentage card Fang Zhiwei: x2=0.0800 P>0.05. Conclusion: The outpatient service gynecology department patient leucorrhea different PH scope fungus infection percentage non-significance difference， under two kind of different PH conditions has the similar infection risk.
【Key words】flora fungal infection PH value
門診婦科病人白帶常規檢查中真菌感染的感染率相當高，但這種感染在正常PH范圍與異常PH范圍兩種狀況下是否存在差別？差別有多大？帶著這樣的問題我們進行了調查，現將調查與分析情況作如下報導：
1 材料與方法
1.1材料
1.1.1 標本來源 收集門診婦科1984例白帶常規鏡檢結果
1.1.2 PH精密試紙：上海三愛思試劑有限公司（原上海試劑三廠生產的“試三牌”）（PH3.8-5.4）精密試紙。
1.2 方法 對送檢白帶進行常規檢查，并同時對每個送檢標本用3.8—5.4的PH精密試紙進行白帶的PH直接測試，而后將所得的資料進行歸類統計和分析。
2 結果
將其分成PH≤4.5和PH＞4.5兩種狀況，進行兩樣本率的比較其結果：x2=0.0800;P＞0.05，兩者沒有明顯的差別，也就是說兩種PH狀況下具有同等的感染真菌的機會。
3 討論
霉菌性陰道炎又稱為“假絲酵母菌性陰道炎”，是門診婦科病人中最常見的一種婦科炎癥，其發病率有逐年升高的趨勢，且反復發作的病例非常常見，這些都提示著感染的真菌的耐藥趨勢在增強。正常的陰道內環境是否對霉菌感染有抵御作用？婦科病人的白帶兩種不同PH值范圍真菌感染狀況如何？兩種狀況的感染率是否存在差別，差別是否存在顯著性差異，都是我們這次調查想要了解的內容。正常的陰道內環境變化可以從白帶PH的變化很直觀的表現出來，因此，我們從2008年7月1日至2008年10月30日，共收集門診白帶常規檢查的病人資料1984人次，對這1984名做門診白帶常規檢查的病人的白帶進行PH值測定，其中PH≤4.5的1128人次，占總人次的57%，PH＞4.5的856人次，占總人次的44%，從PH值測定的情況看，大部分病人的白帶PH值在正常范圍，小部分病人的白帶PH值高出了正常范圍，但在正常范圍和高于正常范圍的都有真菌感染陽性病例出現，PH值高于正常范圍的陽性率與正常范圍的陽性率比較， 經卡方檢驗：x2=0.0800 P＞0.05兩者沒有顯著性差異，于是認為兩種不同的PH 范圍具有同等的感染機會。霉菌性陰道炎大部分是由于接觸感染所致，文獻介紹的很多感染途徑都沒有離開這一點，我們的調查也顯示不管是正常PH范圍（PH≤4.5），還是異常PH范圍（PH≤4.5），都存在同樣的感染風險。 參 考 文 獻
[1] 呂榮.1006例白帶異常分泌物的病原學分析[J].中國醫學文摘（計劃生育婦產科學），2008，（06）.
[2] 李晶，苗志峰.女性陰道分泌物涂片染色結果分析[J].中國婦幼保健 ，2007，（26）.
[3] 范文燕，袁兆康.已婚育齡婦女生殖道感染現狀及干預研究[J].實用臨床醫學 ，2006，（06）.
軍人同志范文第4篇
【關鍵詞】 農村 最低生活保障 馬丁法 價格指標
馬丁法是我國農村最低生活保障制度實施過程中測定最低保障標準的主要方法。我國農村最低生活保障制度是指由地方政府為家庭人均純收入低于當地最低生活保障標準的農村貧困群眾，按最低生活保障標準，提供維持其基本生活的物質幫助。我國農村最低生活保障制度的實施，對改善農村貧困人口的生活狀況起到了極大的幫助。在政府提供基本生活的物質幫助時，必須確定最低生活保障對象。確定最低生活保障對象必須確定保障對象的家庭人均純收入和當地最低生活保障標準，即將家庭人均純收入低于當地農村最低生活保障標準的家庭成員作為最低生活保障對象。因此，準確計算保障對象的家庭人均純收入和合理確定當地最低生活保障標準，并使兩者具有可比性是執行農村最低生活保障制度的關鍵。
我國現在很多地方仍缺乏當地的農村最低生活保障標準。以云南為例，只是以國家農村貧困線作為標準來確定農村最低生活保障對象，然后根據地方財力確定幾檔補助標準，補助標準基本和最低生活保障標準脫節。在現實中，各地物價差異比較明顯，以國家農村貧困線作為當地農村最低生活保障標準，往往存在高估或低估農村最低生活保障標準的問題。高估農村最低生活保障標準導致地方財政壓力較大，低估標準導致應該救助的農村居民未納入政府救助。但各地為何不設定當地的農村最低生活保障標準，原因多方面的，其中一個主要原因是確定農村最低生活保障標準方法仍有許多待討論的問題。例如，我國確定最低生活保障標準的方法是馬丁法，據資料查閱顯示，在計算農民居民家庭人均純收入和馬丁法確定最低生活保障標準使用的價格指標缺乏統一標準。
一、農民居民家庭人均純收入的計算
國家和地方政府每年都會公布各地的農民居民家庭人均純收入的數據。根據國家統計局指標解釋說明“農村居民家庭純收入指農村常住居民家庭總收入中，扣除從事生產和非生產經營費用支出、繳納稅款和上交承包集體任務金額以后剩余的，可直接用于進行生產性、非生產性建設投資、生活消費和積蓄的那一部分收入。農村居民家庭純收入包括從事生產性和非生產性的經營收入，取自在外人口寄回帶回和國家財政救濟、各種補貼等非經營性收入；既包括貨幣收入，又包括自產自用的實物收入。但不包括向銀行、信用社和向親友借款等屬于借貸性的收入。”
從以上解釋可知，農民家庭純收入=家庭總收入-生產和非生產經營費用-生產性固定資產折舊-繳納稅款-上交承包集體任務金額。其中家庭總收入=生產性經營收入+非生產性的經營收入+自在外人口寄回帶回非經營性收入+國家財政救濟、各種補貼等非經營性收入。在家庭總收入中既包括貨幣收入也包括實物收入。貨幣收入比較容易計量，但實物收入的計量比較復雜，在現行的農村住戶調查中規定，實物收入的計算方法是將農戶當年生產的農產品產量扣除出售部分，分品種作價后計算得出。對各品種農產品的作價執行的是與市場掛鉤的原則，即以農民在市場出售農產品的價格為基礎，糧食、肉類打九折，其他農產品打八五折。如果在下年出售了上年的結余農產品，根據出售價格與上年實物作價的高低，將出售結余農產品的損益計入下年收入。對農作物副產品計算收入的原則是，只有用于生產和生活或明確用于出售的農作物副產品才計算收入，用于生產的農作物副產品在計算收入的同時也要計入生產費用中。農作物副產品作價計算收入的方法，原則上按實物折算收入的作價方法執行。農村居民家庭人均純收入=農村居民家庭純收入/農村居民家庭人口。
二、測定農村最低保障標準時指標使用
馬丁法是由在世界銀行工作的經濟學家馬丁·雷布林提出的一種計算貧困線的方法，有貧困高、低線之分。馬丁法低貧困線的測定方法是在首先測定食物貧困線的基礎上，利用回歸模型，把一些人均可支配收入或人均消費支出剛好能達到食物貧困線的居民戶的非食品支出計算出來。把由此求出的最低非食物支出作為非食物貧困線，加上已知的食物貧困線，就是馬丁法的低貧困線。這一貧困線指是一個靠犧牲最基本食物消費而獲取少量的非食品消費的住戶，其非食物支出是維持生存和正常活動必不可少的，也是最少量的。
低貧困線確定非食物貧困線依據是那些人均生活消費支出僅能達到食物貧困線的超貧困戶的情況，包含在低貧困線中的非食物貧困線是偏低的，因此，確定一條比低貧困線高一些的貧困線更符合實際。馬丁法高貧困線的測定方法是根據居民的人均食品支出與人均可支配收入或人均生活費支出的關系擬合適當的回歸模型求得。
馬丁法的高、低貧困線的測定都需要測定食物貧困線。因此，食物貧困線的合理準確測量是關鍵。食物貧困線的測量方法通常是按照正常人一天需要消耗2100卡路里標準計算。首先，根據當地農村居民家庭人均食品消費量中的消費結構和各種食品的卡路里含量計算人均每天各種食品的消費量，并調查當地居民各種生活食品消費的市場價格，計算人均各類食品消費量乘以市場價格之和，即可得到人均每天最低食物消費水平。將每天食物消費水平乘以360天，即為滿足農村居民食物最低消費的食物貧困線。
計算食物貧困線的關鍵因素是人均食品的消費量和當地食品的消費價格。按照這一計算方法，人均食品消費量在充分考慮了人的體能需要的基礎上，還考慮了不同地域人口的食品消費結構的差別，具有一定的合理性。但這一方法用于計算農村最低生活保障標準的時候，由于存在食物的自給自足問題，市場價格的選擇將會和農村居民人均純收入的計算不一致。
三、農村居民人均純收入與農村最低生活保障標準之間的價格指標矛盾
農村居民人均純收入與農村最低生活保障標準制定的矛盾主要體現在實物計量的價格指標。農村居民人均純收入在進行實物計量時，使用的是出售農副產品的價格指標計量，且分別按照糧食和肉類九折，其他八五折計算。而馬丁法的農村最低生活保障標準中食物貧困線的計算通常是以市場價格計算，而市場價格往往是農副產品出售價格的1—3倍。
如果直接用市場價格計算農村最低生活保障標準，則出現過高估計的問題。用此標準與農村居民收入相比，確定農村最低生活保障對象將把很多非貧困的農村家庭劃入到農村貧困家庭的范圍，這將違背了最低生活保障制定的救助原則，也可能使得政府財政無力負擔，從而使得應該被救助的對象得不到有效的救助。如果按照農副產品的出售價格計算農村最低生活保障標準，則出現過低估計問題。在農村實際生活中，不是所有的食品都可以自給自足，仍有很多食物需要從市場上夠買。這將嚴重低估農村最低生活保障標準，使得本無法滿足農村最低生活條件的居民卻得不到政府應有的救助。使用以上兩種價格指標計算馬丁法的農村最低生活保障標準，都將違背我國農村最低生活保障制度的救助原則。
四、價格指標統一的方法選擇
合理確定馬丁法中的農村最低生活保障標準、解決價格指標矛盾的關鍵是確定自留食物和購買食物的價格換算或是比例問題。解決方法有以下幾種選擇。
1、合理確定自留食物和市場購買食物比例
不同地方由于生產的食物品種不同、飲食結構不同，自留的食物比例也不完全相同；同一地方，不同收入層次的家庭，自留食物的比例也會有區別。通過調查當地農村貧困家庭的生活習慣，計算一個自留食物與購買食物比例。按照這一比例計算農村最低生活保障標準食物貧困線的各種食品的自留與購買比例，分別乘以農村家庭居民純收入中的收購價格和當地市場價格，求和即可得到食物貧困線。
2、合理確定折扣價格
折價比例仍然應以自留食物和市場購買食物的比例為依據，以此比例對農村家庭居民純收入中的收購價格和當地市場價格進行加權平均，以平均價格計算馬丁法中農村最低生活保障標準中食物貧困線。
3、調整農村家庭居民純收入中食物收入的計算價格
為了統一價格，可將農村家庭居民純收入中食物收入的計算價格轉為市場購買價格。作為解決方法可以解決價格指標的一致性的問題，但會使得農民收入水平偏高，農村居民不認可該收入水平的計算，從而引發社會矛盾。而且這一解決方法也會使得農村最低保障標準過高，增加政府的支出，影響政府的保障能力。
五、小結
建立各地方的農村最低保障標準是不斷完善我國農村最低生活保障制度的任務之一，現階段建立各地的農村最低保障標準仍有一些問題。其中最主要的問題之一是方法的統一問題。在此討論了馬丁法中價格指標的統一和一致性問題，并提出了三種解決方案。第一、第二種解決方案都比較適用，但第二種解決方案的操作相對簡單。
（注：本文屬國家社科基金項目“邊疆人口較少民族地區農村最低生活保障模式研究”（10XMZ050）。云南省教育廳基金項目“云南農村低保標準線測定的統計研究——以云南部分小少民族地區為例”（2011c179）。）
【參考文獻】
軍人同志范文第5篇
[摘要] 目的 探討姜黃素對銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa，Pa）感染的肺上皮細胞的體外抗炎效應。 方法 體外培養肺上皮細胞系NCI-H292，加入姜黃素和培養的Pa感染不同時間。Western blot檢測和實時定量PCR分別檢測NCI-H292細胞中紅素氧合酶1（Heme oxygenase-1，HO-1）mRNA和蛋白表達情況；ELISA檢測IL-1β和IL-8的產生。同時采用RNA干擾HO-1表達后，觀察對Pa誘導IL-1β和IL-8產生的影響。 結果 Pa感染NCI-H292細胞后，IL-1β和IL-8含量分別為（87.52±7.96）pg/mL和（205.63±34.25）pg/mL，50 μg/mL姜黃素孵育8 h后，其含量分別降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL，處理前后差異有統計學意義（P < 0.05）。同時，姜黃素能在轉錄翻譯水平分別調控HO-1 mRNA和蛋白表達，其中50 μg/mL姜黃素能將HO-1 mRNA增高19倍，蛋白表達水平提高4.8倍（P < 0.05）。HO-1 siRNA沉默HO-1表達后，與Pa組相比，IL-1β和IL-8分泌進一步增高。 結論 姜黃素可能通過上調HO-1的表達而發揮對肺上皮細胞的抗炎作用。
[關鍵詞] 血紅素氧合酶-1；姜黃素；銅綠假單胞菌；肺上皮細胞；白介素-1β；白介素-8
[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）11（b）-0013-04
Study of molecular mechanism of the effect of Curcumin on pseudomonas aeruginosa-induced cytokines production in lung epithelial cells
LI Bo LUO Jinhua HE Zhiguo
Department of Infectious Diseases， the Third Affiliated Hospital， University of South China， Hu′nan Province， Hengyang 421000， China
[Abstract] Objective To investigated the anti-inflammatory effects of Curcumin in pseudomonas aeruginosa -infected lung epithelial cells in vitro. Methods Lung epithelial cell line NCI-H292 was cultured in vitro， and was incubated with Curcumin and pseudomonas aeruginosa for various times. Expression of Heme oxygenase-1 （HO-1） mRNA and protein was detected by real-time PCR and Western blot， respectively； production of IL-8 and IL-8 was detected by ELISA. RNA interference was used to silent HO-1 expression， and pseudomonas aeruginosa-induced production of IL-1β and IL-8 were detected. Results After pseudomonas aeruginosa infection， the concentration of IL-1β and IL-8 was （87.52±7.96） pg/mL and （205.63±34.25） pg/mL， respectively. When incubated with 50 μg/mL Curcumin for 8 h， IL-1β and IL-8 decreased to （15.78±10.74） pg/mL and （49.82±14.28） pg/mL （P < 0.05）. Curcumin could also induce NCI-H292 cells expression of HO-1 mRNA at the transcriptional and translational level， and 50 μg/mL Curcumin increased the mRNA and protein 19 and 4.8 fold， respectively （P < 0.05）. Furthermore， silencing of HO-1 expression could increase NCI-H292 cell secretion of IL-1β and IL-8， as compared with pseudomonas aeruginosa group. Conclusion Curcumin exhibits anti-inflammatory activity through induction of HO-1 expression in lung epithelial cells.
[Key words] Heme oxygenase-1； Curcumin； Pseudomonas aeruginosa； Lung epithelial cells； IL-1β； IL-8
[基金項目] 湖南省衡陽市科學技術發展計劃項目（編號2012KJ28）。
血紅素氧合酶（Heme oxygenase-1，HO-1）是催化血紅素降解為CO、Fe2+和膽紅素的限速酶，并在機體的抗炎癥、抗氧化損傷中發揮重要作用[1]。研究顯示，銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa，Pa）感染后，肺上皮細胞可反饋性表達HO-1從而在一定程度上對抗Pa感染所誘導的氧化應激損傷[2-3]。因此，以HO-1為出發點，尋求相應的誘導劑，可能對Pa感染所導致的肺黏膜損傷具有重要意義。姜黃素（Curcumin）是從姜科姜黃屬植物的根莖中提取的一種植物多酚，大量研究證明，姜黃素具抗氧化、抗炎、清除自由基、抗腫瘤、抗炎癥以及對心血管系統、消化系統等多方面藥理作用[4-5]。本研究旨在探討姜黃素對肺上皮細胞表達HO-1的影響，并觀察其是否能抑制Pa感染所誘導的細胞因子產生。
1 材料與方法
1.1 主要試劑
姜黃素購自Sigma公司。SYBGREEN PCR Mix購自ABI，TRIZol為Invitrogen產品。cDNA逆轉錄試劑盒購自Fermentas；RIPA裂解液、ECL試劑盒為Pierce產品；IL-1β和IL-8 ELISA購自深圳博盛生物科技有限公司。BCA試劑盒購自江蘇碧云天生物技術公司，HO-1和β-actin多克隆抗體購自Santa Cruz。RPMI1640培養基和胎牛血清購自Gibco。
1.2 細胞和Pa菌培養
人肺上皮NCI-H292細胞細胞系購自中科院上海細胞庫，細胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培養基，在37℃ 5%CO2環境中培養。獲取Pa單菌落，接種于LB液體培養基，37℃培養3 h。隨后取200 μL菌液接種至LB瓊脂平板中，37℃條件下過夜培養。洗脫并收集平板上細菌，10 000 r/min條件下離心5 min，隨后用無菌PBS洗滌2次。采用分光光度計于650 nm波長下測定菌液OD值并計算細菌的濃度。
1.3 Pa感染和姜黃素處理
NCI-H292細胞鋪于96孔板（1×106/mL，0.1 mL），24孔板（1×106/mL，1 mL），或者6孔板（1×106/mL，2 mL），培養48 h，當其達到80%匯合度后，用無菌PBS漂洗，當細胞生長成片生長時，加入培養的Pa（1×109 cfu/mL）以及不同濃度（10、30 μg/mL和50 μg/mL）的姜黃素處理并繼續培養24 h。
1.4 實時定量PCR檢測HO-1 mRNA的表達
細胞處理結束后，根據試劑盒操作說明提取總RNA并逆轉錄為cDNA，產物用RNA酶處理。設計特異性引物用于檢測HO-1 mRNA表達的定量。HO-1其正向引物：5′ - GCTCAAAAAGATTGCCCAGA -3′；反向引物：5′ - GCGGTAGAGCTGCTTGAACT - 3′。50 μL反應體系包括：25 μL 2 × SYBR Green Master Mix（200 nmol/L dATP、dGTP和dCTP；400 nmol/L dUTP；2 mmol/L MgCl2，0.25 U UNG，0.625 U AmpliTaq Gold DNA聚合酶，25 pmol正向和反向引物，2 μL cDNA。利用ABI Prism 5700儀對HO-1進行擴增。首先50℃ 2 min，95℃ 10 min。隨后95℃ 15 s；60℃變形、延伸60 s，共40個循環。同時采用β-actin為內參。mRNA表達倍數改變采用2ΔCt表示，ΔCt=（Ct對照基因-Ctβ-acin）-（Ct待測基因-Ctβ-acin）。
1.5 Western blot分析HO-1蛋白表達
6孔板中細胞經PBS漂洗后，加入RIPA細胞裂解液裂解30 min，4℃ 12 000 g離心15 min，上清即為細胞總蛋白。裂解液中的蛋白用Bradford試劑在分光光度計中測定OD595處吸光度。50～70 μg總蛋白在5%～10%聚丙烯酰胺凝膠中電泳，并轉移至PVDF膜上，經5%無脂牛奶封閉后，分別用孵育一抗，二抗。ECL發光，顯影。
1.6 IL-1β和IL-8檢測
收集感染后24孔板中細胞上清液，按照ELASA 試劑盒說明書檢測IL-1β和IL-8水平。即100 μL細胞上清液加入到每個捕獲抗體包被的微孔板中，室溫孵育2 h。洗板后，加入100 μL檢測抗體，室溫繼續孵育2 h。隨后棄混合物，每孔加入100 μL streptavidin-HRP，室溫避光孵育20 min。最后，每孔加入100 μL底物，室溫避光孵育20 min，然后加入50 μL終止液，分光光度計檢測450 nm處OD值。
1.7 HO-1基因沉默實驗
HO-1基因特異性siRNA序列由Invitrogen公司合成（forward：5′-AACUUUCAGAAGGGCCAGGUGTT-3′，reerse：5′-CACCUGGC CCUUCUG AAAGUUTT-3′），轉染方法按照Ambion公司提供的試劑盒說明進行。生長于100 mm培養皿中的NCI-H292細胞加入0.5 mL瞬時轉染液（含8 μL siPORT Amine，20 nmol/L siRNA），使siRNA轉入細胞內。37℃、5% CO2條件下孵育5 h后，加入1.5 mL完全培養基并繼續孵育48 h，HO-1的干擾效果采用Western blot加以驗證。
1.8 統計學方法
計量資料數據以均數±標準差（x±s）表示，多組比較采用單因素方差分析并行Student's t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 姜黃素下調Pa感染所誘導的細胞因子產生
ELISA結果顯示，NCI-H292細胞未刺激時IL-1β和IL-8水平較低。Pa感染能顯著促進其分泌細胞因子。而經不同濃度姜黃素處理后，細胞因子產生顯著降低，見表1。
表1 姜黃素對Pa感染誘導細胞因子產生的影響（pg/mL，x±s）
注：與對照組比較，*P
2.2 姜黃素誘導NCI-H292細胞表達HO-1 mRNA
Pa感染雖然能輕度上調HO-1 mRNA表達，但經10～50 μg/mL姜黃素孵育8 h后，real-time PCR結果顯示，30 μg/mL姜黃素能使HO-1 mRNA增高2.4倍，而50 μg/mL姜黃素處理后，HO-1 mRNA增高了19倍，見圖1。
與Pa感染組比較，*P < 0.05；1.陰性對照組；2.Pa感染組；3.Pa+10 μg/mL姜黃素組；4.Pa+30 μg/mL姜黃素組；5.Pa+50 μg/mL姜黃素組；Pa：銅綠假單胞菌
圖1 姜黃素對NCI-H292細胞表達HO-1 mRNA的影響
2.3 姜黃素對NCI-H292細胞HO-1蛋白表達的影響
如圖2所示，不同濃度的姜黃素刺激NCI-H292細胞后，HO-1蛋白的表達量隨其濃度的遞增而增高，其中50 μg/mL姜黃素能將HO-1蛋白表達水平提高4.8倍。而內參β-acin在所有處理組中保持恒定。
1.陰性對照組；2.Pa感染組；3.Pa+10 μg/mL姜黃素組；4.Pa+30 μg/mL姜黃素組；5.Pa+50 μg/mL姜黃素組；Pa：銅綠假單胞菌
圖2 不同濃度對姜黃素誘導NCI-H292細胞表達HO-1蛋白的影響
2.4 RNA干擾HO-1表達后對Pa誘導IL-1β和IL-8的影響
HO-1 siRNA沉默HO-1表達后（圖3A），與Pa感染組相比，IL-1β和IL-8分泌進一步增高（圖3B）。
3 討論
HO-1 是一種誘導性表達酶。基因定位于染色體22q12，幾乎表達于所有組織，以內質網含量最高，在各種損傷性刺激下表達增高，又稱為熱休克蛋白32（HSP32）。HO-1能催化血紅素降解為CO、亞鐵離子和膽綠素，膽綠素隨后在膽綠素還原酶的作用下轉變為膽紅素。研究表明HO-1及其代謝產物在維護細胞穩態的過程中具有抗炎、抗增殖、抗氧化以及抗凋亡等作用[6]。例如，HO-1表達的降低或缺失（藥物性抑制作用或HO-1基因敲除小鼠）使機體對氧化應激的耐受性降低，從而誘發廣泛的氧化性損傷或器官衰竭[7]。Zhang等[8]的實驗證實了HO-1源性CO能加強cav-1和TLR4的相互作用，進一步減弱了LPS誘導的炎性反應。此外，HO-1源性膽紅素既可直接清除氧自由基，還可以通過抑制補體活化而減少炎癥細胞的聚集[1]。本實驗中以Pa感染的NCI-H292細胞為實驗對象，結果顯示，Pa感染后能增加IL-1β和IL-8水平，姜黃素能誘導NCI-H292細胞表達HO-1mRNA和蛋白，RNA干擾HO-1表達后，Pa誘導的IL-1β和IL-8的產生進一步增高，這表明HO-1能一定程度上對抗Pa感染所誘導的細胞因子表達，同時也從側面說明姜黃素可能通過上調HO-1表達從而具有一定的抗炎癥效應[9]，從這種意義上講，姜黃素誘導產生的HO-1可能是抑制肺炎癥損傷的重要因素。同時本研究也發現，RNA干擾HO-1表達后，不能完全抑制細胞因子的產生，這表明HO-1可能不是唯一調控IL-1β和IL-8產生的因素。因為細胞因子基因的上游也存在NF-κB、AP-1等轉錄因子結合位點，因此也可能參與IL-1β和IL-8的基因表達同時，HO-1產物膽紅素和CO具有抗氧化、抗炎癥、抗凋亡和舒血管活性，可對拮抗各種損傷因素導致的肺黏膜損傷[10]。此外，體內外研究證明，通過胃腸道給予動物和人服用高劑量姜黃素后，尚未發現明顯的毒性。這表明姜黃素具有良好的安全性，同時也有臨床實驗發現，給予志愿者單次口服高達8000 mg的姜黃素，均沒有出現明顯的毒性作用。姜黃素在胃腸道的吸收率為60%～66%。給藥后，主要通過腸道排泄，而靜脈給藥則主要通過膽汁排泄[11-12]，而本研究采用的最高濃度為50 μg/mL，因此即便服用也可達到誘導HO-1表達所需要的濃度。總之，Pa感染的肺腺癌細胞中，姜黃素通過上調HO-1表達，抑制了細胞因子的過度分泌。由于細胞因子過度分泌是各種感染性疾病發生的重要機制，此從這種意義上講，誘導姜黃素誘導的HO-1產生對于各種感染性疾病的防治可能具有重要意義。
[參考文獻]
[1] 馬小華，游曉星，吳移謀.HO-1在免疫調節中的作用及其相關信號轉導通路研究進展[J].中南醫學科學雜志，2011， 39（6）：705-709.
[2] Tsuburai T，Kaneko T，Nagashima Y，et al. Pseudomonas aeruginosa-induced neutrophilic lung inflammation is attenuated by adenovirus-mediated transfer of the heme oxygenase 1 cDNA in mice [J]. Hum Gene Ther，2004，15（3）：273-285.
[3] Caignan GA，Deshmukh R，Wilks A，et al. Oxidation of heme to beta-and delta-biliverdin by Pseudomonas aeruginosa heme oxygenase as a consequence of an unusual seating of the heme [J]. J Am Chem Soc，2002，124（50）：14879-14892.
[4] Kapakos G，Youreva V，Srivastava AK. Cardiovascular protection by curcumin： molecular aspects [J]. Indian J Biochem Biophys，2012，49（5）：306-315.
[5] Mohanty C，Das M，Sahoo SK. Emerging role of nanocarriers to increase the solubility and bioavailability of curcumin [J]. Expert Opin Drug Deliv，2012，9（11）：1347-1364.
[6] Wang XM，Kim HP，Nakahira K，et al. The heme oxygenase-1/carbon monoxide pathway suppresses TLR4 signaling by regulating the interaction of TLR4 with caveolin-1 [J]. J Immunol，2009，182（6）：3809-3818.
[7] Ben-Ari Z，Issan Y，Katz Y，et al. Induction of heme oxygenase-1 protects mouse liver from apoptotic ischemia/reperfusion injury [J]. Apoptosis，2013，18（5）：547-555.
[8] Zhang PX，Murray TS，Villella VR，et al. Reduced caveolin-1 promotes hyperinflammation due to abnormal heme oxygenase-1 localization in lipopolysaccharide-challenged macrophages with dysfunctional cystic fibrosis transmembrane conductance regulator [J]. J Immunol，2013，190（10）：5196-5206.
[9] Bansal SS，Vadhanam MV，Gupta RC. Development and in vitro-in vivo evaluation of polymeric implants for continuous systemic delivery of curcumin [J]. Pharm Res，2011，28（5）：1121-1130.
[10] Fagone P，Patti F，Mangano K，et al. Heme oxygenase-1 expression in peripheral blood mononuclear cells correlates with disease activity in multiple sclerosis[J]. J Neuroimmunol，2013，4（13）：1562-1568.
[11] Ahuja S，Kohli S，Krishnan S，et al. Curcumin： a potential therapeutic polyphenol，prevents noradrenaline-induced hypertrophy in rat cardiac myocytes [J]. J Pharm Pharmacol，2011，63（12）：1604-1612.
