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一、實驗?zāi)康?/p>
初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。
二、實驗原理
1.還原糖的鑒定原理 生物組織中普遍存在的還原糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性基團(tuán)(游離醛基或游離酮基),因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛羥基,因此叫做非還原性糖,不具有還原性。本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中還原糖存在與否,而不能鑒定非還原性糖。
斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05 g/mL的硫酸銅溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式如下:
CH2OH—(CHOH)4—CHO+2Cu(OH)2CH2OH—(CHOH)4—COOH+Cu2O+2H2O
用斐林試劑鑒定還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍(lán)色 棕色 磚紅色(沉淀)。
2.蛋白質(zhì)的鑒定原理 鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液(A)和質(zhì)量濃度為0.01 g/mL(B)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物,這個反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,因此,蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。
3.脂肪的鑒定原理 脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色,被蘇丹Ⅳ 染成紅色
三、實驗過程(見書P18)
四、實驗用品(見書P18)
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五、注意
1.關(guān)于鑒定還原糖的實驗,在加熱試管中的溶液時,應(yīng)該用試管夾夾住試管上部,并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部,同時試管口不要朝向?qū)嶒炚撸悦庠嚬軆?nèi)溶液沸騰時沖出試管,造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰,可以上提試管夾,使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用,切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3.蛋白質(zhì)的鑒定中先加雙縮脲A,再加雙縮脲B
今天的最后一節(jié)課是生物,我們在生物實驗室里做了個有趣的生物實驗。
我們排隊進(jìn)生物實驗室,只見里面整齊的擺放著十二張桌子。每張桌子上擺放了一臺顯微鏡,一個盛水的大燒杯,一個盛水的小燒杯,兩只滴管和一瓶稀碘液。我們?nèi)齻€人一桌,我和李傳明、任光勇分在一桌。
老師給我們發(fā)完了載玻片、蓋玻片、鑷子和吸水紙,講完了實驗步驟和重點(diǎn)難點(diǎn),就讓我們自己做實驗。
由于我對這節(jié)課掌握得比較好,李傳明和任光勇就讓我先做。我先對光。對光很簡單,把底下的反光鏡一調(diào)就好了。接著,我又開始做玻片標(biāo)本。我先擦干凈載玻片和蓋玻片,又在載玻片上滴了一滴水,在撕下一片洋蔥鱗片葉表皮,放到載玻片的水滴里,展開。由于我不會使用鑷子,不小心把一片蓋玻片給夾碎了。沒辦法,我只好用手把它放了上去。最后,我把玻片標(biāo)本染上色,撥片標(biāo)本就弄好了。
筆者認(rèn)為,應(yīng)該重視中學(xué)生物課外實驗的教學(xué),其理由如下:
一、課外實驗有利于培養(yǎng)學(xué)生的獨(dú)立工作能力
由于課外實驗是在課堂之外進(jìn)行的,所以實驗方案設(shè)計、實驗器材使用、實驗對象管理、實驗現(xiàn)象觀察和實驗結(jié)果分析、整理等環(huán)節(jié)均由學(xué)生獨(dú)立完成,實驗過程中遇到的各種問題也需要學(xué)生獨(dú)立解決,所以與課堂實驗相比,課外實驗更能發(fā)揮學(xué)生在學(xué)習(xí)活動中的主觀能動性,更有利于培養(yǎng)學(xué)生的獨(dú)立工作能力。
二、課外實驗有利于培養(yǎng)學(xué)生的實驗?zāi)芰?/p>
課堂實驗由于受時間、空間、人數(shù)、器材等的限制,學(xué)生觀察、分析和動手操作的機(jī)會大為減少,而課外實驗大多分散在野外或?qū)W生家庭中進(jìn)行,或者天地較為廣闊,或者參與實驗人數(shù)較少,再加上實驗延續(xù)時間較長,所用器材一般簡便易得或者容易自制,這就大大增加了學(xué)生觀察、分析及動手操作的機(jī)會,有利于培養(yǎng)學(xué)生的實驗?zāi)芰Α?/p>
三、課外實驗有利于培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)造能力
許多課外實驗均為探索性實驗,如初中生物第一冊 (上)中的“看看種子怎樣萌發(fā)和長成幼苗”、“看看根尖的哪一部分在伸長”、“觀察葉色與光照有沒有關(guān)系”、“看看水分沿著莖的什么部分上升”等。這些實驗需時較長,無法在課堂實驗中完成,所以安排為課外實驗。
學(xué)生在這樣的實驗中通過動手操作、管理,親自觀察、記錄,并且動腦筋去比較、分析和思考,不僅獲取了新的知識,而且學(xué)會了探求新知識的方法。久而久之,學(xué)生便逐步養(yǎng)成了進(jìn)行科學(xué)研究的初步能力和創(chuàng)造能力。
四、課外實驗有利于培養(yǎng)學(xué)生聯(lián)系實際的能力
生物學(xué)知識和人的生產(chǎn)、生活實踐有非常密切的關(guān)系,因此許多課外實驗的進(jìn)行不僅有利于學(xué)生掌握生物學(xué)知識,而且有利于學(xué)生將所學(xué)知識變成自己的本領(lǐng),掌握一定的技術(shù)及實際工作能力。如通過開展“向日葵人工輔助授粉”、“植物營養(yǎng)繁殖的操作”等課外實驗,學(xué)生不僅印證和掌握了有關(guān)知識,而且還學(xué)會了人工授粉、扦插、壓條和嫁接等實用技術(shù),培養(yǎng)了學(xué)生理論聯(lián)系實際的能力。
五、課外實驗有利于鞏固和深化課內(nèi)知識
由于受時間、地點(diǎn)等條件的限制,許多生物學(xué)知識的教學(xué)無法在課堂實驗中完成,單靠課內(nèi)講授又不夠具體、直觀,所以學(xué)生較難掌握。如“種子萌發(fā)過程”、“根的向地性生長過程”等教學(xué)內(nèi)容,在課堂實驗的有限時間內(nèi)無法看到結(jié)果,課堂講授也只能作一般性描述,因此學(xué)生聽后印象不深、掌握不牢。對于這樣的內(nèi)容,如果課后再輔之以課外實驗,既可克服時間限制,學(xué)生的觀察也會更具體、更直觀,當(dāng)然也有利于鞏固和深化課內(nèi)知識。
一、激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)生物的興趣
在初中生物實驗教學(xué)中,要想激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,教師必須解放思想,更新觀念,放開學(xué)生的手、腳,不要牽著學(xué)生一步一步地走,讓學(xué)生去模仿,教師要相信學(xué)生都能成功的完成實驗,允許學(xué)生實驗失敗,鼓勵他們從失敗中找原因,直至實驗成功,要讓學(xué)生從實驗中品嘗到成功的喜悅。例如,在第二節(jié)調(diào)查周邊環(huán)境中的生物中,調(diào)查校園、公園或農(nóng)田的生物種類,可以帶領(lǐng)學(xué)生到校園內(nèi)調(diào)查校內(nèi)的生物種類,并且可以把不認(rèn)識的生物拍照課后查找。這樣學(xué)生既了解了生物種類又熟悉了校園。但在放手實驗時,首先要讓學(xué)生帶著明確的目的去實驗、去探究,把知識從實驗中體會出來,然后引導(dǎo)學(xué)生總結(jié)實驗結(jié)論,這樣既體現(xiàn)了教師的主導(dǎo)作用,又發(fā)揮了學(xué)生的主體作用,才能充分調(diào)動學(xué)生學(xué)習(xí)生物學(xué)知識的積極性。
二、不同實驗方式的不同功能
觀察實驗是人對客觀事物的一種生動的感性認(rèn)識形式,它往往通過多種感覺器官的聯(lián)合活動,并在思維的參與下進(jìn)行的。例如,在觀察花的結(jié)構(gòu)中觀察時,必須對觀察者預(yù)先提出一定的目的或任務(wù),擬定一定的計劃,按計劃仔細(xì)地觀察,提出問題,尋求某種答案,這樣才能保證注意力集中在所要觀察的事物中。
演示實驗是初中生物實驗教材的一個重要組成部分,它具有現(xiàn)象鮮明、直觀、簡潔明了等特點(diǎn),它是課文文字?jǐn)⑹龅囊粋€重要輔助部分。例如,光合作用還能產(chǎn)生氧氣,教師演示學(xué)生觀察,現(xiàn)象明顯一目了然。離開了演示實驗的鋪墊,課文中的部分概念、原理及規(guī)律就顯得蒼白無力,如空中樓閣,飛來之峰了。
學(xué)生實驗是學(xué)生學(xué)習(xí)活動的一個不可缺少的重要組成部分。新課程標(biāo)準(zhǔn)倡導(dǎo)學(xué)生的學(xué)習(xí)方式為“自主、合作與探究”,而學(xué)生分組實驗正是這種學(xué)習(xí)方式的一個具體體現(xiàn),也是落實“雙基”的一個重要環(huán)節(jié)。例如,在學(xué)生分組實驗中,練習(xí)使用顯微鏡、制作并觀察植物細(xì)胞臨時裝片和觀察認(rèn)得口腔上皮細(xì)胞三節(jié)實驗課中雖然也是觀察實驗但動手能力要求比較高,通過三節(jié)的實驗練習(xí),學(xué)生的觀察能力,動手能力得到了很大的提高。實驗前先將實驗步驟由繁化簡,再指導(dǎo)學(xué)生在預(yù)習(xí)中抓住每一步的關(guān)鍵,并在每個實驗步驟 中規(guī)范操作,這樣才可以收到好的實驗效果。中規(guī)范操作,這樣才可以收到好的實驗效果。如在學(xué)習(xí)使用顯微鏡時,如果用左眼觀察,要注意糾正學(xué)生用右眼觀察或閉著右眼的習(xí)慣;轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器時,應(yīng)及時糾正學(xué)生轉(zhuǎn)換物鏡的錯誤操作。這樣學(xué)生就能很快對好光,觀察到標(biāo)本在視野中的圖像。這樣學(xué)生的合作、探究能力,分析問題、解決問題的思維能力,以及動手操作技能都得到了鍛煉與提高。在實驗中讓學(xué)生體味了生物課其樂無窮,同時也鍛煉了他們各方面的能力 。
三、培養(yǎng)學(xué)生發(fā)散思維能力
愛因斯坦說過“提出一個問題比解決一個問題更加重要,因為后者僅僅是方法和實驗過程,而提出一個問題則要找到問題的關(guān)鍵、要害。”發(fā)現(xiàn)問題是解決問題的起點(diǎn),而且也是解決問題過程中的一種動力,它孕育著希望的光芒、美好的情景,我們在教學(xué)中要盡量鼓勵學(xué)生積極開動腦筋,希望他們通過自己不懈的努力和辛勤的勞動去發(fā)現(xiàn)問題。例如,在研究“消化”的實驗里所提出的假設(shè): “細(xì)胞膜只能透過小分子物質(zhì),食物中的大分子物質(zhì)必須先變成小分子物質(zhì)才能透過細(xì)胞膜。”這個假設(shè)的理論根據(jù)是:(1)人和動物都是由細(xì)胞構(gòu)成的;(2)生活的細(xì)胞需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì);(3)營養(yǎng)物質(zhì)是通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞里的;(4)人和動物的營養(yǎng)物質(zhì)來源于食物;(5)食物營養(yǎng)成分中有大分子物質(zhì)。通過生物實驗使學(xué)生理解科學(xué)研究的基本過程,經(jīng)過反復(fù)訓(xùn)練,從而提高學(xué)生分析問題和解決問題的能力。
關(guān)鍵詞:微生物;實驗室安全;管理
隨著2015年版《中國藥典》對微生物檢驗的要求越來越嚴(yán)格,以及國務(wù)院《病原微生物實驗室生物安全管理條例》的與實施[1],基層微生物實驗室的工作日益繁重。但安全問題仍是工作中的重點(diǎn)[3]。由于微生物實驗室與其他實驗室相比,具有一定的特殊性,即微生物實驗室要接觸病原微生物和生物指示劑所引發(fā)的生物安全問題。
在基層微生物實驗室中,檢驗生產(chǎn)檢品時的微生物感染預(yù)防問題;微生物培養(yǎng)物污染環(huán)境問題;微生物菌種安全保藏問題;生物指示劑保管問題;微生物廢棄物處理問題等,是噬待實驗室管理人員重視并加以解決的問題。本文結(jié)合多年在基層微生物實驗室工作及管理經(jīng)驗,認(rèn)為需做好以下幾方面的工作。
1.實驗室人員管理是基層微生物安全管理的核心
在影響實驗室生物安全的諸多因素中,人是最主要也是最重要的因素。實驗室的工作人員要認(rèn)真學(xué)習(xí)生物安全知識,強(qiáng)化安全意識[4]。只有保證基層微生物實驗室人員具有良好的生物安全意識,操作技能和對生物安全設(shè)備良好操作和使用,才能保證在檢驗生產(chǎn)檢品時微生物感染預(yù)防的問題。因此,筆者認(rèn)為,首先要做好基層實驗室人員的管理工作。
1.1強(qiáng)化基層實驗室工作人員生物安全知識
定期對員工進(jìn)行生物安全知識培訓(xùn),對新進(jìn)人員也要進(jìn)行相關(guān)安全方面的培訓(xùn),保證實驗室人員掌握個人防護(hù)、實驗室操作技術(shù)規(guī)范、消毒與滅菌、菌種保藏、生物指示劑保管與使用、感染性廢棄物的處理,建立培訓(xùn)檔案。全面提高基層實驗室工作人員對生物安全工作的認(rèn)識水平。
2.規(guī)范的消毒與滅菌是保障基層實驗室生物安全的關(guān)鍵
基層實驗室由于每天需要完成大量的檢驗工作,加之品種豐富,產(chǎn)生的微生物培養(yǎng)物也日以增多。因此必須對含有病原微生物的廢物進(jìn)行滅菌處理,才能作為普通廢物處理,對操作中可能產(chǎn)生的迸濺或泄漏,必須通過消毒處理,以達(dá)到對操作人員的保護(hù),每次實驗后,要按照實驗室衛(wèi)生消毒規(guī)范進(jìn)行消毒處理。
2.1實驗室消毒實驗室空氣消毒可采取紫外線照射的方法。另外每周安排進(jìn)行一次臭氧殺菌;地面和物體表面消毒可采用配制一定濃度的酸酚或堿酚消毒劑進(jìn)行擦拭。
2.2生物安全柜消毒每次進(jìn)行實驗前后用75%酒精擦拭工作臺面,四周及玻璃擋板內(nèi)外側(cè)等部位來消毒。
2.3儀器消毒制備菌液使用的移液槍、移液吸頭、離心機(jī)等在使用前后都應(yīng)進(jìn)行消毒,滅菌。
2.4其他一般的實驗器材采用壓力蒸汽和干熱滅菌消毒,實驗人員每次使用后要消毒滅菌。實驗后要及時對使用的實驗臺面和有關(guān)儀器設(shè)備進(jìn)行消毒滅菌處理,嚴(yán)禁存放不必要的物品,保持潔凈氣流不受干擾。
3.落實好微生物菌種保藏及生物指示劑管理制度
實驗菌種是生產(chǎn)單位微生物檢驗部門的重要生產(chǎn)資源,故而它是細(xì)菌工作中不可缺少而又具有傳染性的生物學(xué)因子。為了保證安全,對菌種必須妥善保存和保管。
生物指示劑作為產(chǎn)品工藝驗證的實驗用品,因含有耐熱芽孢細(xì)菌,故其管理方法應(yīng)與菌種管理一致。
4.實驗室廢棄物管理
實驗室廢棄物的處理是控制實驗室生物安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。切實安全的處理感染性廢棄物,必須掌握生物安全廢棄物的種類,并嚴(yán)格執(zhí)行相應(yīng)的處理程序,從而保證對實驗室感染和周圍環(huán)境影響的控制[5]。
由于生物實驗室感染性廢棄物屬于醫(yī)療廢棄物,必須按照《醫(yī)療廢棄物管理辦法》[2]規(guī)范廢棄物處置,防止感染發(fā)生。
4.1對感染性廢棄物進(jìn)行分類收集
(1)實驗過程中的固體感染性廢棄物應(yīng)棄置于專用的固體感染性廢棄物收集容器。
(2)實驗過程中產(chǎn)生的液體感染性廢棄物應(yīng)放在硬質(zhì)、防漏且耐高溫高壓的,有標(biāo)識的專用容器中,對于產(chǎn)生的損傷性廢物,應(yīng)棄于耐扎容器內(nèi)。
4.2對感染性廢棄物進(jìn)行處理
在實驗室內(nèi)所有棄置的廢棄物,從實驗室取走之前,應(yīng)經(jīng)過高壓蒸汽滅菌處理,使其達(dá)到生物安全。其滅菌處理的效果要經(jīng)過驗證,廢棄物應(yīng)按規(guī)定統(tǒng)一存放、統(tǒng)一處理。
5結(jié)語
基層微生物實驗室是檢驗部門重要組成部分,實驗室生物安全直接關(guān)系到實驗室工作人員的生命安全,同時也對生產(chǎn)的藥品提供質(zhì)量的保證,因此實驗室工作人員應(yīng)自覺提高生物安全意識,在實驗過程中及實驗之后的物品處理中嚴(yán)格遵守相關(guān)的管理條例,加強(qiáng)對菌種、生物指示劑及儀器設(shè)備的管理,才能確保基層微生物實驗室的生物安全,保障生產(chǎn)企業(yè)的順利生產(chǎn)。
參考文獻(xiàn)
[1] 中華人民共和國國務(wù)院《病原微生物實驗室生物安全管理條例》.
[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢棄物管理辦法》.
[3] 季建軍康英芳微生物檢驗實驗室管理的幾點(diǎn)體會[J]檢驗醫(yī)學(xué)教育 2005,12(1):6-7.