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(1溫州市農業科學研究院,浙江溫州325006;2溫州科技職業學院,浙江溫州325006)摘要:為給‘甌雪60 天’制種母本9901A(隱性核不育系)的快速繁殖提供依據,研究了花椰菜花球采收期、20 cm抽薹期、開花期不同部位取材外植體對誘導培養的影響。結果表明:不同生育階段不同部位取材外植體的愈傷組織誘導率均為100%。不同階段不同部位外植體誘導出芽效果存在差異,以開花期花托誘導出芽數量最多,采收期3 mm厚花枝誘導出芽數量次之,20 cm抽薹期則誘導不出芽。4℃低溫處理1 天采收期花球表面花枝的誘導效果較好,而低溫處理3、7 天的誘導效果有所降低。
關鍵詞 :外植體選取;低溫處理;花椰菜不育系;誘導培養
中圖分類號:S635.3 文獻標志碼:A 論文編號:2014-0205
基金項目:溫州市科技計劃項目“甌雪60 天花椰菜制種技術研究及開發利用”(N20100060),“松花型花椰菜種質資源創新與新品種選育研究”(N20110001)。
第一作者簡介:劉慶,男,1979 年出生,浙江蒼南人,助研,本科,主要從事花椰菜育種研究。通信地址:325006 溫州市六虹橋路1000 號溫州市農業科學研究院,Tel:0577-86181080,E-mail:35147127@.com。
通訊作者:朱世楊,男,1982 年出生,江蘇如皋人,講師,碩士,主要從事花椰菜育種與植物生理研究。通信地址:325006 溫州市六虹橋路1000 號溫州市農業科學研究院,Tel:0577-86181080,E-mail:zhushiyang2000@163.com。
收稿日期:2014-03-10,修回日期:2014-07-05。
0 引言
‘甌雪60 天’是溫州市農業科學研究院利用花椰菜隱性細胞核雄性不育系9901A 為母本,優良自交系9908 為父本,培育而成的花椰菜雜交組合。該組合于2009 年12 月通過浙江省非主要農作物品種審定委員會審定,審定編號為浙(非)審蔬20090016。該組合已在浙江溫州、四川成都等地方大面積推廣應用。由于‘甌雪60 天’制種母本9901A 系隱性細胞核雄性不育系,不易通過種子繁殖母本進行制種,限制了其大規模的推廣應用。應用植物組織培養技術可以繁殖保持花椰菜的優良特性。前人已經開展了一些花椰菜組織培養方面研究。如吳麗芳等[1]以花球為外植體研究了花椰菜不育系組培快繁和無糖生產技術;張小玲等[2]以未受房、花托、花序軸為外植體進行了花椰菜離體培養誘導成苗研究;黃俊軒等[3]以花椰菜葉片為外植體研究了其離體再生技術;許端祥等[4]則以腋芽為材料開展了花椰菜自交不親和系的組培快繁研究。然而,關于花椰菜隱性細胞核雄性不育系不同生育階段不同部位外植體誘導培養的研究尚未見報道。為此,筆者以‘甌雪60 天’核不育系母本9901A 為材料,開展不同生育階段不同部位取材外植體對誘導培養影響的研究,以為‘甌雪60 天’制種母本快速繁殖提供參考。
1 材料與方法
1.1 試驗設計
1.1.1 外植體選取處理以‘甌雪60 天’母本9901A 花球采收期(2010 年12 月30 日)、20 cm抽薹期(2011 年1月21 日)、開花期(2011 年3 月10 日)3 個生育階段不同部位外植體為接種材料,設置處理:(1)采收期花球表面3 mm厚花枝;(2)20 cm 抽薹期由上端往下數的頂端以及第一、二、三分枝(圖1 左);(3)開花期由頂端往下數的花托、花柄以及第一、二分枝(圖1 右)。
1.1.2 外植體低溫處理以‘甌雪60 天’母本9901A 采收期花球表面3 mm厚花枝為接種材料,于4℃冰箱中分別低溫處理0、1、3、7 天,然后供接種用。
1.2 誘導培養
1.2.1 誘導培養基配方所用培養基為MS+2,4-D0.01mg/L+BA 1 mg/L +NAA 0.001 mg/L,蔗糖濃度為3.0%,瓊脂濃度為0.7%,pH 5.8。
1.2.2 無菌接種誘導培養取上述外植體無菌接種,然后置于培養室(溫度24±2℃,每天光照12 h,黑暗12 h)中誘導培養。接種時將外植體切成2~3 mm,每瓶接種5 小塊,每處理接種30 瓶。50 天后,隨機挑選4 瓶,統計愈傷組織誘導率和誘導芽數。
愈傷組織誘導率=(帶有愈傷組織外植體數/接種外植體數)×100%;
誘導芽數=誘導出的芽數/接種外植體數。
1.3 數據分析
數據用Excel分析軟件進行統計和分析。
2 結果與分析
2.1 外植體選取時期和部位對花椰菜誘導培養的影響
由表1 可知,‘甌雪60 天’母本9901A花球采收期、20 cm抽薹期、開花期3 個生育階段不同部位外植體接種后愈傷組織誘導率均100%。但是,不同生育階段不同取材部位外植體的誘導出芽數存在差異。其中,采收期3 mm厚花枝誘導芽數為3 個/外植體;20 cm抽苔期各部位取材均誘導不出芽;開花期花托、花柄以及第一、二分枝誘導芽數分別為3.7、2.7、2.7、1.2 個/外植體。
2.2 外植體低溫處理時間對花椰菜誘導培養的影響
由表2 可以看出,適宜時間的4℃低溫處理可以提高花椰菜采收期花球表面3 mm厚花枝的誘導效果。其中4℃低溫處理0、1、3 天,愈傷組織誘導率均為100%;4℃低溫處理7 天,愈傷組織誘導率則降為75%。4℃低溫處理0、1、3、7 天,誘導芽數分別為3、5、2.5、1 個/外植體。說明,外植體4℃低溫處理1 天誘導效果最佳。
3 結論與討論
‘甌雪60 天’母本9901A 為隱性核基因控制的不育系,沒有保持系,無法自身繁殖,用組織培養方法可以在短期內擴繁獲得大量不育系種苗,滿足生產上制種的需要[5]。誘導培養是花椰菜組織培養的一個關鍵階段,所用外植體可以是未受房、花托、花序軸、葉片、葉柄、腋芽、莖節段、花球等組織器官,但不同外植體及其選取時期與部位對誘導效果產生的影響可能不同[1-4,6-8]。因此,對‘甌雪60 天’母本9901A 不同生育階段不同部位取材外植體誘導培養研究具有重要的意義。
本研究發現,‘甌雪60 天’母本花球采收期、20 cm抽薹期、開花期3 個生育階段不同部位取材外植體的愈傷組織誘導率均為100%。說明取材時期和部位對花椰菜愈傷組織誘導影響不大。這與李曙軒和裘文達在‘80 天’花椰菜花球組織或花序柄組織培養中發現有90%~100%的切段都能形成愈傷組織的結論基本一致[8]。但是,花椰菜誘導出芽效果因外植體取材時期和部位而異,其中開花期花托誘導出芽效果最好,采收期3 mm厚花枝效果次之,而20 cm抽苔期則誘導不出芽。說明,開花期花托是‘甌雪60 天’母本誘導培養的理想材料。這與張小玲等以花椰菜‘圓葉80 天’和‘青葉100 天’為材料,研究發現花椰菜誘導出芽數量以花托為最多的結果是一致的[2]。
低溫處理能夠促進植物誘導培養。本研究還發現,花椰菜采收期花球外植體4℃低溫處理1 天,誘導芽數最多,而4℃低溫處理3、7 天愈傷組織誘導率和芽數均有所降低。說明,4℃低溫處理1 天誘導效果最佳,也表明低溫處理能夠促進愈傷組織誘導及芽分化。這與前人在結苜蓿[9]、縷草[10]、擬南芥菜[11]、小麥[12]、馬鈴薯[13]、油茶[14]、胡麻[15]等研究結果有所類似,但這一結果的具體作用原理還有待進一步的探討研究。在實際生產中,可以考慮將母本采收期割球采下的花枝4℃貯藏后接種誘導培養,既能提高誘導芽數,又可提高割球采下花枝的利用價值,而不會影響單株花數降低種子產量;同時可提早進入增值擴繁提高組培效率。
綜上所述,‘甌雪60 天’母本花球采收期、20 cm抽薹期、開花期不同部位取材外植體的愈傷組織誘導率均為100%。但是誘導出芽效果以開花期花托最好,采收期3 mm 厚花枝次之,20 cm 抽薹期誘導不出芽。4℃低溫處理1 天可以提高采收期花球表面花枝誘導效果,但低溫處理3、7 天后誘導效果有所降低。本試驗結果是基于單個花椰菜不育系品種誘導培養的,研究結果是否適用于其它花椰菜不育系材料尚需進行驗證。此外,誘導培養僅僅是花椰菜組織培養的一個階段,還需對其繼代培養和生根培養做進一步的探索。
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【關鍵詞】 股骨轉子間骨折; 不穩定型; 側臥位; 手法牽引復位; 臨床療效
【Abstract】 Objective:To explore the outcome of proximal femur nail anti-rotation (PFNA) on patients with unstable intertrochanteric fracture in lateral position.Method:From January 2014 to May 2015,44 cases of unstable intertrochanteric fractures treated with PFNA were selected.They were divided into two groups according to different treatment way,22 cases in each group.Group A received manual reduction in lateral position,while group B received reduction on a traction bed in horizontal position.The quality of fracture reduction,intraoperative blood loss,operation time, healing time,follow-up time,failure rate of reduction and Harris scores one year post-operation of two groups were recorded.Result:The differences showed statistically significant of the quality of fracture reduction,operation time,intraoperative blood loss and Harris scores one year post-operation between two groups(P0.05).Conclusion:Compared with reduction on a traction bed in horizontal position,manual reduction in lateral position used in unstable intertrochanteric fracture patients decreases operative difficulties,saves operation time and reduces intraoperative hemorrhage,has an obvious advantage and wider clinical application prospect.
【Key words】 Intertrochanteric fracture; Unstable intertrochanteric fracture; Lateral position; Manual reduction; Clinical effect
First-author’s address:Yunlong Orthopaedic Hospital of Baotou,Baotou 014010,China
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2017.04.017
股骨轉子間骨折是股骨頸基底部關節囊遠端與小轉子水平線之間的骨折,骨折線常橫過大小轉子間或沿轉子間嵴走行,一般不穿越兩轉子,是常見的髖部骨折之一[1-3]。目前臨床上公認的治療原則是良好的內固定和早期的功能鍛煉[4-5]。一般的股骨轉子間骨折移位均可通過牽引床牽引復位得到糾正,但對于一些像A2、A3型的股骨轉子間骨折由于骨折類型復雜,骨折端不穩定,牽引床復位難度較大,效果較差。筆者在既往臨床實踐中嘗試側臥位手法牽引復位治療這一類型的骨折,發現側臥位手法牽引復位較牽引床牽引復位更具優勢,現將具體手術治療方法和研究結果報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 選取2014年1月-2015年5月在本科住院的44例采用股骨近端防旋髓內釘(Proximal femur nail anti-rotation,PFNA)內固定治療的難復性股骨轉子間骨折患者作為研究對象,其中男28例,女16例;年齡48~76歲,平均65.27歲;左側18例,右側26例。均為新鮮骨折,骨折類型按AO分型:A2型24例,A3型20例。所有患者均在傷后5 d內完成手術,根據患者術中和采用的復位方法,分為側臥位手法牽引復位組(A組)和平臥位牽引床牽引復位組(B組),每組22例。兩組患者的性別、年齡、BMI指數、損傷側別、受傷至手術時間比較差異均無統計學意義(P>0.05),見表1。該研究經過醫院倫理學委員會批準通過,并征得患者知情同意。
骨折復位良好是固定穩定的基礎和前提,股骨轉子間骨折的復位質量對術后療效和功能恢復有重要影響[24-25]。對于髖部骨折復位質量的評價方法目前大部分研究都采用了Fogagnolo改良的Baumgaertner評價標準,該標準既考慮到了骨折塊移位的問題,同時又考慮到了頸干角和側方成角的問題。本研究根據這一標準,對側臥位與牽引床牽引復位股骨近端防旋髓內釘治療不穩定型股骨轉子間骨折療效進行比較。A組患者復位效果良好17例,一般5例,差0例,復位效果良好率為77.27%;B組患者復位效果良好9例,一般11例,差2例,復位效果良好率為40.91%,A組顯著高于B組。因為牽引床往往能較好地復位頸干角,而對于側方成角,因為骨折遠端的阻擋導致難以糾正,需要在術中借助其他輔助方法糾正。而側臥位牽引時,可以大幅度向各個方向活動股骨遠端,股骨骨折遠端阻擋導致的近端側方成角移位也可以輕松得到滿意的復位效果。當然,不管是側臥位還是牽引床牽引復位都存在一定的]合復位失敗率,需要切開復位,牽引床牽引復位的失敗通常要高一些。術后1年患者髖關節Harris評分兩組比較差異也有統計學意義(P
綜上所述,股骨近端防旋髓內釘治療不穩定型股骨轉子間骨折時,側臥位手法牽引復位比牽引床牽引復位更具優勢,具有操作簡單、復位效果好、手術時間短、出血量少,臨床療效好的特點,值得臨床推廣應用,特別是在基層醫院開展。
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