土壤滅菌的方法

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土壤滅菌的方法范文第1篇

關(guān)鍵詞：生物土壤添加劑微生物

Abstract: soil microorganism quantity and activity is marked a soil fertility index [1]. Due to the use of fertilizers, few don't even organic fertilizer, and also as a result of the cause of the continuous cropping obstacles, use normal cultivation and management measures will also happen weak growth potential, yield and quality of the decline of the phenomenon. Many years continuous water management and should not cause soil environmental degradation, soil fertility dropped, and the soil microbial flora disorder, crop the soil-borne increased year by year [2], to crop yield and quality caused very big effect. This kind of phenomenon serious threat facilities vegetables sustainable development. In recent years, research showed that soil microbial can help plant nutrients to adapt to stress environment, improving soil nutrient absorption effect [3].

Keywords: biological soil additives microorganisms

中圖分類號(hào)：G633.91文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：

土傳病害一直是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中難以解決的問題，為害嚴(yán)重地塊會(huì)造成全田毀滅。目前我們亟待一種防病措施來更好的發(fā)展我國的蔬菜產(chǎn)業(yè)，特別是黃瓜的生產(chǎn)——它作為本市主要栽培的保護(hù)地蔬菜品種，多年的連作造成枯萎病、根腐病、疫病等土傳病害的發(fā)生，對(duì)其產(chǎn)量造成了很大威脅，損失可達(dá)20－30％，嚴(yán)重的可達(dá)50％以上，目前解決方法以嫁接和藥劑處理土壤為主。一些農(nóng)業(yè)措施如休閑、輪作、熏蒸等效果不錯(cuò)，但受環(huán)境及經(jīng)濟(jì)條件限制無法普遍實(shí)行。利用太陽能殺菌及生物防治，目前正在開發(fā)研究中。生物土壤添加劑不僅能夠防治傳病害，而且能夠改良土壤，增加土壤的有機(jī)質(zhì)含量及有益微生物的數(shù)量，維持自然界的平衡。與化學(xué)防治相比，生物土壤添加劑的應(yīng)用減少了農(nóng)藥污染及土壤中有毒物質(zhì)的積累[4]。

利用拮抗菌對(duì)土傳病原菌的生物防治國內(nèi)外已有大量報(bào)道，然而許多菌株田間防效并不理想，原因之一是直接引用客土的拮抗微生物不能很好地在土壤中定居成為優(yōu)勢(shì)種群。有機(jī)添加物的施入在某種程度上起到“接種”作用，有機(jī)物本身已帶有大量生物，其帶入的活性有機(jī)碳源有是微生物繁殖的主要能源，因此利用有機(jī)添加物培養(yǎng)拮抗菌，不僅可以鞏固拮抗菌在土壤中的定植，而且增強(qiáng)了抑菌的效果。1999年劉瓊光報(bào)道利用拮抗菌和土壤添加劑同時(shí)施入土壤對(duì) 煙草青枯病的防治效果，顯著好于兩種單獨(dú)使用的效果[5]。1994年上海農(nóng)科院周新根報(bào)道利用由蠶豆粉、無機(jī)鹽制成的“MX”有機(jī)添加物，滅菌后分別培養(yǎng)三種拮抗菌株，1%的添加量對(duì)辣椒疫病、番茄立枯病、猝倒病具有很好的防效，顯著高于單用。在滅菌土壤中培養(yǎng)四周后拮抗菌的種群密度比單獨(dú)施用拮抗菌的處理高50-100倍，且拮抗菌存活時(shí)間較長[6]。

木霉菌在真菌中具有重要生防價(jià)值，以其存在的廣泛性、在環(huán)境中易定植、繁殖速度快等優(yōu)點(diǎn)受到人們的重視。20世紀(jì)70年代以來人們對(duì)生防機(jī)制作了深入研究，證實(shí)木霉菌對(duì)植物病原真菌具有競(jìng)爭作用、重寄生作用、抗生作用、誘導(dǎo)植物抗病性等生防機(jī)制，并從分子水平上探索了其作用機(jī)理[7—9，12]。同時(shí)人們以木霉菌為材料對(duì)多種植物病害的防病效果進(jìn)行了大量小型試驗(yàn)[10，11，13]，取得了較好效果，并以此為基礎(chǔ)研制出了木霉菌生防農(nóng)藥。

本試驗(yàn)就是應(yīng)用有機(jī)、無機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)混合后制成的生物土壤添加劑。明顯改變了土壤中木霉菌的數(shù)量。利用太陽能滅菌和生物土壤添加劑的共同作用，是防治作物病害的一項(xiàng)重要措施，國內(nèi)外對(duì)此均有研究報(bào)道。生物土壤添加劑的防病機(jī)制綜合為無機(jī)鹽的抑菌作用、有益微生物的拮抗作用、營養(yǎng)物質(zhì)的促長作用、有機(jī)物質(zhì)增強(qiáng)土壤病原菌的腐生性，削弱其致病性。利用土壤添加劑與其他防治方法相比有很多優(yōu)點(diǎn)，生物土壤添加劑為拮抗菌及有益叢枝菌根的生物土壤添加劑，緩解設(shè)施栽培日益嚴(yán)重的連作障礙，減輕病害的發(fā)生，提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量;有利于環(huán)保，對(duì)人畜安全，無污染；促進(jìn)有害生物的無害化治理及可持續(xù)發(fā)展；有力于質(zhì)量安全農(nóng)產(chǎn)品及綠色食品的生產(chǎn)；減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，改善土壤的理化性質(zhì)，其應(yīng)用前景廣泛。

2材料和方法

2.1 供試土壤

研究在植物保護(hù)研究所院內(nèi)進(jìn)行。土壤為大田表土，土樣1為耕作層(0-15cm),土壤滅菌(微生物含量最少)；土樣2為耕作層土(0-15cm)，土壤未滅菌，(微生物含量最多)；土樣3為亞表層土壤(15-30cm),土壤為滅菌(微生物含量次之)。

2.2 培養(yǎng)基的配制

2.2.1 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制

牛肉膏1.5g、蛋白胨5g、NaCl 2.5g、瓊脂7.5g、水500ml、PH為7.0—7.2。

2.2.2 高氏一號(hào)培養(yǎng)基配制

可溶性淀粉10g、NaCl0.25g、KNO30.5g、FeSO45mg、K2HPO40.25g、MgSO4·7H2O 0.25g、瓊脂10g、水500ml、PH為7.2—7.4。

2.2.3 馬丁培養(yǎng)基配制

葡萄糖5.0g、蛋白胨2.5g、KH2PO40.5g、瓊脂10.0g、水500ml、PH為6.4。

2.2.4 PDA培養(yǎng)基配制

土豆200g、瓊脂15g、葡萄糖20g、水1000ml、孟加拉紅33.3ml。

土壤滅菌的方法范文第2篇

關(guān)鍵詞：高溫滅菌；GM；蘆筍；生長；礦質(zhì)營養(yǎng)

中圖分類號(hào)：S644.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2012）11-0061-05

Effect of High-Temperature Sterilization to Matrix on Growth and

Mineral Nutrient Absorption of Asparagus Mycorrhizal Seedlings

Sun Chao1，2， Jin WenJuan2，3， Li WenLu4， Ma Jun2，

Shang Hui1，2， Bai LongQiang1，2，He ChaoXing2*

（1.College of Horticulture Science and Engineering，Shandong Agricultural University，Taian 271018，China；

2. Institute of Vegetables and Flowers，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081，China；

3.College of Forestry，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，China；

4.College of Horticulture，Hebei Agricultural University，Baoding 071001，China）

Abstract To determine the effects of Glomus mosseae（GM） on asparagus seedlings in high-temperature sterilized and non-sterilized matrix （peat：vermiculite=2∶ 1， V/V）， the pot experiments with Jersey Knight as material were conducted by inoculating GM to asparagus. The results showed that GM inoculation greatly promoted the growth of asparagus seedlings， formed stronger infection to asparagus roots， and enhanced the absorption to nine mineral nutrients. Meanwhile， GM inoculation in non-sterilized matrix had much more contribution to seedling growth and mineral nutrients absorption. So， non-sterilization was better for culture of asparagus mycorrhizal seedlings.

Key words High-temperature sterilization； GM； Asparagus； Growth； Mineral nutrient

蘆筍（Asparagus officinalis L）又名石刁柏、龍須菜，為百合科天門冬屬多年生宿根草本植物。因其富含皂甙、蘆丁、氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素等多種營養(yǎng)物質(zhì)，且具防癌、抗癌、降血壓、降血脂、預(yù)防心血管疾病等功效，素有“蔬菜之王”的美譽(yù)。蘆筍一次種植，栽培年限可達(dá)15～20年，因此培育壯苗在蘆筍栽培中具有重要意義。

叢枝菌根真菌（Arbuscular Mycorrhizal Fungi，AMF）是一類與植物根系共生形成菌根而具有改善作物營養(yǎng)、提高作物抗病性、增強(qiáng)作物抗逆性等作用的土壤微生物[1]。摩西球囊霉（Glomus mosseae，GM）屬于球囊霉屬的叢枝菌根真菌，是一類對(duì)環(huán)境適應(yīng)力強(qiáng)、應(yīng)用范圍廣的叢枝菌根真菌。前人研究表明，對(duì)蘆筍接種AMF可增加產(chǎn)筍量、提高嫩莖中人體必需氨基酸的含量[2]，增強(qiáng)蘆筍幼苗抗溫度脅迫的能力和對(duì)鐮刀菌根腐病、紫紋羽病等土傳病害的抗性[3～5]。前期研究表明，對(duì)蘆筍進(jìn)行GM真菌接種處理可以顯著促進(jìn)蘆筍幼苗的生長，增強(qiáng)蘆筍幼苗對(duì)礦質(zhì)元素的吸收[6]，然而基質(zhì)滅菌處理是否對(duì)蘆筍菌根苗生長和礦質(zhì)營養(yǎng)吸收產(chǎn)生影響尚未見報(bào)道。

滅菌處理可有效地殺死基質(zhì)中的微生物，利于GM真菌在接種后起作用。基質(zhì)滅菌的方法主要有高溫滅菌和60Co輻射滅菌兩種，60Co輻射滅菌成本較高，且具放射性不利于推廣，生產(chǎn)中宜用高溫滅菌的方法。本試驗(yàn)旨在通過研究基質(zhì)高溫滅菌處理對(duì)蘆筍菌根苗生長和礦質(zhì)營養(yǎng)吸收的影響，優(yōu)化蘆筍菌根苗的培育方式。

1 材料與方法

11 供試材料

供試蘆筍品種為澤西奈特，購自北京市農(nóng)林科學(xué)院。供試菌種為匈牙利科學(xué)院土壤科學(xué)與農(nóng)業(yè)化學(xué)研究所Tunde Takacs博士提供的Glomus mosseae-2（簡稱GM2），原產(chǎn)地為匈牙利。菌劑是經(jīng)玉米擴(kuò)繁的由宿主植物根段、真菌菌絲、孢子、沙土組成的復(fù)合物，每克菌劑中孢子數(shù)目為2705個(gè)，菌根侵染率為714%。供試基質(zhì)為草炭、蛭石混合物，將兩者按體積比2∶ 1混合均勻。營養(yǎng)缽規(guī)格為底部直徑8 cm，上口直徑13 cm，高13 cm，使用前用75%酒精擦拭滅菌。

12 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2011年9～11月在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所試驗(yàn)溫室進(jìn)行，設(shè)4個(gè)處理：滅菌接種、滅菌CK、不滅菌接種、不滅菌CK。每個(gè)處理10株，重復(fù)3次，共120株。高溫滅菌處理為間歇滅菌，即將基質(zhì)置于恒溫箱中連續(xù)2 d 160℃烘2 h。接種處理為播種時(shí)每播種孔穴施6 g菌劑，CK則加入等量滅活菌劑（160℃烘2 h）以保證營養(yǎng)物和微生物區(qū)系條件一致。蘆筍種子經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為06%的NaClO溶液浸泡10 min后用蒸餾水沖洗干凈，浸種催芽。9月11日選取飽滿一致、出芽整齊的種子播種于裝有滅菌基質(zhì)（約占營養(yǎng)缽體積4/5，預(yù)先澆透水）的營養(yǎng)缽中，接菌處理后在種子上方蓋一層薄的基質(zhì)，并上覆薄膜保濕，待出苗后揭去薄膜，自然溫光條件下常規(guī)管理。于播種后20、30、40、50、60、70 d統(tǒng)計(jì)蘆筍幼苗地上莖長度。播種后70 d時(shí)進(jìn)行植株生物量、蘆筍幼苗根系菌根侵染、組織器官礦質(zhì)元素含量等指標(biāo)的測(cè)定。

13 測(cè)定方法

用直尺測(cè)量蘆筍幼苗地上莖（基質(zhì)表面到生長點(diǎn)）長度，求和即為地上莖總長度；洗凈蘆筍幼苗根系，剪成約1 cm長的根段置于FAA溶液（配方為70%酒精∶ 甲醛∶ 冰醋酸=90∶ 5∶ 5，體積比）中固定24 h，用曲利苯藍(lán)染色法[7]檢測(cè)菌根侵染程度，制片鏡檢。根據(jù)Trouvelot等[8]的方法，按下述公式計(jì)算相關(guān)菌根侵染指標(biāo)。

菌根侵染率（%）=有菌根根段數(shù)/總根段數(shù)×100；

根系中的菌根侵染強(qiáng)度（%）=（95×侵染率90%以上根段數(shù)+70×侵染率50%～90%根段數(shù)+30×侵染率10%～50%根段數(shù)+5×侵染率1%～10%根段數(shù)+侵染率1%以下的根段數(shù)）/總根段數(shù)×100；

根段中的相對(duì)菌根侵染強(qiáng)度（%）=根系中的菌根侵染強(qiáng)度×總根段數(shù)/有菌根段數(shù)×100；

菌根根段叢枝率（%）=（100×mA3+50×mA2+10×mA1）/100

公式中mA3、mA2、mA1分別是A3、A2、A1對(duì)應(yīng)的菌根侵染強(qiáng)度，A3、A2、A1分別為叢枝充足、叢枝中等頻率、叢枝少量。

根系叢枝率（%）=菌根根段叢枝率×根系中的菌根侵染強(qiáng)度/100

播種后70 d時(shí)將植株從營養(yǎng)缽中小心取出，用蒸餾水洗凈，擦干，105℃殺青15 min后75℃烘至恒重測(cè)干物質(zhì)重量。將植株干樣按根、莖、擬葉分開并粉碎，半微量凱氏法[9]測(cè)定N元素的含量；樣品經(jīng)HNO3-H2O2（體積比5∶ 1）消煮后使用等離子電感耦合發(fā)射光譜儀（ICP-OES）測(cè)定P、K、Ca、Mg、Cu、Zn、Fe、B等元素的含量。各種元素的含量與各部分生物量的乘積即為該部分某元素的吸收量[10]。

菌根依賴性（%）=菌根植株干重/非菌根植株干重×100[11]；

菌根效應(yīng)（%）=（接種GM處理元素吸收量-不接種GM處理元素吸收量）/接種GM處理元素吸收量×100

采用DPS軟件Duncan’s 新復(fù)極差法對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2 結(jié)果與分析

21 基質(zhì)高溫滅菌處理對(duì)蘆筍菌根苗生物量的影響

GM真菌接種后20 d起測(cè)定，圖1表明，出苗初期，蘆筍菌根苗的地上莖總長度與CK相比差異不顯著；接種后30 d起菌根苗的地上莖總長度顯著高于CK，且隨著時(shí)間的延長，差異逐漸增大。接種后70 d時(shí)，不滅菌接種的蘆筍幼苗地上莖總長度比滅菌接種的增加了97%，說明在基質(zhì)不滅菌條件下接種GM真菌更有利于蘆筍幼苗地上莖的生長。

圖1 基質(zhì)高溫滅菌和GM真菌接種處理對(duì)蘆筍

幼苗地上莖總長度的影響

GM真菌接種后70 d時(shí)測(cè)定，由表1可知，滅菌基質(zhì)中蘆筍菌根苗的根系、全株干物重分別比CK增加了389%、270%，未滅菌基質(zhì)中增加了435%、452%；不同處理間莖葉干物重?zé)o明顯差異。基質(zhì)滅菌和不滅菌條件下蘆筍幼苗的菌根依賴性分別為1270%、1487%，并且差異不顯著，說明不論基質(zhì)滅菌與否，GM真菌接種均可顯著促進(jìn)蘆筍幼苗的生長，且兩種條件下促進(jìn)程度相近。同時(shí)，不滅菌接種處理的蘆筍幼苗總干物重比滅菌接種處理的增加了298%，表明基質(zhì)未滅菌狀態(tài)下接種GM真菌更有利于蘆筍幼苗的生長。

表1 基質(zhì)高溫滅菌和GM真菌接種處理對(duì)蘆筍

幼苗干物重和菌根依賴性的影響

（g/株）

處理 根系

干物重 莖葉

干物重 總干物重 根冠比 菌根依賴

性（%）

滅菌接種 025 b 023 a 048 ab 109 ab 1270 a

滅菌CK 018 c 019 a 037 b 095 b -

不滅菌接種 033 a 028 a 061 a 118 a 1487 a

不滅菌CK 023 bc 020 a 043 ab 115 a -

注：表中數(shù)值為3個(gè)重復(fù)的平均值，同列不同小寫字母表示差異顯著（α=005），下表同。

22 基質(zhì)高溫滅菌處理對(duì)蘆筍菌根苗根系侵染的影響

GM真菌接種后70 d時(shí)測(cè)定，滅菌接種和不滅菌接種處理的菌根侵染率、菌根侵染強(qiáng)度、相對(duì)菌根侵染強(qiáng)度差異不顯著（表2），表明基質(zhì)高溫滅菌處理并未影響GM真菌對(duì)蘆筍幼苗根系侵染的程度。GM真菌的絕對(duì)叢枝率和相對(duì)叢枝率在滅菌條件下較不滅菌條件下分別增加了11倍和15倍，說明對(duì)基質(zhì)滅菌更有利于叢枝的發(fā)育。

表2 GM真菌對(duì)蘆筍幼苗根系的菌根侵染情況

（%）

處理 菌根侵

染率 菌根侵染

強(qiáng)度 相對(duì)菌根

侵染強(qiáng)度 絕對(duì)叢

枝率 相對(duì)叢

枝率

滅菌接種 6000 a 3611 a 5947 a 1308 a 3813 a

滅菌CK 0 0 0 0 0

不滅菌接種 6445 a 3922 a 6135 a 609 b 1528 b

不滅菌CK 0 0 0 0 0

23 基質(zhì)高溫滅菌和GM真菌接種處理對(duì)蘆筍菌根苗礦質(zhì)營養(yǎng)吸收的影響

GM真菌接種后70 d時(shí)測(cè)定（表3），根系中N的吸收量滅菌接種比滅菌CK增加了488%，不滅菌接種比不滅菌CK增加了469%，說明基質(zhì)高溫滅菌沒有明顯影響GM2對(duì)根系N吸收的改善作用，Mg、Cu變化趨勢(shì)與之相同。P、Ca、Zn的吸收量處理之間差異不顯著。K的吸收量由高到低依次為不滅菌接種>不滅菌CK>滅菌接種>滅菌CK，其中基質(zhì)不滅菌條件下接種GM真菌使根系中K的吸收量增加了131%，滅菌條件下增加了159%。Fe的吸收量以滅菌接種最高，不滅菌接種次之，滅菌CK和不滅菌CK最小且差異不顯著。B的吸收量，基質(zhì)不滅菌高于滅菌，接種處理與對(duì)照之間差異不顯著。

對(duì)比接種后70 d時(shí)莖葉中元素吸收量可知，N以不滅菌接種的最高，比不滅菌CK的增加了391%，滅菌接種和滅菌CK的次之，且差異不顯著，B的變化規(guī)律與N相同。P的吸收量為不滅菌接種和不滅菌CK的最高，差異不顯著，滅菌接種的次之，滅菌CK最低，說明基質(zhì)不滅菌更利于莖葉中進(jìn)行P的吸收。K的吸收量不滅菌接種最高，不滅菌CK和滅菌接種差異不顯著，滅菌CK最低。Ca、Mg的吸收量處理之間差異不顯著。Zn的吸收量不滅菌CK相對(duì)于其他處理有所降低。Cu的吸收量接種處理高于CK，基質(zhì)滅菌的增加了824%，未滅菌的增加了565%，且滅菌接種與不滅菌接種處理之間差異不顯著。

表3

高溫滅菌和GM真菌接種處理

對(duì)蘆筍幼苗礦質(zhì)元素吸收量的影響

處理 N

（mg） P

（mg） K

（mg） Ca

（mg） Mg

（mg） Zn

（μg） Cu

（μg） Fe

（μg） B

（μg）

根 滅菌接種 622 a 020 a 277 bc 082 a 036 ab 962 a 214 ab 11175a 466 b

滅菌CK 418 b 018 a 239 c 055 a 023 c 756 a 067 c 4308 c 728 b

不滅菌接種 567 a 031 a 388 a 095 a 043 a 957 a 258 a 8800 b 2459 a

不滅菌CK 386 b 019 a 343 ab 067 a 026 bc 777 a 141 bc 3515 c 2613 a

莖葉 滅菌接種 719 b 031 b 346 b 194 a 059 a 1020 a 155 a 3395 b 3971 b

滅菌CK 738 b 022 c 179 c 233 a 069 a 1074 a 085 b 7358 a 3762 b

不滅菌接種 846 a 049 a 577 a 225 a 071 a 1055 a 169 a 7237 a 4860 a

不滅菌CK 608 c 042 a 401 b 177 a 053 a 778 b 108 ab 3136 b 3246 c

全株 滅菌接種 1341 b 050 bc 623 c 276 ab 094 a 1982 a 369 ab 14570b 4438 c

滅菌CK 1156 c 039 c 418 d 288 ab 092 a 1830 a 152 c 11666c 4490 c

不滅菌接種 1413 a 080 a 965 a 319 a 114 a 2012 a 427 a 16037a 7319 a

不滅菌CK 994 d 061 b 743 b 244 b 079 a 1555 a 250 bc 6651 d 5859 b

注：表中數(shù)據(jù)均為單株的含量。

接種后70 d時(shí)，全株中N的吸收量由高到低依次為不滅菌接種>滅菌接種>滅菌CK>不滅菌CK，其中不滅菌接種比滅菌接種增加了54%，F(xiàn)e具有相同的變化趨勢(shì)。P的吸收量在基質(zhì)滅菌狀態(tài)下因GM真菌接種增加了282%，不滅菌狀態(tài)下為311%，以不滅菌接種處理的最高，比滅菌接種的增加了600%，表明對(duì)基質(zhì)不滅菌更利于蘆筍菌根苗對(duì)P的吸收利用。K的吸收量在基質(zhì)不滅菌狀態(tài)下生長的幼苗高于滅菌狀態(tài)下的，由高到低為不滅菌接種>不滅菌CK>滅菌接種>滅菌CK，其中不滅菌接種的比滅菌接種的增加了490%，說明了基質(zhì)高溫滅菌抑制了蘆筍幼苗對(duì)K的吸收，而蘆筍菌根苗在不滅菌的基質(zhì)中對(duì)K的利用率最高。Ca的吸收量以不滅菌接種的最高，其他三個(gè)處理之間差異不顯著。Mg、Zn的吸收量差異不顯著。Cu的吸收量由高到低依次為不滅菌接種>滅菌接種>不滅菌CK>滅菌CK，其中不滅菌接種的比滅菌接種的增加了156%。全株B的吸收量不滅菌接種的最高，不滅菌CK的次之，滅菌接種和滅菌CK的最低。

GM真菌接種后70 d測(cè)定菌根效應(yīng)，表4表明，根系中GM2對(duì)元素吸收的菌根效應(yīng)，N、Mg差異不顯著，不滅菌接種的P、Fe顯著高于滅菌接種的，而K、Ca、Mg、Zn、Cu低于滅菌接種的；莖葉中不滅菌接種的N、Ca、Mg、Cu、Fe、B高于滅菌接種的，而K、Zn降低，P差異不顯著。全株中GM菌根效應(yīng)的變化趨勢(shì)與莖葉中的相一致。

表4 GM在基質(zhì)高溫滅菌和不滅菌條件下

的菌根效應(yīng)

（%）

處 理 N P K Ca Mg Zn Cu Fe B

根 滅菌接種 327 a 05 b 131 a 318 a 359 a 687 a 227 a 419 b -628 b

不滅菌接種 319 a 334 a 74 b 258 b 347 a 443 ab 51 b 567 a -70 a

莖葉 滅菌接種 -27 b 302 a 484 a -212 b -178 b 449 a -48 b -1300 b 54 b

不滅菌接種 280 a 135 a 305 ab 210 a 249 a 330 b 262 a 506 a 332 a

全株 滅菌接種 137 b 203 a 328 a -45 b 23 b 594 a 77 b -165 b -12 b

不滅菌接種 296 a 223 a 227 b 230 a 293 a 398 b 201 a 562 a 199 a

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)表明，基質(zhì)高溫滅菌和不滅菌條件下對(duì)蘆筍進(jìn)行GM真菌接種處理均可以顯著促進(jìn)蘆筍幼苗的生長，增加生物量，增強(qiáng)蘆筍幼苗對(duì)礦質(zhì)元素的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，所以試驗(yàn)使用的GM2菌種對(duì)蘆筍幼苗具有高效性。對(duì)比生物量和菌根效應(yīng)可知，不滅菌條件下GM真菌對(duì)蘆筍幼苗生長和礦質(zhì)營養(yǎng)吸收的貢獻(xiàn)更大，這可能與栽培基質(zhì)（草炭∶ 蛭石=2∶ 1，體積比）經(jīng)過高溫滅菌后持水能力下降有關(guān)。至于其他類型基質(zhì)高溫滅菌對(duì)蘆筍菌根苗的影響，有待于進(jìn)一步研究。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)兩種條件下GM真菌對(duì)蘆筍幼苗根系的侵染強(qiáng)度相近，但在滅菌條件下形成了更多的叢枝，其原因有待明確。

接種GM真菌作為一種生物技術(shù)，應(yīng)用于蘆筍栽培可培育壯苗，縮短苗期，節(jié)省肥料，提高有機(jī)基質(zhì)的養(yǎng)分利用率[6]。本試驗(yàn)證實(shí)在基質(zhì)（草炭∶ 蛭石=2∶ 1，體積比）不滅菌條件下GM真菌對(duì)蘆筍幼苗生長具有更好的作用效果，因此，未經(jīng)過高溫滅菌的基質(zhì)更利于培育具高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)潛力的蘆筍菌根苗，降本提效。參 考 文 獻(xiàn)：

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土壤滅菌的方法范文第3篇

1.熟段木栽培。①選料接種。栽培靈芝的樹種以榆、楊、柏、楓、刺槐等不含揮發(fā)油和殺菌物質(zhì)的闊葉樹為宜。就生料栽培來講，一般在冬季砍伐，砍伐后自然堆放發(fā)酵。大約在接種前10-15天將原木鋸成1米左右的段木，段木兩端的橫切面涂上石灰漿液，以防雜菌侵染。靈芝的母種、原種制法和其他食用菌制種相同，栽培種采用枝條木屑菌種。一般氣溫在20℃左右時(shí)（南方12月，北方3月份）接種。熟料栽培因接種后菌絲生長比生木快，故接種季節(jié)比生木晚15-20天。

②加強(qiáng)管理。接種后將段木呈井字形上堆，約經(jīng)10-15天，菌絲由接種穴向四周蔓延生長時(shí)，把段木成排橫臥于地面，然后用濕沙覆蓋（一半細(xì)沙、一半黃土或夾沙土），并噴以適宜的水分保濕。覆沙后約30天，可把段木截成10-15厘米的小段，然后堆砌在陰涼潮濕地方。如濕度不夠，應(yīng)在周圍空中噴霧數(shù)次，使空氣相對(duì)濕度保持在85%-95%。1-3天后，若有橫切面出現(xiàn)白色薄層，說明靈芝菌絲已在段木內(nèi)部蔓延生長。這時(shí)即可將小段木垂直埋入土中，埋入深度為段木長度的2/3—3/4，埋木地點(diǎn)最好選擇在樹陰或瓜棚下。埋木期間要經(jīng)常淋水，以保持土壤濕潤，空氣相對(duì)濕度保持在85%-95%。要注意防止白蟻等為害。生段木栽培，一般接種后2個(gè)月長出菌蕾，子實(shí)體成熟約需50-60天，從接種到采收需4個(gè)月左右。

③滅菌。熟段木栽培主要涉及一個(gè)滅菌的問題，首先要將鋸好的段木裝入塑料袋中，可一根裝，也可一捆裝。裝好塞棉花，袋口束攏、扎緊、口外用紙包住。放入滅菌鍋內(nèi)滅菌。

高壓滅菌保持1.5小時(shí)；常壓滅菌100%保持10小時(shí)。高壓滅菌時(shí)，蒸氣壓上升和下降的速度必須緩慢，不要排氣，讓其自然降壓。

土壤滅菌的方法范文第4篇

    實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)與安排

    本實(shí)驗(yàn)具有季節(jié)性、綜合性和持續(xù)性的特點(diǎn),選擇在春季5~7月,實(shí)驗(yàn)總學(xué)時(shí)15學(xué)時(shí),分5次進(jìn)行,每次教學(xué)指導(dǎo)20min,采用小結(jié)實(shí)驗(yàn)進(jìn)度和答疑方式。學(xué)生查閱資料、編制方案及實(shí)驗(yàn)報(bào)告不計(jì)入學(xué)時(shí),根據(jù)報(bào)告內(nèi)容和新穎性推薦發(fā)表。

    實(shí)驗(yàn)方法

    1樣品采集與前處理學(xué)生實(shí)驗(yàn)前按5人1組分組,通過社會(huì)實(shí)踐或生源地了解林木病害發(fā)生情況,實(shí)地采集或郵寄林木病害分離用標(biāo)本,并填寫好“林木病害調(diào)查記載卡(見圖1)”。記載卡記錄病害發(fā)生的生態(tài)環(huán)境因子、林地管理情況,對(duì)分析發(fā)病原因至關(guān)重要。采集標(biāo)本注上標(biāo)記后,如不能及時(shí)分離,要用塑料袋分類裝好,冰箱中低溫保存?zhèn)溆靡苑罉悠纷冑|(zhì)。

    2培養(yǎng)基制作培養(yǎng)不同的病原菌,要根據(jù)它們的需求配制適宜的培養(yǎng)基,對(duì)營養(yǎng)有特殊要求的病原菌還要配制特定的選擇性培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的種類很多,截至1930年,已經(jīng)報(bào)道了將近2500種。學(xué)生要對(duì)所診斷的病害性質(zhì)有一基本了解,如真菌病害或細(xì)菌病害,選擇適宜培養(yǎng)基制作。因此,同學(xué)們?cè)趯?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)選擇馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基分離真菌或肉汁凍培養(yǎng)基分離細(xì)菌。由于該步驟要加熱和高壓蒸汽滅菌,有一定危險(xiǎn)性,除安全教育外,還要求學(xué)生不能在滅菌期間離開實(shí)驗(yàn)室。馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基制作時(shí),先將洗凈后去皮的馬鈴薯200g切碎,加水1000ml煮沸0.5h,用紗布濾去馬鈴薯,再加水補(bǔ)足1000ml;然后加葡萄糖或蔗糖10~20g和瓊膠17~20g,加熱使瓊膠完全熔化后,趁熱用紗布或脫脂棉過濾,或者用濾紙和保溫漏斗過濾。而后分裝試管,加棉花塞后滅菌。作平板培養(yǎng)的每管約10ml,作斜面培養(yǎng)的則每管約5ml。根據(jù)工作需要,還可以分裝在三角瓶中滅菌。教師必須在實(shí)驗(yàn)前說明,高壓滅菌器的用法和注意事項(xiàng):(1)滅菌器中的水,應(yīng)加水到指定的標(biāo)度;(2)需要滅菌的器物放在滅菌器內(nèi),將蓋密閉,打開氣門;(3)加熱,等空氣完全排除后(蒸汽從氣門有力地沖出),關(guān)閉氣門;(4)當(dāng)壓力上升到所需要的指標(biāo)后,開始計(jì)算滅菌的時(shí)間,滅菌過程中保持壓力不變;(5)達(dá)到需要滅菌的時(shí)間,停止加熱,稍微打開氣門,排出蒸汽使壓力慢慢下降;(6)當(dāng)壓力降到內(nèi)外相等時(shí),才能打開高壓滅菌器的蓋。肉汁凍培養(yǎng)基的方法:取3g牛肉浸膏,蛋白胨5~10g,瓊膠17~20g,水1000ml,與馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基的方法相同,這里不再贅述。

    3分離培養(yǎng)(1)超凈工作臺(tái)清毒與分離材料的選擇。分離和培養(yǎng)應(yīng)該在很清潔的條件下進(jìn)行。打開超凈工作臺(tái)紫外燈滅菌30min,殺死空氣中的微生物,關(guān)燈5~10min,再進(jìn)行分離。(2)組織分離法分離真菌。病原真菌的分離一般都是用組織分離法[3],是林學(xué)、森保專業(yè)學(xué)生必須掌握的技術(shù)。要求學(xué)生從上述采集的標(biāo)本中,選擇新近發(fā)病的植株、器官或組織作為分離的材料,可以減少腐生菌的污染。腐生菌容易在生病很久而已經(jīng)枯死或敗壞的部分滋生,所以一般斑點(diǎn)病害應(yīng)該從鄰近健全的組織的部分分離。在超凈工作臺(tái)上,從病斑切取每邊約5mm的小塊病組織,用70的酒精浸幾秒鐘,再在0.1的酸性升汞水溶液中浸3~5min;而后用滅菌水換洗3次,將其移置在上述馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。用蠟筆在培養(yǎng)皿上注明分離材料日期后送入25℃溫箱反轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿培養(yǎng);3~5d,在培養(yǎng)基上選擇純的菌落,移植到新的平面上或斜面上培養(yǎng)并純化,并計(jì)算各分離真菌百分率。以優(yōu)勢(shì)菌群作為回接實(shí)驗(yàn)菌種。(3)平板劃線分離法分離細(xì)菌。平板劃線法[3]是分離細(xì)菌的常見方法,取小塊病組織,經(jīng)過表面消毒和滅菌水洗過2次以后,放在滅菌載玻片上的滅菌水中,用滅菌玻棒研碎。靜置一定時(shí)間,用滅菌的移植環(huán)蘸取以上組織液在肉汁凍培養(yǎng)基瓊膠平板上劃線培養(yǎng);先在平板的一側(cè)順序劃3~5條線,再將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)60°,將移植環(huán)滅菌后,從第2條線末端,順序劃出3~5條線。也有其他劃線的形式,如4分劃線和放射劃線等,目的都是使細(xì)菌分開形成分散的菌落,并計(jì)算各分離細(xì)菌百分率,以優(yōu)勢(shì)菌群作為回接實(shí)驗(yàn)菌種。

    4病原回接與再分離病害的種類很多,其傳染方式也各不相同,因此要用相應(yīng)的接種方法。種子、土壤、氣流和昆蟲等傳染的病害,接種方法是不同的。因此,指導(dǎo)老師要求學(xué)生在進(jìn)行試驗(yàn)前,對(duì)一種病害在自然條件下的傳染方式和侵染途徑有所了解。一般氣流和雨水傳播病害較普遍,可采用噴霧法進(jìn)行。將上述真菌孢子(或菌絲)懸浮液噴灑在寄主表面,并用濕紗布保濕3d,病菌可以從氣孔、傷口或表皮直接侵入。影響接種試驗(yàn)的因子包括病原物的致病性和致病力、接種植物的抗病性和感病性和發(fā)病的環(huán)境條件。在接種時(shí),應(yīng)盡量模仿接種菌在自然條件下,侵染寄主時(shí)的環(huán)境條件,特別要注意溫度和濕度對(duì)接種發(fā)病的影響。學(xué)生在回接后,每隔2~3d觀察病害發(fā)生情況并與自然狀態(tài)比較,等出現(xiàn)顯著癥狀后按上述方法能再次分離到用來回接的病原,否則實(shí)驗(yàn)失敗。

    5病原鑒定與病因分析(1)病原真菌:以形態(tài)學(xué)特征[4]為主,結(jié)合分子生物學(xué)[5]鑒定種群。(2)病原細(xì)菌:形態(tài)、生理生化結(jié)合分子生物學(xué)[6]鑒定種群。實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生根據(jù)優(yōu)勢(shì)菌群、回接試驗(yàn)情況與采樣地環(huán)境狀態(tài)分析發(fā)病因素,寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告,并進(jìn)行課程討論。

    6創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)小結(jié)本創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)流程簡單總結(jié)為:在采樣及前處理基礎(chǔ)上,完成“分離、接種、再分離”的技術(shù)規(guī)程。(1)分離:從病組織上分離病原物并進(jìn)行純培養(yǎng);(2)接種:用純培養(yǎng)物接種到相同的健康植物上,給予適宜發(fā)病條件,觀察是否引起原來相同的病害;(3)再分離:從接種后發(fā)病的植物上,能分離到與用來接種的病原物。

土壤滅菌的方法范文第5篇

關(guān)鍵詞 小葉女貞；幼苗移栽；繁育技術(shù)

中圖分類號(hào) S687.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1007-5739（2015）14-0159-02

小葉女貞（Ligustrum quihoui carr）為木犀科女貞屬，常綠或半常綠灌木樹種，別名小葉冬青、小葉水蠟等，該樹種枝葉緊密，萌發(fā)力強(qiáng)，是機(jī)關(guān)、學(xué)校、醫(yī)院、街道、公園及庭院作為綠蘺和各種造型的首選樹種，也是制作盆景的理想樹種。

根據(jù)多年的育苗實(shí)踐，筆者探索總結(jié)出小葉女貞幼苗移栽繁育技術(shù)，與傳統(tǒng)的苗圃直接播種育苗相比，具有省工、省時(shí)、省種子、易管理、密度合理、苗木生長均勻、病蟲害少的優(yōu)點(diǎn)，具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：一是可以減少播種及幼苗期澆水、除草的管理次數(shù)，根據(jù)概算可節(jié)省澆水工時(shí)30～45個(gè)/hm2、除草工時(shí)60～90個(gè)/hm2，節(jié)約成本費(fèi)用1.5萬元/hm2左右；二是可節(jié)約種子600 kg/hm2左右，具有密度合理、苗木生產(chǎn)均勻、木質(zhì)化早、苗木粗壯的效果，并可方便澆水與中耕除草；三是通風(fēng)條件好，可以有效預(yù)防病蟲害的發(fā)生。現(xiàn)將主要技術(shù)總結(jié)如下。

1 種子的采集、貯藏與處理

10月下旬至11月中旬，當(dāng)果實(shí)呈紫黑色時(shí)即可采摘。貯藏的方法主要有以下幾種：一是將采摘的果實(shí)去皮、洗凈，晾干后裝入袋中，放在通風(fēng)陰涼的地方貯藏。二是果實(shí)去皮洗凈后，將種子放入0.5%高錳酸鉀溶液中滅菌消毒10～15 min，用清水沖洗干凈后，將種子與細(xì)沙按1∶3的比例拌勻，直接進(jìn)行沙藏，并經(jīng)常保持細(xì)沙濕度在75%～85%之間，不可過濕或過干，次年3月中旬，40%的種子裂口露白后即可播種。三是將鮮果直接放入冷鮮庫貯藏。為了提高種子出苗率和苗木出土?xí)r間及種子出苗整齊均勻，貯藏的種子在播種前要及時(shí)進(jìn)行催芽處理，具體方法：3月初將干藏種子放入35～40 ℃溫水中浸泡24 h后，撈去癟種及雜質(zhì)，把種子放入0.5%高錳酸鉀溶液中滅菌消毒5～10 min，用清水沖凈溶液后，放入袋中或蘿筐中，蘿筐上面用濕麻袋或布遮蓋，每天用25 ℃左右溫水沖洗2次，并隨時(shí)翻動(dòng)種子，有30%裂口露白后即可播種。貯藏在冷庫的鮮果，在3月上旬去皮晾至半干去雜后，按照干藏種子的催芽方法進(jìn)行催芽[1-2]。

2 幼苗畦的制作

選擇地勢(shì)平坦、不積水的地方制作成寬1.2～1.5 m、深30～35 cm的苗畦，在畦內(nèi)鋪細(xì)油沙20 cm，并施入復(fù)合肥750 g/hm2。在播種前5～7 d，用硫酸亞鐵450 kg/hm2與水溶解成0.100%～0.125%溶液噴灑均勻，進(jìn)行滅菌消毒，也可用0.125%多菌靈液，噴灑時(shí)要讓藥液滲透沙層，以達(dá)到充分滅菌消毒的效果[3]。

3 播種與管理

先將苗畦用水澆透，把催芽處理過的種子均勻撒播在苗畦內(nèi)，播種量為80～90 g/m2，上面用細(xì)沙或細(xì)土覆蓋0.5～1.0 cm，用塑料膜扣棚，并經(jīng)常保持棚內(nèi)苗畦土壤濕潤。當(dāng)苗木出齊至半木質(zhì)化前，每隔7～10 d噴打1次0.1%多菌靈或甲基托布津溶液，連噴2～3次，預(yù)防苗木猝倒病發(fā)生。苗木長至5 cm以上，每隔15 d用0.2%磷酸二氫鉀進(jìn)行葉面施肥1次，連施2次，4月下旬至5月上旬可在陰天揭去拱棚，經(jīng)常保持苗床土壤濕潤，可出幼苗600株/m2左右。6月中旬即可將幼苗移植到大田苗圃地中進(jìn)行培育，1 m2幼苗可移植大田面積約4.05 m2。

4 幼苗移栽

4.1 苗圃地選擇

苗圃地要選擇地勢(shì)平坦、排灌方便、不積水、呈酸性至中性的砂壤土或黃壤土地塊，深耕細(xì)耙，揀去石塊、草根，施入磷肥1 125～1 500 kg/hm2，復(fù)合肥或尿素750 kg/hm2，并耙細(xì)耙平，做成寬120～150 cm的苗畦，畦間埂高10～15 cm，寬20 cm。

4.2 移栽

幼苗移栽要選擇在陰天、下雨前太陽光不強(qiáng)時(shí)進(jìn)行。起苗前1 d將苗床澆透水1次。幼苗起出后在用0.01%生根粉溶液與細(xì)土和成的稀泥漿中蘸根，或在0.01%生根粉溶液中浸根5～10 min，放入保鮮箱或竹筐及木箱內(nèi)，上面用濕布遮蓋，以免幼苗失水。為確保成活率，一次不要起苗太多，盡量做到隨起隨栽。

栽苗前，用竹片或薄木板做成寬3 cm、長25 cm匕首形狀的栽苗工具，栽苗時(shí)插入土壤10 cm左右，以稍深于苗木根部為宜，稍用力來回扳動(dòng)一下，取出后成為栽植穴，然后將苗木植入穴內(nèi)，栽植深度稍深于原苗木根頸部即可。苗木植入后，再在苗木下方離苗木根部3～5 cm處插入土壤10 cm左右，用力往前將土壤與苗木擠緊，栽后立即澆水，每穴3株，行距20～25 cm，穴間距10 cm左右，可栽植苗木127.5萬～150.0萬株/hm2。栽后立即澆透水，有條件的可進(jìn)行遮陰。

5 移栽后管理

苗木栽植后10 d內(nèi)要經(jīng)常保持苗圃土壤濕潤，以利苗木生根成活，成活率可達(dá)95%以上。栽植20 d后，每15 d對(duì)葉面噴施1次0.25%磷酸二氫鉀或尿素溶液，連噴2次。在進(jìn)行葉面施肥時(shí)可交替噴施2次0.100%～0.125%多菌靈或甲基托布津溶液，預(yù)防苗木葉斑病等病蟲害發(fā)生，并可根據(jù)時(shí)節(jié)與苗木長勢(shì)情況，結(jié)合澆水、中耕除草或下雨，撒施磷酸二氫鉀或尿素75.00～112.5 kg/hm2，撒施肥料后要及時(shí)用樹棍或掃帚撥動(dòng)苗木，使散落在苗木上的肥料落地，以免燒傷苗木。多雨季節(jié)苗圃地有積水時(shí)要及時(shí)排水。8月當(dāng)苗木70 cm左右時(shí)，噴打1次多效唑，抑制苗木生長，促進(jìn)苗木粗壯。9月后停止對(duì)苗木施肥，促進(jìn)苗木木質(zhì)化，提高苗木防凍能力。

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