胰島素樣生長因子對胚胎發(fā)育保護(hù)作用
前言：本站為你精心整理了胰島素樣生長因子對胚胎發(fā)育保護(hù)作用范文，希望能為你的創(chuàng)作提供參考價(jià)值，我們的客服老師可以幫助你提供個性化的參考范文，歡迎咨詢。
關(guān)鍵詞】早孕
Protectiveeffectofinsulinlikegrowthfactorsonearlypregnancy
【Abstract】AIM:TodetecttheexpressionsofinsulinlikegrowthfactorⅠ(IGFI)invillusandIGFIIindeciduaandthelevelsinmotherserum,andtoexploretheirrelationshipwiththeembryogenesisofearlypregnancy.METHODS:ExpressionsofIGFIandIGFIIwereexaminedbyimmunohistochemicalSPmethod;themRNAexpressionsofIGFIandIGFIIweredetectedbyinsituhybridization(ISH);serumIGFIandIGFIIlevelsweredeterminedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).RESULTS:TheexpressionsofIGFIandIGFIIbothproteinandmRNAwerelowerintheabnormalvillusanddeciduaofpregnancyterminationthanthoseofnormalvillusanddeciduaofnormalpregnancy（P<0.01）.SerumlevelsofIGFIandIGFIIinnormalpregnancywomenweremuchhigherthanthoseofabnormalpregnancywomen（P<0.01）.CONCLUSION:IGFIandIGFIImayplayimportantrolesintheregulationoffetalgrowth,thedecreaseofIGFIandIGFIIlevelsinvillus,deciduaandserummaybethekeyfactorcontributingtotheembryogenesisterminationofearlypregnancy.SoIGFIandIGFIIcanserveas2parametersinexaminingthefetalsafety.
【Keywords】insulinlikegrowthfactorI;insulinlikegrowthfactorII;earlypregnancy;villustermination;deciduas
【摘要】目的：探討胰島素樣生長因子I和II（IGFI和II）在正常胚胎發(fā)育及早期胚胎發(fā)育終止絨毛及蛻膜組織中的表達(dá)及其在母體血中水平的改變與胚胎發(fā)育的關(guān)系.方法：分別采用免疫組織化學(xué)SP法和原位雜交法檢測正常胚胎發(fā)育絨毛及早期胚胎發(fā)育終止絨毛中IGFI和蛻膜中IGFII蛋白的表達(dá)以及IGFImRNA和蛻膜中IGFIImRNA的表達(dá)；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測正常妊娠及早期胚胎發(fā)育終止孕婦血中IGFI和II水平的變化.結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示，正常妊娠絨毛中IGFI和蛻膜中IGFII的表達(dá)明顯高于胚胎發(fā)育終止組（P＜0.01）；原位雜交結(jié)果顯示，正常妊娠組絨毛中IGFI和蛻膜中IGFIImRNA的表達(dá)明顯高于胚胎發(fā)育終止組（P＜0.01）；正常妊娠組母血中IGFI和II水平顯著高于胚胎發(fā)育終止組（P＜0.01）.結(jié)論：IGFI和II在絨毛組織中的表達(dá)及母血中的水平的升高對早期胚胎發(fā)育有重要的保護(hù)作用，其含量的減少可能是導(dǎo)致胚胎死亡的重要原因之一.IGFI和II可能成為預(yù)測胎兒安危的指標(biāo)之一.
【關(guān)鍵詞】胰島素樣生長因子I；胰島素樣生長因子II；早孕；絨毛；蛻膜
0引言
近年來已有大量研究表明胚胎在宮內(nèi)的生長發(fā)育是一個多因素調(diào)節(jié)的過程.Guidice等［1］證實(shí)胰島素樣生長因子I（IGFI）具有調(diào)節(jié)胎兒生長發(fā)育的作用，但是有關(guān)具體作用途徑和作用機(jī)制尚不清，而子宮內(nèi)膜中胰島素樣生長因子II（IGFII）的含量隨月經(jīng)周期而改變，并與卵巢激素的作用密切相關(guān)［2-3］，因此，推測IGFs在早期胚胎發(fā)育過程中可能起著重要作用.我們通過檢測正常胚胎發(fā)育孕婦及胚胎發(fā)育終止孕婦血中的IGFI水平和絨毛中的IGFI及蛻膜中IGFⅡ表達(dá)的變化，探討IGFI和IGFⅡ?qū)υ缙谂咛グl(fā)育的保護(hù)作用.
1材料和方法
1.1材料選取200309/200410西京醫(yī)院婦產(chǎn)科門診48例經(jīng)B超證實(shí)胚胎發(fā)育終止而行清宮術(shù)者的絨毛組織和蛻膜組織為實(shí)驗(yàn)組，56例因避孕失敗而實(shí)施人工流產(chǎn)的絨毛組織和蛻膜組織為對照組.兩者妊娠天數(shù)均小于84d.入選對象均為健康女性，年齡(24±2.8)歲.兔抗人IGFI和II多克隆抗體及通用型超敏SP試劑盒（北京百靈克試劑公司）；IGFI和II檢測試劑盒（DSL公司）；IGFI和II原位雜交試劑盒（武漢博士德試劑公司）.
1.2方法
1.2.1母血中IGFI和IGFII含量的檢測術(shù)前均空腹抽取靜脈血3mL，不抗凝，離心后取血清，-20℃冷凍冰箱保存.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測定，操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行.反應(yīng)終止后在EL312e型酶標(biāo)儀測吸光度值，每份標(biāo)本均測雙份，取平均值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出IGFI和II含量.
1.2.2絨毛組織中IGFI和蛻膜組織中IGFII的表達(dá)采用免疫組織化學(xué)SP染色法檢測.將絨毛組織和蛻膜組織經(jīng)40g/L多聚甲醛固定后，常規(guī)制作4μm石蠟切片，一抗為兔抗人IGFI和II抗體（1∶100）,二抗為HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG，以DAB顯色.具體步驟按說明書進(jìn)行.對照設(shè)置：免疫組化染色中分別以已知IGFI陽性的肝癌和IGFII陽性的乳腺癌作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照.檢測結(jié)果的判定：以胞質(zhì)中出現(xiàn)黃色和棕黃色顆粒為陽性信號.
1.2.3絨毛組織中IGFImRNA和蛻膜組織中IGFIImRNA水平的表達(dá)采用原位雜交法檢測.將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，加30mL/LH2O2室溫處理10min，用DEPC水洗2×5min.加胃蛋白酶于37℃消化30min，以0.5mol/LPBS洗3×5min，于40℃預(yù)雜交3h.用濾紙吸去預(yù)雜交液，然后雜交過夜，最后用DAB顯色.IGFI和IImRNA探針為地高辛標(biāo)記的原位雜交液，一抗為HRP標(biāo)記的鼠抗地高辛IgG.對照設(shè)置：以試劑盒內(nèi)配置的陽性切片（肝癌）作為陽性對照，以不加含有標(biāo)記探針的原位雜交液作為陰性對照.檢測結(jié)果的判定：以胞漿中出現(xiàn)黃色和棕黃色顆粒為陽性信號.
1.2.4圖像分析用MIAS300型圖像分析儀，輸入裝置為OlympusBH2顯微鏡和臺灣產(chǎn)MTV180型CCD攝像頭，顯微放大倍數(shù)400倍，普通光源照明.將免疫組化染色和原位雜交染色切片顯微鏡下觀察視野輸入圖像分析儀的高分辨圖像監(jiān)視器上，對陽性產(chǎn)物相對含量進(jìn)行測定.在光鏡下（×100）每例隨機(jī)取樣測5個蛻膜斷面，10個單位面積，每組共測50個單位面積，計(jì)算每個單位面積陽性產(chǎn)物的相對含量.取其平均值代表該切片陽性物質(zhì)的相對含量.
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較用t檢驗(yàn)，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.
2結(jié)果
2.1母血中IGFI和IGFII的含量ELISA檢測結(jié)果表明，對照組（正常妊娠）母血中IGFI含量為（194±145）μg/L，IGFII含量為（184±15）μg/L；而實(shí)驗(yàn)組母血中IGFI含量為（125±13）μg/L，IGFII含量為（125±13）μg/L；二者之間差異顯著（P<0.01）.
2.2絨毛組織中IGFI和蛻膜組織中IGFII的表達(dá)免疫組化檢測結(jié)果表明，IGFI在對照組的絨毛組織中的表達(dá)以陽性及強(qiáng)陽性為主；而在實(shí)驗(yàn)組中的表現(xiàn)陰性和弱陽性為主.IGFII在對照組中的表達(dá)以陽性和強(qiáng)陽性為主；而在實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)則以陰性和弱陽性為主.兩組之間差異顯著（P<0.01,表1,圖1）.
表1絨毛組織中IGFI，IGFImRNA和蛻膜組織中IGFII，IGFIImRNA的表達(dá)（略）
bP＜0.01vs對照.
圖1絨毛組織IGFI（A）和蛻膜組織IGFII（B）的陽性表達(dá)(表達(dá)在胞質(zhì)和胞膜上)SP×400（略）
2.3絨毛組織IGFImRNA和蛻膜組織IGFIImRNA的表達(dá)原位雜交檢測結(jié)果表明，IGFImRNA在對照組的絨毛中表現(xiàn)為強(qiáng)陽性；而在實(shí)驗(yàn)組中表現(xiàn)為陰性和弱陽性；IGFIImRNA在對照組的蛻膜中表現(xiàn)為強(qiáng)陽性；而在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)為陰性和弱陽性.IGFI和IImRNA在對照組的陽性產(chǎn)物含量明顯高于實(shí)驗(yàn)組（P<0.01，表1，圖2）.
圖2絨毛組織IGFIMrna(A)和蛻膜組織IGFIImRNA(B)的陽性表達(dá)(表達(dá)在胞質(zhì)和胞膜上)ISH×400（略）
3討論
胚胎是動物個體發(fā)育的重要階段，多種生長因子和激素在胚胎生長發(fā)育過程中起了重要的調(diào)控作用，其中IGFs被證明是胎兒生長過程中重要的調(diào)節(jié)因子［4］.IGFs是1957年發(fā)現(xiàn)的具有類似胰島素原代謝活性和結(jié)構(gòu)特征的低分子肽類物質(zhì)，它是一種具有同化作用的生長因子，能增加葡萄糖和氨基酸的吸收，抑制蛋白質(zhì)降解，刺激各種細(xì)胞的增殖和分化［5］.
IGFI不僅可直接刺激胎兒的神經(jīng)系統(tǒng)、骨骼、血液系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等的發(fā)育，還可通過改善胎盤功能，調(diào)節(jié)胎盤血流轉(zhuǎn)運(yùn)，增加胎盤對營養(yǎng)物質(zhì)的攝取，從而促進(jìn)胎兒生長［6］.本研究結(jié)果表明正常妊娠組IGFI的表達(dá)陽性率均明顯高于胚胎發(fā)育終止組，且母血中IGFI的含量在正常妊娠組也顯著高于胚胎發(fā)育終止組，說明胚胎發(fā)育早期IGFI蛋白保持較高的表達(dá)不但與早期胚胎的正常發(fā)育密切相關(guān)，而且還是維護(hù)正常胚胎和胎盤的生長所必需.IGFII在細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵入、分化和胎盤形成過程中以自分泌方式發(fā)揮重要作用.在妊娠的前3mo，IGFII對早期合體滋養(yǎng)層增殖和（或）分化起自分泌調(diào)節(jié)作用，在孕6wk左右，IGFII即隨絨毛外合體滋養(yǎng)層滲透和侵入到母體蛻膜，提示IGFII可能在滋養(yǎng)層侵入中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用［7］.Lpoez等［8］發(fā)現(xiàn)缺乏IGFII基因的裸鼠胎盤海綿體滋養(yǎng)層糖原合成與糖原細(xì)胞數(shù)量較正常組顯著下降，提示IGFII在胎盤中可調(diào)控糖原合成及糖原細(xì)胞的量，是糖原合成的重要調(diào)節(jié)器;人類IGFII作用與其相似，如胰島素一樣刺激葡萄糖在胎盤的轉(zhuǎn)運(yùn)及合成，對胎盤的形成與功能有顯著影響，從而進(jìn)一步影響胎兒的生長發(fā)育.本研究結(jié)果表明正常妊娠組IGFII的表達(dá)陽性率均明顯高于胚胎發(fā)育終止組，且母血中IGFII的含量在正常妊娠組也顯著高于胚胎發(fā)育終止組，說明胚胎發(fā)育早期IGFII蛋白保持較高的表達(dá)不但與早期胚胎的正常發(fā)育密切相關(guān)，而且是早期胚胎發(fā)育是重要調(diào)節(jié)因子之一.
Somi等［9］學(xué)者發(fā)現(xiàn)整個妊娠期間胎盤組織分泌的IGFII量是IGFI的近10倍，而我們的研究與此不一致，IGFI，IGFII分泌量結(jié)果相當(dāng).提示在維持胎盤生長過程中，IGFI和IGFII作用相似，檢測血中IGFI，IGFII的含量可能作為判斷胚胎發(fā)育狀況的一項(xiàng)客觀生化指標(biāo)，不僅可能用于胎兒在宮內(nèi)發(fā)育是否正常的監(jiān)測，也為應(yīng)用外源性胰島素樣生長因子治療流產(chǎn)、早產(chǎn)和胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩（IUGR）等妊娠疾病提供了理論依據(jù).
【參考文獻(xiàn)】
［1］GuidiceLC,IrwinJC.Rolesoftheinsulinlikegrowthfactorfamilyinnonpregnanthumanendometriumandatthedecidual:Trophoblastinterface［J］.SeminReprodEndocrinol,1999,17(1):13-21.
［2］GiudiceLC,DsupinBA,JinIH,etal.Differentialexpressionofmessengerribonucleicacidsencodinginsulinlikegrowthfactorsandtheirreceptorsinhumanuterineendometriumanddecidua［J］.JClinEndocrinolMetab,1993,76(5):1115-1122.
［3］GaoJG,ZhuHH,FanJ,etal.Progestinandantiprogestindifferentiallyregulatetheexpressionofinsulinlikegrowthfactors(IGFIandIGFII)messengerribonucleicacidinhumanendometrialstromalcells［J］.BiolReprod,1995,53(2):355-360.
［4］AllanGJ,FlintDJ,PatelK.Insulinlikegrowthfactoraxisduringembryonicdevelopment［J］.Reproduction,2001,122(1):31-39.
［5］StwartCE,RotweinP.Growthdifferentiationandsurvival:multiplephysiologicalfunctionsforinsulinlikegrowthfactors［J］.PhysiolRev,1996,76(4):1005-1026.
［6］陳其新,毛鑫智.胰島素樣生長因子對胚胎生長發(fā)育的作用［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2001,22(1):34-37.
［7］BakerJ,LiuJP,ElizabethEJ,etal.Roleofinsulinlikegrowthfactorsinembryonicandpostnatalgrowth［J］.Cell,1993,75(1):73-82.
［8］LopezMF,DikkesP,ZurakowskiD.InsulinlikegrowthfactorIIaffectstheappearanceandglycogencontentofglycogencellsinmurineplacenta［J］.Endocrinology,1996,137(5):2100-2108.
［9］SchaferSomiS.Cytokinesduringearlypregnancyofmammals:Areview［J］.AnimReprodSci,2003,75(12):73-94
