魚鰾補腎丸補骨脂素含量測定

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【摘要】目的建立高效液相色譜法測定魚鰾補腎丸中補骨脂素的含量。方法采用HypersilODSC18（4.6mm×200mm,5μm）色譜柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）為流動相，流速為1.0ml/min,檢測波長245nm。結果補骨脂素在0.07168～0.35840μg范圍內呈良好的線性關系，r=0.9999,平均回收率為100.29%（n=6）,RSD=1.47%。結論所建立的方法穩定、可靠，可為該產品建立質量控制方法提供參考。

【關鍵詞】高效液相色譜法；魚鰾補腎丸；補骨脂素；含量測定

【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofpsoraleninYubiaobushenpills.MethodsHypersilODSC18column（200mm×4.6mm,5μm）wasusedwithmobilephaseofacetonitrile-0.1%phosphoricacidsolution（30:70）.Theflowratewas1.0ml/minanddetectionwavelengthwas245nm.ResultsThelinearityrangeofpsoralenwas0.07168～0.35840μg（r=0.9999）,theaveragerecoveryratewas100.29%（n=6）withRSD1.47%.ConclusionThismethodisaccurate,reproducible,andcanbeusedforthequalitycontroloftheYubiaobushenpills.

【Keywords】HPLC;Yubiaobushenpill;psoralen;determination

魚鰾補腎丸由魚鰾膠、枸杞子、當歸、補骨脂、淫羊藿等組成，具有壯陽益精等功效，用于腎陽虛弱，腎精虧損所致的頭昏、眼花等。該藥品標準收載于《衛生部藥品標準中藥成方制劑》第八冊,缺含量測定項。方中補骨脂有補腎助陽的功效，為重要臣藥，其主要有效成分為補骨脂素和異補骨脂素［1］，本文采用高效液相色譜法對補骨脂的補骨脂素進行了含量測定研究。該方法穩定、可靠，可為該產品建立質量控制方法提供參考。

1儀器與試藥

島津LC-10AD高效液相色譜儀（配有SPD-10A檢測器，N2000色譜工作站），AE240電子分析天平（梅特勒公司）。補骨脂素對照品（供含量測定用，批號：110739-200309，中國藥品生物制品檢定所提供），3批魚鰾補腎丸（批號分別為：20060112，20060119，20060326）。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純化水，其他試劑均為分析純。

2溶液的制備

2.1對照品溶液精密稱取補骨脂素對照品17.92mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2供試品溶液取本品適量，剪碎，取約1.5g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）45min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液即得。

2.3缺補骨脂陰性樣品溶液取缺補骨脂陰性樣品，同“2.2”項下方法操作，即可。

3方法與結果

3.1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱為HypersilODSC18（4.6mm×200mm,5μm）,流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70），流速為1.0ml/min,柱溫為室溫。分別精密吸取“2”項下對照品溶液、供試品溶液及缺補骨脂陰性樣品溶液各10μl,注入液相色譜儀，按本色譜條件測定。結果補骨脂素理論塔板數為15000以上，補骨脂素與鄰近的雜質峰分離度為3.6以上，陰性樣品在補骨脂素對照品相同保留時間位置上未見色譜峰，說明方中其他成分對補骨脂素測定無干擾，結果見圖1。

3.2線性關系考察精密吸取“2.1”項下對照品儲備溶液（0.1792mg/ml）0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml,分別置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過。分別吸取續濾液10μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，并以峰面積（Y）對進樣量（X，μg）進行線性回歸，得線性方程：Y=4843233.40X+32673.65,r=0.9999,進樣量在0.07168～0.35840μg范圍內呈良好的線性關系。A.對照品B.樣品C.陰性樣品

圖1HPLC色譜圖

3.3精密度、重復性試驗和穩定性試驗按上述色譜條件，精密吸取“2.1”項下對照品溶液連續進樣6次，每次10μl,峰面積平均值為862783.9,RSD為0.7%,結果表明精密度良好。按“2.2”項下方法處理同一批樣品（批號：20060112）6份，HPLC分析，進樣量均為10μl，含量的平均值為0.3012mg/g，RSD為1.5%,結果表明重復性良好。精密吸取“2.2”項下供試品溶液10μl，按上述色譜條件于0、2、4、8、12h進樣測定，峰面積平均值為896126.5,RSD為2.0%，結果表明供試品溶液在室溫下12h內穩定。

3.4加樣回收試驗取已知含量的魚鰾補腎丸樣品（批號：20060119，含量為0.3065mg/g）6份，每份約0.75g，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液（0.02203mg/ml）各10ml,再按“2.2”項下方法制備供試品溶液，HPLC分析，進樣量均為10μl，結果見表1。表1加樣回收率測定結果

3.5樣品的測定精密稱取3批樣品（批號分別為：20060112，20060119，20060326）各3份，每份1.5g。按“2.2”項下方法制備供試品溶液，HPLC分析，進樣量均為10μl，按外標法計算補骨脂素含量，結果見表2。表2樣品測定結果

4討論

4.1流動相的選擇參考文獻資料［2，3］，試驗中考察了三組流動相系統：甲醇-水、乙腈-水，乙腈-0.1%磷酸溶液，結果表明以乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）為流動相對，補骨脂素峰基線分離，且峰形較好，故選擇流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）。

4.2提取方法的選擇［2，3］比較超聲提取與回流提取，發現補骨脂素提取率相差不大，因超聲提取供試品溶液所含雜質較少，且方法簡單，便于操作，故選擇超聲提取。曾試驗了甲醇和稀乙醇提取，結果甲醇優。考察了甲醇溶劑量（15，25，35ml），結果選擇甲醇25ml。考察了提取時間（30，45，60min），結果選擇45min。

4.3由于缺補骨脂陰性樣品在異補骨脂素對照品相同保留時間位置上有干擾色譜峰出現，故未建立其含量測定方法。

【參考文獻】

1江蘇新醫學院.中藥大辭典（上冊）.上海：上海人民出版社，1977，1177-1179.

2國家藥典委員會.中華人民共和國藥典，2005年版一部.北京：化學工業出版社，2005，129.

3傅欣彤，李琰，張小茜，等.HPLC法測定五味益腎酒中補骨脂素和異補骨脂素的含量.藥物分析雜志，2008，28（3）：405-410.