止痢寧片苦參堿HPLC測定

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【摘要】目的用HPLC法測定止痢寧片中苦參堿的含量。方法hplc用外標一點法，KromasilNH2柱，乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）為流動相，流速為1.0ml/min，λ=220nm。結果苦參堿在0.052125～0.417mg/ml范圍內呈良好線性，回歸方程為Y=5411430.52X+8349.86，r=0.9997（n=6），平均加樣回收率98.0%，RSD為0.72%（n=6）。結論方法簡便、準確，專屬性強，測定結果重復性好，為止痢寧片中苦參堿的定量分析提供了科學有效的方法。

【關鍵詞】止痢寧片；苦參堿；HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofMatrineinZhiliningpianbyHPLC.MethodsUsingKromasilNH2Column,Acetonitrile-Ethanolabsolute-3%Phosphoricacidglacial（80∶10∶10）asthemobilephase,detectionwavelengthas220nmandflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearatarangeof0.052125mg/ml～0.417mg/mlfortheMatrineandlinearequationwasY=5411430.52X-8349.86r=0.9997.Theaveragerecoverywas98.0%andtherelatedstandarddeviation（RSD）was0.72%（n=6）.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,whichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofMatrineinZhiliningPianandthereduplicationoftheresultwasgood.

【Keywords】ZhiliningPian；matrine；HPLC

止痢寧片收載于部頒藥品標準中藥成方制劑第四冊中，功能主治：清熱祛濕，行氣止痛。用于腸炎、痢疾，表現為腹痛瀉泄，下痢膿血，肛門灼熱，里急后重者［1］。處方由穿心蓮、苦參、木香組成，原標準中只有檢查項，沒有含量控制項。為了更好地控制止痢寧片的質量，提高止痢寧片的質量標準，筆者對止痢寧片處方進行了分析，經過預試驗及參考相關資料，進行本品中苦參堿含量測定，并進行了方法學研究，控制藥品質量。采用高效液相色譜法測定苦參堿含量，方法簡便快速，穩定可靠，專屬性強。

1儀器與試藥

1.1儀器高效液相譜儀：SPD-10A日本島津；紫外分光儀：上海康化生化儀器制造廠；超聲波清洗器：SK3200H上海科導超聲儀器有限公司。

1.2試藥苦參堿對照品（批號110805-200306）由中國生物制品檢定所提供；止痢寧片（批號：20070601、20070602、20070603）由河南百年康鑫藥業有限公司提供；止痢寧片對照藥品（批號：20060501）由江西某藥業有限公司生產；其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件［2］以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）為流動相；檢測波長為220nm；流速為1ml/min；柱溫為室溫。理論板數按苦參堿峰計算應不低于2000。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-無水乙醇（80：20）溶液，制成每毫升含苦參堿0.20mg的溶液，即得。色譜圖見圖1。

圖1苦參堿對照品色譜圖

2.2.2供試品溶液的制備取本品20片，研細，取0.5g，精密稱定，精密加入0.1mol/L鹽酸溶液50ml振搖使溶解，濾過，精密量取續濾液25ml，置分液漏斗中，用三氯甲烷15ml振搖提取1次，棄去三氯甲烷提取液，水層用氨試液調至強堿性，用三氯甲烷提取4次（15、10、10、10ml），合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘渣用乙醇適量轉移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，即得。色譜圖見圖2。

圖2止痢寧片色譜圖

2.2.3陰性樣品的測試取缺苦參的樣品，按供試品制備法制備陰性樣品后測定，在苦參堿相應位置無峰出現，說明陰性樣品的其他成分無干擾。色譜圖見圖3。

圖3陰性樣品色譜圖

2.3線性關系的考察精密稱苦參堿對照品適量，用乙腈-無水乙醇（80：20）溶液稀釋制成不同濃度的對照品溶液，分別為0.052125、0.10425、0.156375、0.2085、0.31275、0.417mg/ml，各進樣10μl，測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，苦參堿的濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程Y=5411430.52X+8349.86，r=0.9997（n=6）,表明苦參堿在0.052125～0.417mg/ml之間呈良好的線性關系。

2.4精密度試驗取濃度為0.2085mg/ml的苦參堿對照品溶液，精密吸取10μl，連續進樣6次，測定峰面積，測定結果RSD為1.44%，表明精密度良好。

2.5重現性試驗取本品20片（批號：20070601），稱取總重后研細，分別稱取6份，每份0.5g，精密稱定，然后按供試品溶液制備方法制備供試品溶液。按照含量測定方法，測定每份樣品中苦參堿的含量，結果RSD為1.66%，重現性良好。

2.6穩定性試驗取本品20片（批號：20070601），研細，稱取0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、8h測定峰面積，RSD為1.79%（n=5）。表明制備的供試品溶液在8h內穩定。

2.7加樣回收率試驗取本品20片（批號：20070601），稱取總重后研細，分別稱取6份，每份0.25g，精密稱定。分別置之50ml量瓶中，精密加入用0.1mol/L鹽酸溶液配制濃度為0.763mg/ml的苦參堿對照品溶液1.0ml，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，進樣量10μl，測定苦參堿含量，平均回收率為98.0%，RSD為0.72%（n=6）。見表1。表1加樣回收率試驗

2.8樣品測定按照供試品溶液制備方法對3批中試產品進行測定，測定結果見表2。表2樣品測定結果

3討論

根據含量測定結果，每片含苦參以苦參堿（C15H24N2O）計，均不少于1.1mg,由于各地苦參藥材的差別較大，因此暫規定：本品每片含苦參以苦參堿（C15H24N2O）計，不少于1.0mg。

在止痢寧片處方中，君藥為穿心蓮，其主要成分為穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯，《中國藥典》2005年版一部穿心蓮藥材就是以此成分控制穿心蓮藥材質量，為控制止痢寧片質量也擬測定止痢寧片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量來控制產品質量，但在陰性樣品試驗中，在與穿心蓮內酯對照品相應位置出現了嚴重干擾。

供試品溶液制備方法的考察：為了考察擬定供試品溶液制備方法的合理性，分別取3份樣品，精密稱定，按供試品溶液處理方法處理，在最后用三氯甲烷萃取時分別萃取3次（15、10、10ml）、4次（15、10、10、10ml）、5次（15、10、10、10、10），測定供試品溶液的含量，結果表明，萃取3次結果偏小，而萃取4次和萃取5次結果區別不大，故采用萃取4次。

【參考文獻】

1中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第四冊.北京：衛生部藥典委員會，1991，35.

2國家藥典委員會.中國藥典，2005年版一部.北京：化學工業出版社，2005，141.