垂盆草總黃酮含量測定
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【摘要】目的建立垂盆草中總黃酮含量的測定方法。方法采用紫外分光光度法，測定波長為501nm。結(jié)果總黃酮檢測濃度在0.01036～0.08288mg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好(r=0.9998)，平均加樣回收率為98.62%(RSD=1.11%，n=6)。結(jié)論本方法用于垂盆草中總黃酮的含量測定，結(jié)果準確、可靠、穩(wěn)定。
【關(guān)鍵詞】紫外分光光度法；垂盆草；總黃酮；含量測定
垂盆草(SedumsarmentosumBunge)又稱臥莖景天，系景天科多年生草本植物垂盆草的新鮮或干燥的全草，我國大部分地區(qū)均有分布。該藥味甘、淡、性涼，具有清熱解毒、利尿消腫、排膿生肌之效，主治丹毒潰瘍，小便不利及急、慢性肝炎等。據(jù)有關(guān)文獻報道，垂盆草中含有氰苷、黃酮類、甾醇類和三萜類等化合物［1，2］。潘金火等［3，4］對垂盆草的保肝降酶活性成分進行了一系列的研究，證明垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要存在于H2O部分和nBuOH部分（主要含苷類和總黃酮），進而確認其中的總黃酮是垂盆草中保肝降酶的主要活性組分之一。本文采用經(jīng)典的比色法對垂盆草中的總黃酮含量進行測定，以為其后繼的開發(fā)利用提供依據(jù)。
1儀器與試藥
UV2401型可見紫外分光光度計(日本島津公司)；bp211D型十萬分之一天平(德國賽多利斯公司)；索式提取器等。
蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:086-9303)；垂盆草(購于安徽省毫州市藥材總公司，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室王春根教授鑒定為SedumsarmentosumBunge的干燥全草，粉碎至40～60目)；亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁、乙醇等為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1對照品溶液的制備
精密稱取于120℃下減壓干燥至恒重的蘆丁對照品10.36mg，置50mL容量瓶中，加80%（體積分數(shù)）乙醇35mL超聲使之完全溶解，冷卻至室溫，以80%（體積分數(shù)）乙醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度0.2072mg/mL的蘆丁對照品溶液，冷藏，備用。
2.2供試品溶液的制備
精密稱取垂盆草藥材粉末1.0g，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）100mL在85℃水浴溫度條件下回流提取至無色，棄去石油醚，藥渣揮干石油醚，再用80%（體積分數(shù)）乙醇100mL在100℃水浴溫度條件下回流提取6h，冷卻后，用80%（體積分數(shù)）乙醇定容至100mL,備用。
2.3定性鑒別反應(yīng)
2.3.1氨水反應(yīng)
取樣品溶液點于濾紙上，將濾紙在氨水上方熏15min，立即置紫外光下觀察(254nm)，呈黃綠色熒光斑點。
2.3.2三氯化鋁反應(yīng)
取樣品溶液點于濾紙上，滴加5%（質(zhì)量分數(shù)）三氯化鋁甲醇溶液，吹干呈灰黃色，在紫外光下(254nm)觀察，呈黃綠色熒光斑點。
2.3.3鹽酸-鎂粉反應(yīng)
取樣品1mL，加少許鎂粉，再滴加幾滴濃鹽酸，水浴加熱2min后顯紅色。
2.4測定波長的選擇
精密量取對照品溶液3mL和供試品溶液5mL，分別置10mL容量瓶中，加5%（質(zhì)量分數(shù)）亞硝酸鈉溶液0.4mL，混勻，放置6min；加10%（質(zhì)量分數(shù)）硝酸鋁溶液0.4mL，放置6過min；加4%（質(zhì)量分數(shù)）氫氧化鈉溶液1.0mL，用80％（體積分數(shù)）乙醇定容至刻度，搖勻，放置15min，以80％（體積分數(shù)）乙醇為空白同法配制空白對照液。在400～700nm波長處掃描，對照品與供試品溶液顯色后均在501nm左右波長處有最大吸收，故將501nm作為測定波長。紫外光譜圖見圖1。
1．供試品;2．蘆丁對照品;3．陰性對照
圖1紫外掃描圖譜（略）
Fig.1UVSpectrum
2.5專屬性試驗
取“2.2”項下供試品溶液5mL,置10mL容量瓶中，加80%（體積分數(shù)）乙醇至刻度，以80%（體積分數(shù)）乙醇溶液為空白對照液，在400～700nm波長處掃描。未經(jīng)顯色的供試品在501nm左右波長處基本無吸收，說明此顯色方法的專屬性較強。紫外掃描光譜見圖1。
2.6標準曲線的繪制
分別精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL，各置10mL容量瓶中，分別加80%（體積分數(shù)）乙醇至5mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.4mL，混勻，靜置6min；加入10%（質(zhì)量分數(shù)）硝酸鋁溶液0.4mL，搖勻，靜置6min，加入4%（質(zhì)量分數(shù)）氫氧化鈉溶液1.0mL，再加80%（體積分數(shù)）乙醇至刻度，搖勻，放置15min，以80％（體積分數(shù)）乙醇為空白同法配制空白對照液。分別于501nm波長處測定吸光度，以吸光度值(A)對質(zhì)量濃度(ρ)進行線性回歸，得回歸方程ρ=0.0865A+0.0012(r=0.9998)。結(jié)果表明，蘆丁檢測濃度在0.01036～0.08288mg/mL范圍內(nèi)線形關(guān)系良好。
2.7精密度試驗
取“2.1”項下對照品溶液5mL，置25mL容量瓶中，按“2.4”項下的方法顯色，于501nm波長處測吸光度5次。結(jié)果，吸光度平均值為0.4616，RSD=1.94%，表明該方法精密度良好。
2.8穩(wěn)定性試驗
取“2.2”項下供試品溶液5mL,置10mL容量瓶中，按“2.4”項下的方法顯色，于0、20、40、60、80、100、120min時測定吸光度。結(jié)果RSD=1.16％。表明樣品顯色后120min內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.9重現(xiàn)性試驗
取藥材樣品1.0g，共6份，精密稱定，按“2.2”項下方法制備各供試品溶液，各取5mL再按“2.4”項下的方法顯色，于501nm波長處測定吸光度。按標準曲線法計算，結(jié)果，總黃酮的平均含量為1.21%，RSD=1.67%，表明本方法重現(xiàn)性良好。
2.10加樣回收率試驗
精密稱取于120℃下減壓干燥至恒重的蘆丁對照品50.86mg，置50mL容量瓶中，加80%（體積分數(shù)）乙醇35mL超聲使之完全溶解，冷卻至室溫，以80%（體積分數(shù)）乙醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度1.0172mg/mL的蘆丁對照品溶液，備用。取垂盆草藥材約0.5g，共6份，精密稱定，置索氏提取器中，分別加入濃度為1.0172mg/mL的蘆丁對照品溶液6mL，按“2.2”項下方法制備各供試品溶液。取各供試品溶液5mL，再按“2.4”項下的方法顯色，于501nm波長處測定吸光度，采用隨行標準，標準曲線法定量，結(jié)果見表1。
2.11樣品含量測定
取3個批號的垂盆草藥材約1.0g,每批兩份，精密稱定，按“2.2”項下的方法制備各供試品溶液，各取5mL再按“2.4”項下的方法顯色，于501nm波長處測定吸光度。按標準曲線法計算，結(jié)果3個批號070101、070111、070121的總黃酮含量分別為1.21%、1.24%和1.20%。
表1蘆丁加樣回收率試驗（略）
Tab.1Resultsofrecoverytest
3討論
提取總黃酮可采用不同濃度的甲醇、乙醇、丙酮等作溶劑，但黃酮類化合物基本不溶于石油醚［5，6］，故先用石油醚脫脂，再選用80%（體積分數(shù)）乙醇作溶劑，可將黃酮苷和苷元較完全地提取出來，并避免和減少多種水溶性成分的溶出。實驗結(jié)果表明，在該條件下總黃酮含量較高，為1.22％。垂盆草中黃酮類化合物具有很好的保肝降酶作用，所以垂盆草有很好的開發(fā)利用價值。
【參考文獻】
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