生物技術(shù)在植物檢疫檢測(cè)的應(yīng)用

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【摘要】通過(guò)對(duì)免疫學(xué)以及分子生物學(xué)等領(lǐng)域的研究，新型的生物技術(shù)得以衍生出來(lái)，其在使用的過(guò)程中能夠快輸?shù)膶⒅参镏写嬖诘挠泻ι餀z測(cè)出來(lái)，從而為植物的健康生長(zhǎng)繁育做鋪墊。總之，生物技術(shù)的研制與應(yīng)用，提高了植物檢疫檢測(cè)的工作效率，本文作者認(rèn)為在長(zhǎng)期實(shí)踐的配合下，現(xiàn)有的生物技術(shù)也會(huì)不斷的創(chuàng)新改良，其在植物檢疫檢測(cè)中成為常規(guī)的檢疫檢測(cè)手段將不會(huì)是天方夜譚。

【關(guān)鍵詞】生物技術(shù)；植物檢疫；檢測(cè)；運(yùn)用

隨著我國(guó)對(duì)外開(kāi)放政策的編制與實(shí)施，國(guó)際貿(mào)易活動(dòng)開(kāi)展的越來(lái)越頻繁，尤其是加入WTO之后，在植物檢疫檢測(cè)工作中，免疫學(xué)技術(shù)以及核酸技術(shù)這些生物學(xué)技術(shù)獲得了很大的應(yīng)用空間，使傳統(tǒng)的檢測(cè)手段漸漸退出應(yīng)用的平臺(tái)。本文對(duì)免疫學(xué)技術(shù)、核酸技術(shù)這兩種生物技術(shù)的在植物建議檢測(cè)方面應(yīng)用進(jìn)行分析[1]，認(rèn)為生物技術(shù)的會(huì)有更大的發(fā)展前景。

一、免疫學(xué)技術(shù)

1.酶聯(lián)免疫法

2.在上個(gè)世紀(jì)70年代，酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA)被研發(fā)，在植物檢疫檢測(cè)中能夠快速的將植物病毒、真菌以及MLO檢測(cè)出來(lái)。

（1）病毒方面：

將植物種子中的大豆花葉病毒(SMV）、苜蓿花葉病毒（AMV)、煙草環(huán)斑病毒（TRSV）檢測(cè)出來(lái)；作用于蚜蟲(chóng)這一介體昆蟲(chóng)身上，能夠?qū)ⅠR鈴薯卷葉病毒（PLRV）與黃瓜花葉病毒(CMV）檢測(cè)出來(lái)；對(duì)于果樹(shù)、苗木這類(lèi)植物，酶聯(lián)免疫法的應(yīng)用使溫州柑桔矮縮病毒(SDV）、扇葉病毒(GFLV)、李壞死環(huán)斑病毒(PNRSV)等病毒的診斷與檢測(cè)工作順利的運(yùn)行。

（2）真菌方面：

生物技術(shù)在植物建議檢測(cè)中的應(yīng)用主要借助ELISA試劑盒將腐霉、黑盤(pán)菌，其中ELISA試劑盒中培育土壤懸浮液就能夠精確的將大豆根莖組織中存有的大豆疫霉菌檢測(cè)出來(lái)，這是因?yàn)橥寥来蠖挂呙咕逆咦印⒙焰咦右约熬z都處于游動(dòng)的狀態(tài)中，隱地疫霉存在于大豆根莖病組織中，在懸浮液的作用下疫霉游動(dòng)的孢子就被順利的檢疫檢測(cè)出來(lái)；在類(lèi)菌原體方面，免疫技術(shù)也得到了切實(shí)的應(yīng)用，例如其可以將植物體內(nèi)的翠菊黃化病、桃X病、花生叢枝病這些MLO病害檢測(cè)并鑒定出來(lái)；

（3）細(xì)菌方面

：免疫學(xué)技術(shù)對(duì)水稻條斑性病細(xì)菌的檢測(cè)起到了極好的成效，靈敏度可達(dá)102～103個(gè)菌/mL。其實(shí)酶聯(lián)免疫法的檢測(cè)樣式也是多樣化的，最具代表性的就是DASMELISA，其利用酶與底物產(chǎn)生的顏色與抗原含量成正比的原理，而廣泛應(yīng)用于植物病毒的定量檢測(cè)中。

2.免疫熒光技術(shù)

簡(jiǎn)稱(chēng)IF，在植物檢測(cè)中是以抗體為基礎(chǔ)的一種檢測(cè)方法，在植物組織、種子以及土壤中細(xì)、真菌的檢測(cè)中都取得了較好的應(yīng)用效果。該技術(shù)目前將菜豆萎蔫病菌成功的檢測(cè)出來(lái)，因?yàn)槠潇`敏度較高的優(yōu)勢(shì)使假陽(yáng)性反應(yīng)問(wèn)題得以避免或者是杜絕；IF在土塘根組織的辣闌疫霉、樟疫霉，根莖組織中的蕓苔根腫菌、組織切片中的菌絲所取得的檢測(cè)效果優(yōu)于ELISA。而免疫熒光技術(shù)分為兩種類(lèi)型，即為直接與間接免疫熒光技術(shù)，與直接免疫熒光技術(shù)相比間接免疫熒光技術(shù)擁有更大的應(yīng)用空間，這是由于其能將一抗、二抗有機(jī)熒光素能夠完美的結(jié)合為一體，此時(shí)在免疫熒光顯微儀器道德作用下發(fā)射出的熒光性質(zhì)就被檢測(cè)出來(lái)。例如含有熒光色素抗體的細(xì)菌陽(yáng)性細(xì)胞在IF的配合之下在顯微鏡下順利的檢疫檢測(cè)出來(lái)，此時(shí)IF的靈敏度在103～105cfu/mL范圍之內(nèi)，這一生物技術(shù)的應(yīng)用，使熒光細(xì)胞的數(shù)量清楚的顯現(xiàn)出來(lái)，同時(shí)其形態(tài)特征也是清晰化的。

3.斑點(diǎn)免疫法

簡(jiǎn)稱(chēng)DIA技術(shù)，其是借助生物酶對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記，將其吸附在硝酸纖維素膜（NC)或者是其他支持物之上，但是這些支持物必須滿(mǎn)足與抗原特異性結(jié)合的屬性，在底液的作用下NC膜上產(chǎn)生顏色、形態(tài)各異的有色斑點(diǎn)。這一免疫學(xué)檢測(cè)方法在植物病毒、MLO的檢疫檢測(cè)中得到廣泛的推廣與應(yīng)用。目前DIA技術(shù)將那些從荷蘭進(jìn)口的石竹香石竹環(huán)斑病毒、在從美國(guó)進(jìn)口的馬鈴薯脫毒組織培養(yǎng)苗中將PVX、PVY等病毒順利的檢測(cè)出來(lái)；此外DIA技術(shù)對(duì)煙草環(huán)斑病毒、煙草脈斑駁病毒、番茄花葉病毒等MLO病害的檢疫檢測(cè)達(dá)到了一定的效果。DIA技術(shù)一般分為直接法、間接法、雙抗體夾心法，其自身攜有靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果保存時(shí)間長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)，成為了現(xiàn)代植物病害檢測(cè)中快速診斷檢測(cè)有效方法之一。

二、核酸技術(shù)

1.核算探針

其利用同位素或非同位素能夠把互補(bǔ)核酸序列中的部分寡聚核苷酸檢測(cè)出來(lái)的一項(xiàng)生物技術(shù)，在植物病蟲(chóng)害診斷、病原物的檢測(cè)都有應(yīng)用，前者將柑桔病毒病、蘭花病毒病、香石竹環(huán)斑病毒病等檢測(cè)出來(lái)；病原物分為類(lèi)菌原病（桃X病、玉米叢矮病等）、類(lèi)病毒（柑桔裂皮病、椰子敗生類(lèi)病毒等）以及植物病原細(xì)菌（線蟲(chóng)等）檢測(cè)出來(lái)。該技術(shù)的雜交檢測(cè)方法是多種多樣的，利用率最高的是印跡雜交法，其靈敏度比ELISA高出2~3級(jí)，該雜交探針在植物病毒、類(lèi)病毒、類(lèi)菌原體檢疫檢測(cè)中擁有極大的應(yīng)用空間；

2.RFLP技術(shù)

作為一種DNA檢測(cè)技術(shù)，能夠?qū)⒅参镏写嬗械牟≡锓N、變種、專(zhuān)化型和生理小種迅速的診斷檢測(cè)逼格鑒定出來(lái)，例如與線蟲(chóng)存在親緣關(guān)系的馬鈴薯金線蟲(chóng)與馬鈴薯白線蟲(chóng)，作用于北方根結(jié)線蟲(chóng)能夠?qū)和B兩個(gè)生理小種檢測(cè)并辨別出來(lái)；在真菌方面，RFLP技術(shù)在mtDNA的輔助下將大豆疫霉菌和苜蓿疫霉精準(zhǔn)的區(qū)分出來(lái)。

總之，這一分子生物學(xué)技術(shù)具有靈敏度高、被檢樣品需求量少、結(jié)果產(chǎn)生快速以及操作簡(jiǎn)易等特點(diǎn)，其在植物病毒檢疫方面具有較大的優(yōu)勢(shì)。結(jié)束語(yǔ)：與植物輻照等多種傳統(tǒng)檢疫檢測(cè)技術(shù)相比較，無(wú)論是免疫學(xué)技術(shù)還是核酸技術(shù)，其憑借靈敏度高、精準(zhǔn)性好、產(chǎn)生結(jié)果迅速等優(yōu)勢(shì)迎來(lái)了大量的使用者。但是由于造價(jià)成本高等外在條件的制約，這些生物技術(shù)僅僅在科研單位得到切實(shí)的應(yīng)用，但是我們相信隨著我國(guó)科學(xué)技術(shù)的不斷的發(fā)展，這些生物技術(shù)存在的缺陷會(huì)及時(shí)的得到彌補(bǔ)，應(yīng)用流程將會(huì)越來(lái)越簡(jiǎn)單，免疫學(xué)技術(shù)與核酸技術(shù)將會(huì)成為植物病害、病毒、細(xì)菌檢測(cè)鑒定的常規(guī)手段。

參考文獻(xiàn)

[1]朱延書(shū),康寧.生物技術(shù)在植物檢疫檢測(cè)中的應(yīng)用[J].江蘇林業(yè)科技,2003,03:42-47.

[2]王炳奎，吳慶，陳金躍．輻照技術(shù)在植物檢疫中的應(yīng)用［J］．農(nóng)業(yè)科技通訊，2010(4):100-102

作者：趙紅梅單位：宣恩縣森林植物檢疫站