和胃止痛片薄層鑒別論文

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【摘要】目的建立和胃止痛片的質量標準。方法采用高效液相色譜法測定方中黃連藥材中鹽酸小檗堿（C20H17NO4·HCl）的含量。并同時對黃連、延胡索、木香進行薄層鑒別。結果鹽酸小檗堿含量測定進樣量在0.085～0.850μg有良好的線性，r=0.9999，平均回收率96.7%，RSD為1.53%。TLC定性鑒別陰性無干擾，對照品與供試品溶液斑點對應整齊、清晰。結論該檢測方法方便，準確，重現性好，可用于該制劑的質量控制。

【關鍵詞】和胃止痛片；薄層鑒別；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿

前言

和胃止痛片收載于《國家中成藥標準匯編·中成藥地方標準上升國家標準部分》，由大紅袍、雞矢藤、管仲、金蕎麥、黃連、砂仁、延胡索、木香8味藥材組成。功能主治彝醫：猜尼圍快，圍斯希；中醫：行氣活血，和胃止痛。用于肝胃氣滯，濕熱淤阻所致的急慢性胃腸炎、胃及十二指腸潰瘍、慢性結腸炎。和胃止痛片是中成藥中治療這類疾病的良藥，市場需求量大。為了控制質量筆者對方中的黃連、延胡索、木香進行薄層鑒別，用高效液相色譜法對黃連中的鹽酸小檗堿的含量測定進行了研究。

1儀器與試藥

1.1儀器

AgilentG1311AQuatPump，G1314AVWD，G1379ADEGASSER，AT-330柱溫箱，XtemaRp18（150mm×3.9mm，5μm）色譜柱，塞多利斯全自動電子天平(德國塞多利斯)。

1.2試藥硅膠G（青島海洋化工廠）;色譜純乙腈;其它試劑均為分析純；鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，編號為110713-200208，為供含量測定用）;延胡索乙素對照品（中國藥品生物制品檢驗所提供，延胡索乙素對照品批號：110726-200208,供定性測定用）;和胃止痛片樣品（自制）。

2方法與結果

2.1定性鑒別

2.1.1黃連的薄層鑒別［1］

取本品25片，研細，加氨試液1.5ml使潤濕，加三氯甲烷30ml，超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材0.5g和處方中不含黃連藥材按制備方法制成陰性樣品，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述3種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無干擾。見圖1。

2.1.2延胡索的薄層鑒別［2］

取本品50片，研細，加甲醇50ml，超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用濃氨試液調節pH值至8～10，用乙醚振搖提取3次，15ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。另取處方中不含延胡索藥材按制備方法制成陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述3種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮（9∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰。日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無干擾。見圖2。

2.1.3木香的薄層鑒別

取本品10片，研細，加三氯甲烷10ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。取去氫木香內酯和木香烴內酯對照品適量，加甲醇制成每毫升各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。另取處方中不含木香藥材按制備方法制成的陰性樣品再按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環己烷（5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾。見圖3。

2.2含量測定

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取在100℃干燥5h的鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每毫升中含鹽酸小檗堿60μg的溶液，過濾即得。

2.2.2供試品溶液的制備［3］取本品10片，除去包衣，研細，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率90W，頻率59kHz）40min，取出，放冷再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3色譜條件與實驗結果色譜柱：XtemaRp18（150mm×3.9mm，5μm）；柱溫：30℃；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）（每100ml加十二烷基磺酸鈉0.1g）；檢測波長265nm；流速1ml/min，照此條件分析，制劑中的鹽酸小檗堿的主峰和其它組分均能達到基線分離。對照品溶液、供試品溶液及缺黃連的陰性對照品溶液的色譜圖。見圖4～6。

2.2.4線性范圍的考察精密稱取鹽酸小檗堿對照品17.0mg，置25ml量瓶中，加80%甲醇溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻（濃度為680μg/ml），再分別精密吸取對照品母液適量，用80%甲醇溶液稀釋成不同濃度的對照品溶液：17.0，34.0，68.0，85.0，170.0μg/ml。分別精密吸取上述不同濃度的對照品溶液各5μl，按正文中色譜條件分析進樣，以峰面積積分值為縱坐標，鹽酸小檗堿的量為橫坐標繪制標準曲線（圖7）,計算得鹽酸小檗堿回歸方程：Y=3685.12628X+15.65202017，r=0.99993。表明鹽酸小檗堿進樣量在0.085～0.850μg范圍內具有良好線性關系。

2.2.5精密度實驗精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液(68.0μg/ml)5μl，重復進樣5次，按上述色譜條件測定峰面積。求相對標準偏差以鹽酸小檗堿峰面積積分值計RSD為0.54%。表明儀器精密性良好。

2.2.6重現性實驗分別取同一批（20051001）和胃止痛片樣品5份，按正文中含量測定項下方法實驗，測定鹽酸小檗堿的含量。樣品中鹽酸小檗堿含量的相對標準偏差為0.57%，表明此法重現性良好。

2.2.7穩定性實驗取上述標準曲線項下的鹽酸小檗堿對照品溶液(68.0μg/ml)及和胃止痛片供試品溶液各5μl，分別在0，2，4，6，8，12進樣，按正文中含量測定項下條件測定對照品、供試品在0～12h內峰面積的RSD分別為0.76%，0.81%，表明對照品、供試品放置12h內基本穩定。

2.2.8加樣回收率實驗精密稱取鹽酸小檗堿對照品（100℃干燥5h）15.4mg，置10ml量瓶中，加80%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成（1.54mg/ml）對照品溶液。取同一批（20051001）已知含量的和胃止痛片（5.79mg/g）精密稱取樣品各5份，每份約0.25g，分別精密加入上述鹽酸小檗堿對照品溶液各1ml，按正文中含量測定項下方法測定供試品溶液并測定其鹽酸小檗堿的含量。平均回收率為96.7%，相對標準偏差為1.53%，表明此法回收率良好。結果見表1。表1加樣回收率實驗結果（略）超級秘書網

2.2.9樣品含量測定取本品10批，按正文中含量測定項下方法測定。結果見表2。表210批和胃止痛片樣品含量測定結果（略）

3討論

實驗過程中對鹽酸小檗堿對照品的80%甲醇溶液進行停泵掃描，波長范圍為190nm至400nm。結果鹽酸小檗堿的紫外特征吸收最大265nm，由于在265nm處檢測系統易穩定，峰形好、響應大，確定265nm為檢測波長。

由于不同產地及采收時間等原因導致黃連藥材中的鹽酸小檗堿的含量有高有低，結合以上10批樣品中鹽酸小檗堿的含量測定結果，將本品中鹽酸小檗堿的含量定為每片含黃連以鹽酸小檗堿計，應不得少于0.70mg。

【參考文獻】

［1］余小婷，幸而，黃紅雯.和胃止痛膠囊質量標準研究［J］.中南藥學，2004，2（5）：291.

［2］樸惠善，沈光海，鄭云花，等.紫外分光光度法測定關蒼術復方制劑中延胡索乙素含量［J］.延邊醫學院學報，1996，19(1)：11.

［3］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：213，附錄VIB.