脂肪干細胞免疫學(xué)性質(zhì)探討

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1資料與方法

1.1一般資料

搜集本院2014年3月~2015年3月健康志愿者6例,志愿者均與抽脂要求相符,作為研究組；另選同期6例健康志愿者作為對照組。納入標準：均對本研究知情；均身體健康。研究組女3例,年齡21~37歲,平均年齡(28.46±3.36)歲；男3例,年齡20~38歲,平均年齡(29.65±3.34)歲。對照組女3例,年齡22~38歲,平均年齡(28.51±3.29)歲；男3例,年齡21~38歲,平均年齡(29.70±3.42)歲。兩組健康志愿者性別、年齡一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25g,將其放在離心管中,后轉(zhuǎn)為培養(yǎng)皿中,準備處理,離心管與培養(yǎng)皿均為無菌；剔除組織中筋膜及血管,使用無菌溶液反復(fù)進行沖洗；處理后,用眼科剪對其進行分割,大小約為1.5mm3,直至分割成糊狀,在37℃環(huán)境下,選擇Ⅰ型膠原酶(0.1%)予以震蕩進行消化處理,速度為120r/min；采用LG-DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清(10%)終止消化,并離心10min,后獲得高濃度的間質(zhì)組織細胞團,對其進行處理,選擇紅細胞裂解液,并去除紅細胞,采用篩網(wǎng)(100μm)進行過濾；將過濾液取出,使用鏈霉素100g/L、青霉素100U/ml、LG-DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清進行重懸處理；處理后,將其置于培養(yǎng)皿中,直徑為100mm,接種,設(shè)定濃度4×104/cm2；接種后,在體積分數(shù)5%CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),溫度設(shè)定為37℃,且每隔2d更換一次培養(yǎng)液；待細胞生長檢測80%~90%時,按照比例1∶2進行傳代培養(yǎng)。觀察目標細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點,方法選擇流式細胞術(shù)。首先使用BSA-PBS溶液(0.5%)對脂肪干細胞標本進行洗滌,離心10min,1000r/min,獲取單細胞懸液,轉(zhuǎn)變細胞濃度1×109/L；其次對組織相容性抗原Ⅰ(MHCⅠ)、MHCⅡ、CD44、CD29、CD90、CD31、CD45、CD34進行熒光標記,將標記后物質(zhì)加入懸液,將其和熒光標記的非特異性IgG同型進行對比分析,在37℃環(huán)境下進行培養(yǎng),30min后,反復(fù)使用PBS進行處理,使用多聚甲醛予以固定,用量30g/L,最后實施檢測,儀器選擇流式細胞儀。

1.3觀察指標

觀察細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點,同時對異體脂肪干細胞及淋巴細胞共同培養(yǎng)的增殖情況進行觀察。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(x-±s)表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1脂肪干細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點

采用流式細胞術(shù)檢測脂肪干細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點,陰性表達抗原：CD31(2.81±1.04)%,CD34(17.12±0.54)%,CD45(1.39±0.27)%。陽性表達抗原：CD29(91.22±1.03)%,CD44(90.83±2.37)%,CD90(94.02±0.69)%。由此得知,脂肪干細胞無造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細胞污染問題。

2.2淋巴細胞共同培養(yǎng)情況

對照組與研究組CPM比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),表示脂肪干細胞對異體移植的排斥作用較小。

3討論

脂肪的組織基質(zhì)內(nèi)存在大量ADSCs,作為成體干細胞,具有多向分化潛質(zhì),在誘導(dǎo)條件適宜的情況下可分化成軟骨細胞、成骨細胞及脂肪細胞等,且增殖能力較強。研究顯示,ADSCs不僅具有細胞多分化功能,如軟骨、肌肉、成骨、神經(jīng)、脂肪等,而且其表面標志表達同BMSs(骨髓間充質(zhì)干細胞)一致,包括CD166、CD106、CD105、CD29等。B7-1、HLA類抗原、B7-2、CD40L和CD40在BMSc不表達,體外BMSc能對淋巴細胞的反應(yīng)進行抑制,而體內(nèi)應(yīng)用BMSc可使異體移植皮片成活時間延長,故同種異體BMSc是目前組織工程主要細胞來源。體外培養(yǎng)時ADSCs對淋巴細胞增殖的抑制及刺激能力為ADSCs體外的免疫學(xué)性質(zhì),試驗包括單向淋巴細胞增殖反應(yīng)、雙向淋巴細胞增殖反應(yīng),前者主要用以檢測刺激細胞ADSCs所致淋巴細胞的增殖程度,數(shù)值用增殖后的數(shù)量表達,且數(shù)值和ADSCs免疫原性之間呈正相關(guān)；后者主要用來檢測雙方抑制淋巴細胞增殖的作用,不對兩種細胞進行滅活,互相作為反應(yīng)細胞及刺激細胞,數(shù)值用增殖后兩種細胞的總數(shù)量表達。ADSCs體外試驗與多種可控因素相關(guān),在體內(nèi)試驗中,ADSCs免疫學(xué)性質(zhì)為復(fù)雜性免疫反應(yīng)綜合作用的結(jié)果,異基因抗原免疫反應(yīng)與細胞因子、補體系統(tǒng)等密切相關(guān)。脂肪干細胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細胞污染問題,對異體移植的排斥作用較小,臨床應(yīng)加強對細胞分離及培養(yǎng)的深入研究。

作者：韋慧玲 單位：河南省鄭州市第七人民醫(yī)院檢驗科