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一、知識結(jié)構(gòu)二、教學(xué)目的
1.真核細(xì)胞細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)和主要功能(C:理解)。
2.原核細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)(B:識記)。
三、重點和難點
1.教學(xué)重點
(1)真核細(xì)胞的核膜和染色質(zhì)。
(2)原核細(xì)胞中擬核的結(jié)構(gòu)特點。
2.教學(xué)難點
關(guān)于真核細(xì)胞細(xì)胞核中的染色質(zhì),在細(xì)胞有絲分裂過程中的形態(tài)變化。
四、教學(xué)建議
本小節(jié)的教學(xué)內(nèi)容可用1課時講授,包括細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)和功能,原核細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)兩部分內(nèi)容。前者應(yīng)更多地采用觀察分析方法,使學(xué)生重點掌握染色質(zhì)的組成,了解其功能。后者主要通過對比的方法,使學(xué)生了解原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的異同,認(rèn)識原核細(xì)胞的原始性。
在關(guān)于細(xì)胞核的教學(xué)中,要利用模式圖,通過觀察概括出細(xì)胞核主要包括核膜、核質(zhì)、核仁、染色質(zhì)幾部分。然后,重點分析核膜和染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)、成分和功能。
關(guān)于核膜的結(jié)構(gòu),應(yīng)注意讓學(xué)生觀察到核膜與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相通連,認(rèn)識到核膜同樣是選擇透過性膜,它控制著細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的物質(zhì)交換,對核內(nèi)的物質(zhì)具有保護作用。細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)間存在著頻繁的、大量的大分子物質(zhì)的交流,核孔就成為這些大分子的理想通道。通過這種分析,使學(xué)生理解核膜的結(jié)構(gòu)特點是與其功能相適應(yīng)的。
在講述染色質(zhì)時,可以適當(dāng)結(jié)合示意圖,把染色質(zhì)細(xì)絲的分子組成直觀地表現(xiàn)出來。使學(xué)生了解,一條染色質(zhì)細(xì)絲是由一條DNA分子,纏繞在多種蛋白質(zhì)球體上形成的串珠狀結(jié)構(gòu)。
在講述染色質(zhì)與染色體的關(guān)系時,要注意強調(diào)它們是同一種物質(zhì)的兩種形態(tài)。伸展的染色質(zhì)形態(tài)有利于在它上面的DNA儲存的信息的表達,而高度螺旋化了的棒狀染色體則有利于細(xì)胞分裂中遺傳物質(zhì)的平分。
在講述細(xì)胞核的功能時,應(yīng)重點講述它是DNA儲存場所和復(fù)制的場所。要讓學(xué)生理解細(xì)胞核控制著細(xì)胞的生活,決定著生物體的性狀。如果時間允許,可具體闡述教材中的例子,證明細(xì)胞核的這種作用。
在講述原核細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)時,建議列出對比表,從大小、細(xì)胞壁、細(xì)胞器、細(xì)胞核幾方面概括出它與真核細(xì)胞的區(qū)別。在對比中,應(yīng)滲透原核細(xì)胞的原始性,真核細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和完善性。
五、參考答案,全國公務(wù)員共同天地
復(fù)習(xí)題二、1.(C);2.(D);3.(D);4.(C)。
三、主要有以下幾點不同:1.細(xì)菌的體積較小;2.細(xì)菌的細(xì)胞壁不含纖維素,主要成分是肽聚糖;3.細(xì)菌的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)只有分散的核糖體,沒有其他復(fù)雜的細(xì)胞器。
六、參考資料
間期細(xì)胞核的形態(tài)和結(jié)構(gòu)間期細(xì)胞核大多呈球形或卵球形,但是隨物種和細(xì)胞類型不同而有很大差別,有的呈分枝狀、帶狀。在哺乳動物中,嗜中性白細(xì)胞的核就是多葉形,而平滑肌的細(xì)胞核則為桿狀。核的形狀往往同細(xì)胞的形狀有直接關(guān)系。多角形、立方形和圓形的細(xì)胞,其核多呈圓形。細(xì)胞核的位置多處于細(xì)胞的中央,如果細(xì)胞的內(nèi)含物增多,則可以把核擠到一側(cè)。例如,植物細(xì)胞的液泡增大后,核就偏到一側(cè)。動物的脂肪細(xì)胞中脂肪滴加大后,核就被擠到細(xì)胞邊緣,呈扁盤狀。但是,不論細(xì)胞核是什么形狀,其核膜多是凹凸不平的,有的甚至缺刻深陷,將核分葉。細(xì)胞核在細(xì)胞生活周期中,形狀變化很大,在有絲分裂階段時,細(xì)胞核可以暫時解體。
核膜的結(jié)構(gòu)特點在細(xì)胞核的有雙層膜結(jié)構(gòu),稱為核膜。核膜是核的邊界,由內(nèi)外兩層單位膜組成。核膜的每層膜厚約6.5nm,兩層膜間隔10~50nm的空隙,稱為核周腔。有的細(xì)胞中,可看到核周腔同內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的腔隙相連通。在核膜外層的外表面上有顆粒狀的核糖體,它們有合成蛋白質(zhì)的功能。內(nèi)層核膜與染色質(zhì)纖維相連,不僅染色質(zhì)纖維的兩端連在核膜上,而且染色體的松散部分也常位于核孔的附近。
核膜并不是完全連續(xù)的,有許多部位的核膜內(nèi)外兩層互相連接,形成了穿過核膜的小孔,稱為核孔。核孔是核質(zhì)與細(xì)胞質(zhì)進行物質(zhì)交換的重要通道。核孔不是單純的小孔,結(jié)構(gòu)相當(dāng)復(fù)雜,因此這種小孔又叫核孔復(fù)合體。核孔的直徑大約70~80nm,核孔通道的直徑約9nm。核孔的密度和總數(shù)因細(xì)胞類型不同而異。轉(zhuǎn)錄活動低或不進行轉(zhuǎn)錄活動的細(xì)胞,核孔很少。核孔在核膜上的分布不均勻,有一定的區(qū)域差別,核質(zhì)與細(xì)胞質(zhì)之間物質(zhì)交換旺盛的部位核孔數(shù)目多。
核孔是細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)進行物質(zhì)交換的重要通道。在核中裝配好的核糖體亞單位,就是穿過核孔復(fù)合體進入細(xì)胞質(zhì)的。但是,不是所有的RNA都可以自由穿過核孔,它們只有在核內(nèi)經(jīng)過處理,成為mRNA后才能穿出核。
核膜的主要功能真核細(xì)胞具有核膜,這在生物進化史上有重要意義。核膜作為細(xì)胞質(zhì)同細(xì)胞核內(nèi)部結(jié)構(gòu)之間的界膜,對穩(wěn)定細(xì)胞核的形態(tài)和化學(xué)成分起著十分重要的作用。核膜的主要功能有以下幾方面。
1.屏障作用。核膜是遍布細(xì)胞中的“膜系統(tǒng)”的一部分,它的特殊功能之一是把核酸(尤其是DNA)集中在細(xì)胞核中。
2.控制細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間的信息和物質(zhì)交換。主要有以下幾點。
(1)離子與水分子可以自由通過核膜。但是,核膜對某些離子(如Na+)有一定的屏障作用,這不屬于主動運輸過程。
(2)單糖、二糖、氨基酸、染料、核苷、核苷酸、魚精蛋白、組蛋白、RNA酶以及DNA酶等小分子物質(zhì),可以自由通過核膜。
(3)大分子和小顆粒物質(zhì)的交換:高分子化合物如γ球蛋白、清蛋白等進出細(xì)胞核要由核孔通過。
3.核膜在染色質(zhì)(體)的定位和細(xì)胞分裂時的作用。
(1)染色質(zhì)的終末細(xì)絲常常連接在核孔上。這有助于解釋為什么非常復(fù)雜的染色質(zhì)在異常活躍的細(xì)胞核內(nèi)不致紊亂。
(2)當(dāng)細(xì)胞分裂開始之初,染色體的聚集有可能開始于核膜,然后由外向內(nèi)發(fā)展。在前期或早中期分裂相中,核膜破碎,這些碎片可能加入核膜所附的微管成分,促其生長,從而使所附的染色單體定位并且發(fā)生分離。當(dāng)細(xì)胞分裂完成,子細(xì)胞核重建,核膜新生或恢復(fù)時,它可能有使核仁組成中心定位,趨向中心位置的作用。
4.核膜在細(xì)胞核融合時的作用。當(dāng)卵細(xì)胞受精時,和卵細(xì)胞的核膜可以相互識別并且相互接觸,在一個以上的部位相互連結(jié),進而相互融合成一個核。
5.核被膜具有某些生物合成的功能。在外層核膜表面附著核糖體,因此可以進行蛋白質(zhì)的合成。在核周腔中存在多種結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)和酶。核膜也能合成少量膜蛋白、脂質(zhì)和組蛋白。有人還報道核膜有糖的合成作用。
核仁核仁是真核細(xì)胞間期核中最明顯的結(jié)構(gòu)。在光鏡下的染過色的細(xì)胞內(nèi),或者相差顯微鏡下的活細(xì)胞中,或者分離細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi),都容易看到核仁,它通常是單一的或者多個勻質(zhì)的球形小體。
核仁的大小、形狀和數(shù)目隨生物的種類、細(xì)胞類型和細(xì)胞代謝狀態(tài)而變化。蛋白質(zhì)合成旺盛、活躍生長的細(xì)胞,如分泌細(xì)胞、卵母細(xì)胞,其核仁大,可占總核體積的25%;不具蛋白質(zhì)合成能力的細(xì)胞,如肌肉細(xì)胞、休眠的植物細(xì)胞,其核仁很小。
在細(xì)胞周期過程中,核仁是一個高度動態(tài)的結(jié)構(gòu),在有絲分裂期間表現(xiàn)出周期性的消失與重建。
核仁具有重要功能,它是rRNA合成、加工和核糖體亞單位的裝配場所。因此,對核仁結(jié)構(gòu)、動態(tài)和功能的研究,不僅為早期細(xì)胞學(xué)家所密切關(guān)注,而且在20世紀(jì)60年現(xiàn)核仁的重要功能以后,也一直受到各相關(guān)領(lǐng)域研究者的高度重視。
染色質(zhì)和染色體染色質(zhì)和染色體的主要成分都是DNA和蛋白質(zhì)。它們之間的不同,不過是同一物質(zhì)在間期和分裂期的不同形態(tài)表現(xiàn)而已。染色質(zhì)出現(xiàn)于間期,在光鏡下呈顆粒狀,不均勻地分布于細(xì)胞核中,比較集中于核膜的內(nèi)表面。由于染色較深,在光鏡下常被誤認(rèn)為是核的界膜。染色體出現(xiàn)于分裂期中,呈較粗的柱狀和桿狀等不同形狀,并有基本恒定的數(shù)目(因生物的種類不同而異),例如人體細(xì)胞有染色體23對,共計46條。染色體是由染色質(zhì)濃集而成的,內(nèi)部為緊密狀態(tài),呈高度螺旋卷曲的結(jié)構(gòu)。
根據(jù)對染色體組成成分的分析,可知它在細(xì)胞分裂間期仍然存在而不是消失,只不過這時它的結(jié)構(gòu)呈稀疏和分散狀態(tài):有的部分非常稀疏,因而在光鏡下看不到;有的部分螺旋盤繞得比較緊密,因而在適當(dāng)染色后呈顆粒狀,這就是染色質(zhì)。
現(xiàn)在已知染色體與遺傳有密切的關(guān)系,因為其中所含的DNA是遺傳物質(zhì)。
原核生物和病毒原核生物包括細(xì)菌、藍藻、放線菌、支原體、立克次體、衣原體等。現(xiàn)將其中幾種原核生物和病毒,列表(表2-2)比較如下。
表2-2幾種原核生物和病毒的比較
種類
細(xì)菌
支原體
立克次體
衣原體
病毒
直徑d/μm
0.50~10.00
0.20~0.25
0.20~0.50
0.20~0.30
<0.25
可見性
光鏡下可見
光鏡下勉強可見
光鏡下可見
光鏡下勉強可見
電鏡下可見
能否通
過細(xì)菌
過濾器
不能
能
不能
能
能
細(xì)胞壁
有堅韌的細(xì)胞壁
無
與細(xì)菌相同
與細(xì)菌相同
無細(xì)胞結(jié)構(gòu)
繁殖方式
二均分裂
二均分裂
二均分裂
二均分裂
復(fù)制
培養(yǎng)方法
人工培養(yǎng)基
人工培養(yǎng)基
宿主細(xì)胞
宿主細(xì)胞
宿主細(xì)胞
核酸種類
DNA和RNA
DNA和RNA
DNA和RNA
DNA和RNA
DNA和RNA
支原體它是已知的可以自由生活的最小生物,也是最小的原核細(xì)胞。它的突出特點是沒有細(xì)胞壁。因而細(xì)胞柔軟,形態(tài)多變,具有高度多形性。在電鏡下觀察支原體細(xì)胞,可見具有細(xì)胞膜,細(xì)胞膜內(nèi)有核糖體、RNA和環(huán)狀DNA。支原體廣泛存在于土壤、污水、昆蟲、脊椎動物及人體內(nèi),是動植物和人類的病原菌之一。人的胸膜肺炎、尿道炎、關(guān)節(jié)炎、老年支氣管炎等,以及家禽、家畜的呼吸道疾病等都可能是支原體引起的。現(xiàn)在正在生產(chǎn)抗肺炎支原體的疫苗,并且大規(guī)模試驗這種疫苗在防治肺炎支原體所致的人類呼吸道疾病的效果。
衣原體衣原體是專性細(xì)胞內(nèi)寄生物,可以直接侵入宿主細(xì)胞,能感染鳥類、哺乳動物及人類。如鸚鵡熱衣原體能引起鳥類疾病,有時可傳至人體。砂眼衣原體是使人患砂眼的病原體。
立克次體立克次體是介于細(xì)菌與病毒之間,而接近于細(xì)菌的一類原核生物。一般呈球狀或桿狀。也是專性細(xì)胞內(nèi)的寄生物。通常寄生在節(jié)肢動物如虱、蜱、螨、蚤等的消化道表皮細(xì)胞內(nèi),并以節(jié)肢動物為媒介傳染給人及其他脊椎動物。例如,普氏立克次體,由虱傳染給人,引起流行性斑疹傷寒等。
原核細(xì)胞指構(gòu)成細(xì)菌和藍藻等低等生物體的細(xì)胞。它沒有真正的細(xì)胞核,只有原核或擬核,所含的一個基因帶(或染色體),是環(huán)狀雙股單一順序的脫氧核糖核酸分子,沒有組蛋白與之結(jié)合;無核仁,缺乏核膜。外層原生質(zhì)中有70S核糖體與中間體,缺乏高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和中心體等。轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯同時進行,四周質(zhì)膜內(nèi)含有呼吸酶。無有絲分裂和減數(shù)分裂,脫氧核糖核酸復(fù)制后,細(xì)胞隨即分裂為二。
藍藻門舊稱藍綠藻門,藻類植物中最簡單、低級的一門。根據(jù)近些年來形成的生物分界系統(tǒng),藍藻屬于原核生物界。但是,藍藻和原綠藻與植物界又有一些相同之處,故一些文獻資料將它們分別歸納為原核藻類中的兩個門。藻體是單細(xì)胞或群體,不具鞭毛,不產(chǎn)生游動細(xì)胞。一部分絲狀種類能伸縮或左右擺動。細(xì)胞壁缺乏纖維素,由黏肽(含8種氨基酸和二氨基庚二酸以及氨基葡萄糖等)組成,壁外常形成黏性膠質(zhì)鞘。無真正的細(xì)胞核,擬核的組成物質(zhì)集中在細(xì)胞中央,無核膜和核仁,細(xì)胞內(nèi)除含葉綠素和類胡蘿卜素外,尚含有藻藍素,部分種類還含有藻紅素。色素不包在質(zhì)體內(nèi),而是分散在細(xì)胞質(zhì)的邊緣部分。藻體因所含色素的種類和多寡不同而呈現(xiàn)不同的顏色。儲藏物質(zhì)為藍藻淀粉。繁殖方式主要是分裂生殖,沒有有性生殖。主要分布在含有機質(zhì)較多的淡水中,部分生活在濕土、巖石、樹干上和海洋中,有的同真菌共生形成地衣,或生活在植物體內(nèi)形成內(nèi)生植物。少數(shù)種類能生活在85℃以上的溫泉內(nèi)或終年積雪的極地。
藍藻細(xì)胞模式圖高中生物(必修)課本第一冊中的藍藻細(xì)胞模式圖,只有5個圖注,即擬核、核糖體、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)。實際上,藍藻細(xì)胞的結(jié)構(gòu)是比較復(fù)雜的,現(xiàn)將其詳細(xì)結(jié)構(gòu)注釋如下圖(圖2-9)。
圖2-9藍藻細(xì)胞模式圖
原核生物和真核生物的細(xì)胞壁
1.細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞膜外有細(xì)胞壁,重量約占細(xì)胞干重的10%~20%,其主要成分是肽聚糖。此外,有的細(xì)菌的細(xì)胞壁還含有胞壁酸和特殊的脂質(zhì)化合物。
細(xì)菌的細(xì)胞壁有以下功能。
(1)保護細(xì)胞,能承受相當(dāng)大的壓力,如革蘭氏陽性菌,可承受2kPa的壓力。還能使細(xì)菌細(xì)胞不會由于細(xì)胞質(zhì)濃度較高而破裂。
(2)保持細(xì)胞的固有形態(tài)。
(3)有過濾作用,如相對分子質(zhì)量大于10000的物質(zhì)就不能通過。
(4)可為某些細(xì)菌的鞭毛運動提供可靠的支點。
2.藻的細(xì)胞壁的主要成分也是肽聚糖等,此外還含有氨基酸和胞壁肽氨基酸。
3.核生物植物細(xì)胞的細(xì)胞壁是具有一定硬度和彈性的固體結(jié)構(gòu)。其主要成分是纖維素(在初生壁上還含有半纖維素和果膠質(zhì)),它形成了細(xì)胞壁的網(wǎng)狀框架。在電子顯微鏡下可以看到這種框架是由微纖絲系統(tǒng)組成。在完整的壁上,在微纖絲之間的空間,可以由其他物質(zhì)所填充。
纖維素分子是由8000~15000個葡萄糖基(C6H10O5)通過糖苷鍵相互連接而成的多聚鏈,鏈間葡萄糖的羥基之間極易形成氫鍵。纖維素分子束聚集成為較大的單位──微纖絲,進而再聚集成較粗的纖絲──大纖絲。使得完整的纖維具有高度不溶于水的性質(zhì)。使細(xì)胞壁牢固并具有一定形狀。
在細(xì)胞的生長分化過程中,細(xì)胞壁不僅可以擴展和加厚,并且由細(xì)胞質(zhì)合成的一些物質(zhì)可以滲入到纖維素的細(xì)胞壁框架內(nèi),因而改變細(xì)胞壁的性質(zhì),使細(xì)胞壁完成一定的功能。例如,纖維素細(xì)胞壁的框架中因添加了木質(zhì)素而木質(zhì)化,這就增加了細(xì)胞壁的硬度,增強了細(xì)胞的支持力量。又如,在細(xì)胞壁表面添加了角質(zhì)(脂質(zhì)化合物),使角質(zhì)化的細(xì)胞壁透水性降低,增強了細(xì)胞壁防止水分損失的作用。栓質(zhì)化(栓質(zhì)為脂質(zhì)物質(zhì))的細(xì)胞壁,增強了不透水、不透氣的性能,增強了保護作用。水稻、小麥、玉米等作物的莖、葉表皮細(xì)胞發(fā)生硅質(zhì)化(滲入了二氧化硅),使細(xì)胞壁硬度增加,加強了作物莖稈的支持作用,等等。細(xì)胞壁上有胞間連絲,這些胞間連絲較多地出現(xiàn)在細(xì)胞壁沒有加厚的位置上,這有利于細(xì)胞間的物質(zhì)交換。
原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的主要區(qū)別原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的區(qū)別,,全國公務(wù)員共同天地在高中生物(必修)課本第一冊中主要提出了在細(xì)胞大小、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核這幾方面的明顯區(qū)別。其實,二者在其他方面還有不少的區(qū)別,現(xiàn)列表(表2-3)比較如下:
表2-3原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的主要區(qū)別
種類
原核細(xì)胞
真核細(xì)胞
細(xì)胞大小
較小(1~10μm)
較大(10~100μm)
染色體
一個細(xì)胞只有一條DNA,與RNA、蛋白質(zhì)不聯(lián)結(jié)在一起
一個細(xì)胞有幾條染色體,DNA與RNA、蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)在一起
細(xì)胞核
無真正的細(xì)胞核,只有擬核
有核膜和核仁
細(xì)胞器
無線粒體、葉綠體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等
有線粒體、葉綠體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等
內(nèi)膜系統(tǒng)
簡單
復(fù)雜
微梁系統(tǒng)
無
有微管和微絲等
細(xì)胞分裂
二分體、出芽;無有絲分裂
能進行有絲分裂
轉(zhuǎn)錄與翻譯
【關(guān)鍵詞】 裸鼠 藤蟾方 PCNA 人胃源性SGC 7901細(xì)胞
藤蟾方是來源于民間老中醫(yī)的經(jīng)驗方,通過臨床實踐,發(fā)現(xiàn)藤蟾方對消化系統(tǒng)腫瘤尤其是胃腺癌的治療效果顯著。課題組實驗研究證實,藤蟾方有較好的抑制腫瘤效果[1~3]。為進一步研究藤蟾方抗腫瘤的機制,課題組展開了藤蟾方干預(yù)裸鼠人胃源性SGC7901腫瘤細(xì)胞的研究。
1 材 料
1.1 動 物 裸鼠18只,雌性,體重16~20g,浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物研究中心提供。
1.2 瘤 株 人胃源性SGC7901細(xì)胞,浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供。
1.3 藥 物 藤蟾方由藤梨根、干蟾皮、薏苡仁等藥物組成。實驗用藥的生藥含量為0.8g/ml(該劑量已通過前期實驗證明具有最佳抗腫瘤作用)。5氟脲嘧啶 (5FU)(上海旭東海普藥業(yè)有限公司,批號:20020816)按25mg/kg給藥,配制成2.5mg/mL稀釋液。PowerVisionTM TwoStep免疫組化檢測試劑盒(美國PowerVision公司)。PCNA一抗(NeoMarkers公司)。
2 方 法
2.1 造模及分組給藥 頸椎脫臼處死傳代裸小鼠,酒精浸泡3min,無菌平皿中取出腫瘤,稱重為1.32g。于另一無菌平皿中將瘤塊剪碎,球形勻漿器勻漿,加生理鹽水4ml配成1∶4稀釋液,鏡下觀察腫瘤細(xì)胞成活率,接種于18只裸鼠右腋下,每只0.2ml。
將接種后的裸鼠隨機分為藤蟾方組、5FU組、生理鹽水組,每組6只。藤蟾方組給予藤蟾方0.2ml/10g灌胃;5FU組給予5FU 0.1ml/10g腹腔注射;生理鹽水組給予生理鹽水0.2ml/10g灌胃;均1天1次,連續(xù)給藥30天。30天后稱重并脫臼處死裸鼠,分離腫瘤組織,并稱取瘤重。將腫瘤組織標(biāo)本在中性緩沖福爾馬林中固定,12小時后取材制成石蠟切片。嚴(yán)格按照PowerVisionTM TwoStep免疫組化檢測試劑盒說明書的步驟檢測PCNA蛋白表達。取分離腫瘤組織后小鼠的脾與胸腺并稱重,觀察抑瘤率、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)。
2.2 觀察指標(biāo)
2.2.1 抑瘤率、脾指數(shù)、胸腺指數(shù) 抑瘤率=[1(實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重)]×100%;脾指數(shù)=脾臟重量(mg)/體重(g) ×100%;胸腺指數(shù)=胸腺重量(mg)/體重(g) ×100%。
2.2.2 PCNA蛋白表達 取經(jīng)過染色處理的標(biāo)本切片進行觀察,PCNA陽性位于細(xì)胞核內(nèi),呈棕色,未顯陽性的細(xì)胞核呈藍色。每張切片在200倍視野下計數(shù)5個視野,每個視野計數(shù)200個以上腫瘤細(xì)胞中染色陽性的細(xì)胞數(shù),換算成增殖標(biāo)記指數(shù)(LI),增殖LI=視野內(nèi)的陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)/視野內(nèi)總的腫瘤細(xì)胞數(shù)×100%。
2.3 統(tǒng)計方法 應(yīng)用SPSS11.0進行數(shù)據(jù)處理,多組間比較采用單因素方差分析,各組間兩兩比較采用q檢驗。
3 結(jié) 果
3.1 對小鼠體內(nèi)腫瘤生長的抑制作用 藤蟾方組和5FU組有明顯的腫瘤抑制作用,抑瘤率分別為32.56%、49.9%,且給藥小鼠未發(fā)生死亡。藤蟾方組、5FU組與生理鹽水組比較,瘤重差異均有顯著性意義(P<0.01),見表1。表1 三組抑瘤率比較(±s)
組 別n/只瘤重/g抑瘤率/%藤蟾方組60.91±0.4932.565FU組60.51±0.1649.90生理鹽水組61.00±0.35——
與生理鹽水組比較,P<0.013.2 對PCNA蛋白表達的影響 藤蟾方對荷瘤小鼠的增殖細(xì)胞核抗原陽性表達有一定的抑制作用,藤蟾方組、5FU組與生理鹽水組比較,差異均有顯著性意義,P<0.05。藤蟾方組增殖標(biāo)記指數(shù)為(63.86±15.50)%,5FU組為(55.11±9.94)%,生理鹽水組為(75.88±9.30)%。
3.3 對小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響 藤蟾方組未明確表現(xiàn)出與抑瘤效果相一致的免疫調(diào)節(jié)作用。各組荷瘤小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)比較,差異均無顯著性意義(P>0.05),見表2。表2 三組荷瘤小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)比較
4 討 論
藤蟾方中藤梨根清熱利濕、健脾和胃、解毒消腫,有抗癌作用,尤對消化系統(tǒng)癌腫療效顯著[4]。干蟾皮有解毒消腫止痛功效,能抑制人體多種腫瘤的生長,并能不同程度地防治放化療引起的白細(xì)胞下降,增強機體對放化療的耐受力。薏苡仁健脾補肺、清熱利濕,薏苡仁的活性成分(薏苡仁酯、薏苡仁油)及總提取物均有很強的抗腫瘤作用[5]。全方相配既有清熱解毒、利濕消腫之力,又有活血通絡(luò)、軟堅散結(jié)之功,共同達到健脾和胃、抗腫瘤的作用,適用于氣血凝滯、脈絡(luò)瘀阻而致的腫瘤病證。
本實驗結(jié)果證明,藤蟾方對荷人胃源性SGC7901細(xì)胞裸鼠具有明確的抗腫瘤作用,其作用機制可能與抑制腫瘤組織的增殖細(xì)胞核抗原有關(guān)。
【參考文獻】
1 張光霽,申 力.藤蟾方抑制人胃癌細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)其凋亡的實驗研究. 浙江臨床醫(yī)學(xué),2005,7(6):569570
2 張光霽.藤蟾方抑瘤及其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的實驗研究.浙江臨床醫(yī)學(xué),2004,6(5):356357
3 張光霽.藤蟾方對S180小鼠P53和PCNA蛋白表達的影響.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2004,13(12):15661567
【關(guān)鍵詞】B/S模式 業(yè)務(wù)流程 上報 工單
一、引言
目前,在我臺各部門有很多方面存在問題:設(shè)備的類別多、設(shè)備分布區(qū)域廣、管理劃分不統(tǒng)一、維修責(zé)任不明確,這樣就容易造成設(shè)備在使用過程中出現(xiàn)故障或隱患時,工作人員只能等待維護部門的時間安排,從而拖延了時間,降低了工作效率。
通過實際情況分析所需功能、設(shè)計完善該設(shè)備報修系統(tǒng),以便為用戶提供報修、維護、查詢、統(tǒng)計等業(yè)務(wù)功能,有利于設(shè)備維護部門的工作進行信息化、規(guī)范流程化的管理,提升維護質(zhì)量、優(yōu)化維護效率并減少維護成本,給各部門的正常運行提供更好的基礎(chǔ)保障;
設(shè)計該報修系統(tǒng),可充分利用本單位現(xiàn)有的各種硬件資源:服務(wù)器、內(nèi)網(wǎng)、PC機,無需額外開支,節(jié)省了硬件成本,只需硬件和網(wǎng)頁的日常穩(wěn)定性維護,工作量小,可安排專人或兼職管理;該系統(tǒng)在自臺的內(nèi)網(wǎng)上運行,用戶可通過PC、手機等終端登陸系統(tǒng)進行各項業(yè)務(wù)操作,使之滿足用戶的日常需求,提高維修效率。
二、系統(tǒng)框架分析
(一)系統(tǒng)開發(fā)工具
本系統(tǒng)設(shè)計采用B/S(瀏覽器/服務(wù)器)模式,系統(tǒng)架設(shè)在服務(wù)器上,在自臺的內(nèi)網(wǎng)上運行。
服務(wù)器端:服務(wù)器系統(tǒng)Linux或者Windows皆可,系統(tǒng)采用PHP語言編寫,運行在Apache上,數(shù)據(jù)庫使用MySQL;
瀏覽器端:系統(tǒng)兼容現(xiàn)代常用的IE、FireFox內(nèi)核瀏覽器,不論客戶端系統(tǒng);
(二)系統(tǒng)總體流程
圖1 系統(tǒng)總體流程圖
(三)需求業(yè)務(wù)分析
通過實際調(diào)研各部門的工作情況,所需求的業(yè)務(wù)應(yīng)包括:能夠?qū)崿F(xiàn)對用戶信息和故障信息的在線錄入;能夠?qū)υ诰€的故障問題和故障信息進行整合并生成工單;能夠?qū)徍撕蟮捻椖繂栴}和故障信息,提交維護人員進行及時處理;維修人員根據(jù)系統(tǒng)整理的待修列表進行接單和維修分工;對故障信息進行后續(xù)的管理錄入,遇重大問題可上報并接收領(lǐng)導(dǎo)的批示;處理不了的故障,可反饋至廠商,協(xié)調(diào)處理;維修完畢,可提供報修人進行確認(rèn)與評價;同時,本系統(tǒng)設(shè)計的網(wǎng)頁,力求功能上操作簡便,使用戶能快速地完成所需要的操作,具體應(yīng)包括以下幾個界面:登錄界面、報修界面、維修界面、統(tǒng)計界面、后臺管理界面。
三、系統(tǒng)詳細(xì)設(shè)計
(一)系統(tǒng)總體結(jié)構(gòu)
報修人系統(tǒng):實現(xiàn)上報故障、查看維修狀態(tài)、確認(rèn)評價的功能,報修人可填寫故障類型、具體所在地、緊急類型和故障描述,來啟動或者關(guān)閉報修流程;維修人系統(tǒng):軟件根據(jù)故障類型分配給相應(yīng)的具體維修人,維修人可查看收到的報修任務(wù)及故障描述,及時更新維修單狀態(tài);系統(tǒng)內(nèi)部處理:在一個或多個報修任務(wù)開啟后,同類型的問題可被篩選和展現(xiàn)出來,以實現(xiàn)批量處理;及時更新維修單的狀態(tài),并反饋給報修人、維修人等;系統(tǒng)分配處理,并分派維護人員分別快速處理,維修主管可隨時查看和打印統(tǒng)計分析報告。
圖2 系統(tǒng)總體結(jié)構(gòu)圖
(二)系統(tǒng)功能模塊的詳細(xì)設(shè)計
(1)用戶模塊。功能包括:用戶登錄、信息管理、權(quán)限分配等。用戶登錄:用戶訪問系統(tǒng)時必須輸入正確的用戶名和密碼,方可登錄系統(tǒng);用戶信息管理:在后臺管理頁面,可以進行編輯用戶、修改用戶資料、改變用戶權(quán)限等操作;用戶權(quán)限分配:將用戶分為幾個權(quán)限組,普通用戶、維修人、維修管理員、領(lǐng)導(dǎo)、超級管理員;普通用戶擁有報修權(quán)限,維修人繼承普通用戶權(quán)限,還有維修權(quán)限;維修管理員繼承維修人權(quán)限,還有查看統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)的權(quán)限;領(lǐng)導(dǎo)繼承普通用戶權(quán)限,還擁有批示權(quán)限;超級管理員擁有后臺管理權(quán)限。
圖3 系統(tǒng)的界面設(shè)計
(2)上報故障模塊。上報故障是針對所有工作人員,當(dāng)報修人登錄進入對應(yīng)的頁面,正確填寫完報修單之后,系統(tǒng)將會把相應(yīng)的數(shù)據(jù)存入數(shù)據(jù)庫,并將維修工單狀態(tài)更新為“待接單”。
該模塊的功能方面設(shè)計有:故障地點:實際選擇故障位置,通過選擇下拉框,系統(tǒng)會彈出選擇項;報修類型:通過選擇下拉框,系統(tǒng)會彈出報修類型選擇項,辦公電器、生活電器、水電、其他;優(yōu)先級:優(yōu)先和普通,根據(jù)所需的緊急度填寫,優(yōu)先是自動排列在上,表示首先處理;申報時間:系統(tǒng)自動顯示;標(biāo)題:個人的故障標(biāo)題,可輸入簡要的故障名,便于日后查找;故障描述:對故障信息進行準(zhǔn)確描述;報修人在確認(rèn)維修完成后可以確認(rèn)工單、對維修工作進行評價;否則可以駁回工單,讓工單回到待接單狀態(tài),等待其他維修人員再處理。
圖4 上報故障的界面設(shè)計
(3)維修工單模塊。維修工單主要給維修人員提供登記服務(wù),為用戶提供對每個維修工單詳細(xì)信息的查詢,用戶還可以通過導(dǎo)出功能把工單信息導(dǎo)出到Excel文件,方便統(tǒng)計管理或者打印;管理者如果想要查看相關(guān)的維修信息,可以在工單信息中直接查看相關(guān)信息;維修人在維修中可以不斷更新工單信息,維修完成后,維修人員需要填寫維修信息(維修人描述、維修計劃、費用等)并提交,系統(tǒng)反饋該信息給報修人,等待報修人確認(rèn)。
該模塊的功能方面設(shè)計有:維修人登錄系統(tǒng),查看“待接收”列表,選中待修的故障并點“接收此單”,系統(tǒng)將該維修單信息更新為“待維修”;維修人在“已接收”列表中選相應(yīng)的故障,進入維修單里選“退回”,可以重新發(fā)回“待接收”列表,允許維修人多次接單;出現(xiàn)重大事件或需更換重要備件,維修人可“上報領(lǐng)導(dǎo)”,接收領(lǐng)導(dǎo)的批示;維修單填寫完點提交后,狀態(tài)可由“待維修”更新為“待確認(rèn)”。
圖5 維修工單的界面設(shè)計
(4)領(lǐng)導(dǎo)批示模塊。領(lǐng)導(dǎo)用戶有故障維修申報權(quán)、對維修人上報工單的批示權(quán),領(lǐng)導(dǎo)批示整體流程圖設(shè)計:臺內(nèi)維修人員對于不能維修的故障,先報部門主管,由他們選擇對重大事件或需更換重要備件再上報給臺分管領(lǐng)導(dǎo),接收領(lǐng)導(dǎo)的批示;此外,遇到緊急情況或重大故障需要上報領(lǐng)導(dǎo)的時候,報修人可以直接上報領(lǐng)導(dǎo)。
(5)統(tǒng)計分析模塊。維修管理員可以進入統(tǒng)計分析頁面查看所有工單統(tǒng)計信息,也可以查看分析情況,具體統(tǒng)計了幾個方面:近100天故障類型比例統(tǒng)計、近半年故障解決情況統(tǒng)計、近100天故障所在地統(tǒng)計、近半年故障維修金額統(tǒng)計等,基本包含了常用的統(tǒng)計部分;另外還可以通過導(dǎo)出Excel文檔方便進行打印等操作。
(6)消息通知模塊。當(dāng)出現(xiàn)報修人上報故障、維修人接收工單、維修工單更新、領(lǐng)導(dǎo)批示、工單確認(rèn)等情況下,系統(tǒng)會自動生成提示消息,通知相關(guān)人員,并且附上相應(yīng)URL;
(7)后臺管理模塊。后臺管理頁面只有超級管理員才有權(quán)限進入,在此頁面可以對系統(tǒng)所有數(shù)據(jù)信息進行處理:擁有整個系統(tǒng)的管理能力和編輯能力,對所有的用戶信息、工單信息進行管理,有必要時可刪除包括用戶管理、維修工單管理以及供貨商信息等。
四、分析總結(jié)
該系統(tǒng)已推廣至各部門使用了一段時間,從已經(jīng)實現(xiàn)的功能和用戶反映來看,整體上能較好的實現(xiàn)各模塊之間的接口通信、數(shù)據(jù)存儲,所需功能也基本實現(xiàn):不同用戶的登錄系統(tǒng)和退出賬號、報修人的故障上報和故障解決確認(rèn)、維修人的接收工單并填寫維修單和上報領(lǐng)導(dǎo)、領(lǐng)導(dǎo)的批示、系統(tǒng)能及時更新維修單和列表狀態(tài),完善了導(dǎo)航欄的鏈接功能,達到了預(yù)定設(shè)計目標(biāo)。但系統(tǒng)目前仍有幾個方面待進一步完善:目前該系統(tǒng)只在臺內(nèi)網(wǎng)上運行,以后有經(jīng)費條件和安全保障下,可以考慮搭外網(wǎng),為手機端的完善兼容做基礎(chǔ);由于用戶平時很大部分習(xí)慣通過手機來登錄操作,在有時間和能力的情況下,進一步完善做好手機端的兼容,這樣2個平臺能同時運行將更方便用戶,提高維護效率。
參考文獻:
[1]陳劍甌譯.JavaScript基礎(chǔ)教程(第6版)[M].人民郵電出版社,2007.
【關(guān)鍵詞】2型糖尿病;強化治療;甘精胰島素;諾和靈;胰島β細(xì)胞
The effects of transient intensive lantus plus novolin R or metformin on β-cell function in newly diagnosed type 2 diabetic mellitus
HANXiao-li, LIU Lin, LUN Zeng-rui, et al. Affiliated Weifang People’s Hospital of Weifang Medical College,Weifang,Shandong261041,China
【Abstract】 Objective To study the effects of transient intensive lantus plus novolin R or metformin on beta-cell function innewly diagnosed type 2 diabetic mellitus. Methods 40 newly diagnosed type 2 diabetic mellitus were treated by 4 weeks:(A)transient intensive treatment:lantus subcutaneous injection before supper plus novolin R subcutaneous injection before three meals;(B) lantus subcutaneous injection in bed timeplus metformin. The levels of fasting plasma glucose(FPG) 2 hours postprandial glucose(2 h PG),glycosylated hemoglobin A1C(HbA1c), C-peptide and insulin releasing test were compared before and after transient intensive treatment. Results the FPG,2 h PG and HbA1c were significantly decreased in both groups; while fasting C-peptide and insulin and in other phages were significantly increased in group A. Conclusions Both the transient intensive lantus plus novolin R and lantus plus metformin can effectively control plasma glucose better. Lantus plus novolin R can also effectively improve the beta-cell function in newly diagnosed type 2 diabetic mellitus.
【Key words】Type 2 diabetic mellitus; Intensive treatment; Lantus ;Novolin; Pancreatic beta cells
胰島素強化治療是糖尿病治療研究的熱點之一。國內(nèi)外曾有研究指出[1,2],對新診斷的2型糖尿病(T2DM)患者進行短期胰島素強化治療可獲得較長時間的緩解。本研究選擇初診的T2DM患者為研究對象,觀察短期甘精胰島素聯(lián)合諾和靈R或二甲雙胍強化治療的效果及對胰島β細(xì)胞功能的影響。
1 對象與方法
1.1 研究對象 選擇濰坊市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科新診斷的T2DM患者40例(1999WHO標(biāo)準(zhǔn)),男25例,女15例,平均(42±9)歲,隨機分為A、B兩組。入選時空腹血糖(FPG)為(11±3.7)mmol/L,和/或2 h血糖(2 h PG)為(18±6.1)mmol/L,糖化血紅蛋白(HbA1c)>10%。兩組均排除嚴(yán)重感染、心肝腎功能不全、酮癥酸中毒及甲狀腺功能異常等。
1.2 方法
1.2.1 所有患者隔夜空腹10~12 h,于入院后次日晨采靜脈血測定空腹血糖(FPG,氧化酶法,Beckman全自動生化分析儀測定)、糖化血紅蛋白(HbA1c,微柱法,天津DPC公司藥盒),并口服82.5 g葡萄糖(含10%結(jié)晶水)行C肽+胰島素釋放試驗(放免法,天津DPC公司藥盒)。兩組均給予糖尿病教育與飲食控制,按標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量計算,總熱量25~28 kcal/(kg•d)。
1.2.2 治療 標(biāo)本留取后,A組給予諾和靈R三餐前皮下注射[初始劑量按0.3~0.5 U/(kg•d)],甘精胰島素晚餐前皮下注射;B組給予口服二甲雙胍0.5 g,3次/d,加甘精胰島素睡前皮下注射。甘精胰島素初始劑量根據(jù)FPG水平的毫摩爾值1:1換算(即血糖mmol/L值=甘精胰島素單位數(shù)),適時根據(jù)檢測血糖值每2~3 d調(diào)整1次胰島素劑量。血糖控制目標(biāo)為FPG≤7 mmol/L,2 h PG≤10 mmol/L,治療時間為4周,記錄達到良好血糖控制的時間。
1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 FPG、2 h PG、C肽、胰島素水平、HbA1c用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,強化治療前后比較用配對t檢驗;組間比較用方差分析;各時點C肽、胰島素比較采用單向方差分析。所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 10.0軟件處理。
2 結(jié)果
2.1 強化治療的降糖效果 A、B組強化治療4周后,F(xiàn)PG、2 h PG、HbA1c三者的變化見表1。A與B組比較,兩組治療后FPG無明顯差異,而2 h PG差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)],見表1。
2.2 強化治療對胰島β細(xì)胞功能的影響 治療后測定胰島β細(xì)胞功能發(fā)現(xiàn),A組空腹及服糖后各時間點C肽與胰島素水平均較治療前有不同程度的升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),見表2。
2.3 不良反應(yīng) 實驗期間,有2例患者因就餐延遲出現(xiàn)低血糖反應(yīng),進食后緩解。未見其他不良反應(yīng)。
3 討論
在T2DM的早期,β細(xì)胞處于“葡萄糖失敏感性階段”,其分泌胰島素功能暫時性的受到抑制,當(dāng)血糖得到良好控制后,其分泌胰島素的能力可獲得部分恢復(fù)[3],這是新診斷的T2DM患者接受短期胰島素強化治療獲得較長時間緩解的原因[1]。到了T2DM晚期,在“葡萄糖毒性”作用下,β細(xì)胞分泌胰島素的功能進行性衰竭,即便有效的控制血糖,亦難以逆轉(zhuǎn)衰竭的胰島功能[3]。
以往胰島素強化治療的模式是應(yīng)用短效胰島素或胰島素泵,前者起效慢、達峰慢,無法與人體生理性的血糖峰值同步,后者代價昂貴,均限制了其推廣應(yīng)用。基礎(chǔ)胰島素不足不僅導(dǎo)致空腹血糖升高,而且造成餐后血糖在此基礎(chǔ)上進一步升高。甘精胰島素作為長效基礎(chǔ)胰島素類似物,可模擬生理性基礎(chǔ)胰島素的分泌,具有平穩(wěn)、無峰值等特點,有效作用呈平坦直線,藥物釋放比傳統(tǒng)胰島素制劑更加貼近正常基礎(chǔ)的人胰島素,且夜間低血糖發(fā)生率低。每天注射1次可維持24 h,治療費用較使用胰島素泵明顯降低。新診斷的T2DM患者病史較短,胰島β細(xì)胞以功能改變?yōu)橹鳎委熀竽孓D(zhuǎn)的可能性大,故筆者對新診斷的T2DM患者采用甘精胰島素與諾和靈R聯(lián)合強化治療方案,并與二甲雙胍加甘精胰島素睡前皮下注射進行比較。
本研究發(fā)現(xiàn),治療后與治療前相比,兩組FPG、2 h PG、HbA1c均顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
本研究發(fā)現(xiàn),兩組患者治療后FPG的下降無明顯差異。這與甘精胰島素顯著優(yōu)勢作用時間長有關(guān),不論晚餐前或者睡前注射,均能有效的減少黎明現(xiàn)象。
總之,在T2DM早期β細(xì)胞功能損害是可逆的,及早應(yīng)用胰島素嚴(yán)格控制血糖,有助于保護β細(xì)胞功能、延緩其衰竭。誠然,本研究中β細(xì)胞分泌胰島素功能的改善源于良好的血糖控制,使β細(xì)胞部分恢復(fù)對葡萄糖反應(yīng)的敏感性。但這種改善并非永久性,甘精胰島素與諾和靈R聯(lián)合強化治療的長期療效尚有待于進一步隨訪研究。
參考文獻
[1] 祝方,紀(jì)立農(nóng),韓學(xué)堯,等. 短期胰島素強化治療誘導(dǎo)初診2型糖尿病患者血糖長期良好控制的臨床試驗.中國糖尿病雜志,2003,11(1):5-9.
[2] Ilkova H, Glaser B, Tunckale A, et al. Induction of long-term glycemic control in newly diagnosed type 2 diabetic patients by transient intensive insulin treatment. Diabetes Care,1997(20):1353-1356.
[3] Purrello F, Rabuazza AM. Metabolic factors that affects beta-cell function and survival. Diabet Nutr Metab,2000(13):84-91.
【關(guān)鍵詞】 結(jié)核病;CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞;FOXP3
CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一類增殖能力低、具有免疫抑制功能的細(xì)胞,在人類外周血中占CD4+T細(xì)胞的5%-15%,該種細(xì)胞的缺失或功能缺陷會引起一系列的自身免疫功能紊亂[1]。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表型是在1995年由SaKakuchi等[2]通過一系列實驗首次確定的,其后又發(fā)現(xiàn)其特異性的表達轉(zhuǎn)錄因子FOXP3。此外,這群細(xì)胞也表達CD45RBlow、CD62L、CD103、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4(CTLA-4)、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNF受體(GITR)等。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可通過細(xì)胞接觸和分泌細(xì)胞因子等多種方式抑制T、B細(xì)胞等的增殖、活化及功能發(fā)揮。
1 轉(zhuǎn)錄因子FOXP3
1.1 轉(zhuǎn)錄因子FOXP3特異性地表達于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,作為一個特征性標(biāo)志在其發(fā)育和功能維持中發(fā)揮重要的作用。FOXP3是由Brunkow等于2001年首次報道,其屬于轉(zhuǎn)錄因子forkhead /winged helix家族,該基因家族均通過forkhead結(jié)構(gòu)域與DNA上的特定位點結(jié)合,從而參與對目的基因的調(diào)控。FOXP3基因特異性的表達于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,而在其他淋巴細(xì)胞如CD8+T細(xì)胞、B細(xì)胞和其他組織細(xì)胞中極少表達。另一方面,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的其他表面分子如CD25、CTLA-4、GITL等在活化的T細(xì)胞上也表達,因此認(rèn)為FOXP3可能是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞特異性的標(biāo)志。進一步的研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)OXP3在CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化和功能發(fā)揮中具有重要的作用,其不僅能介導(dǎo)傳統(tǒng)初始T細(xì)胞獲得CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的相關(guān)表型[3],還可誘導(dǎo)其向Th1型或Th2型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化。
1.2 人FOXP3基因位于染色體Xp11.23-q13.3,全長1869bp,編碼48kD蛋白。FOXP3蛋白由叉頭螺旋結(jié)構(gòu)、C2H2鋅指結(jié)構(gòu)和亮氨酸拉鏈這三個主要的功能結(jié)構(gòu)域組成,而FKH區(qū)域為所有FOX轉(zhuǎn)錄因子家族所共有的結(jié)構(gòu)。通過對IPEX患者的基因研究,發(fā)現(xiàn)FOXP3基因突變主要發(fā)生在FOXP3蛋白的亮氨酸拉鏈、FKH及富含脯氨酸的N末端這三個結(jié)構(gòu)區(qū)域,提示以上三個結(jié)構(gòu)區(qū)域?qū)OXP3的功能發(fā)揮具有重要的影響。進一步的研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)OX3蛋白的核定位以及其免疫抑制功能發(fā)揮均有賴于FKH區(qū)域序列的完整性;亮氨酸拉鏈則可影響FOXP3二聚體的形成;而富含脯氨酸的N末端的功能作用目前仍不清楚。
2 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能
2.1 天然產(chǎn)生的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對TCR的刺激不產(chǎn)生反應(yīng),其被激活后以抗原非特異性的方式行使免疫抑制作用,并能夠以依賴細(xì)胞接觸的方式抑制CD4+、CD8+T細(xì)胞的增殖、活化及功能表達[4-5],CTLA-4和GITR在其中發(fā)揮重要的作用[6-7]。誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能具有細(xì)胞因子依賴性,通過多克隆激活劑或自身抗原激活后的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要分泌IL-10及TGF-β[4,8,9]。IL-10對CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化和功能發(fā)揮的調(diào)節(jié)機制主要表現(xiàn)為以下兩點:①通過Jak/Stat3系統(tǒng)抑制了單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多數(shù)DC分泌早期的細(xì)胞因子;②通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子NFkB的激活和IL-2的產(chǎn)生從而影響效應(yīng)T細(xì)胞的功能。TGF-β則可通過對APC的抑制來間接抑制效應(yīng)T細(xì)胞的增殖,且可通過分別抑制Th2、Th1的轉(zhuǎn)錄激活因子的表達而阻止各自的發(fā)育。另有研究表明TGF-β還能抑制天然T細(xì)胞和成熟DC的分化[10]。
2.2 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞除能抑制T細(xì)胞的免疫應(yīng)答外,還能抑制B細(xì)胞的免疫應(yīng)答。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能夠遷移至外周淋巴組織的B細(xì)胞區(qū),抑制T細(xì)胞依賴的B細(xì)胞應(yīng)答。相關(guān)的動物實驗已經(jīng)證實,往動物模型體內(nèi)輸注CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可減少甚至完全抑制自身抗體的產(chǎn)生[11-12]。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制B細(xì)胞免疫活性的機制可能有直接和間接兩種方式。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可通過抑制Th細(xì)胞從而抑制B細(xì)胞的活化和分化,抑或影響其抗體的產(chǎn)生[13-14]。此外,Hill等研究人員[15-16]發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可以直接作用于B細(xì)胞,通過細(xì)胞接觸的方式抑制B細(xì)胞的增殖、活化及抗體類別重組轉(zhuǎn)換和分泌。
2.3 IL-2信號傳導(dǎo)通路在CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫耐受中起著重要的作用[17-18]。IL-22參與調(diào)解CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胸腺內(nèi)的發(fā)育[19]。相關(guān)研究也已經(jīng)證明其在體外可明顯刺激T細(xì)胞的生長、擴增。最近的研究[9]發(fā)現(xiàn),低濃度的IL-2可以顯著改善CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的低增殖能力,尤其是在與IL-4共同作用下改變更明顯;而高濃度的IL-2能夠阻斷CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對CD4+T細(xì)胞的抑制作用。此外IL-2可通過與STAT3、STAT5結(jié)合促使CD4+CD25+Treg上調(diào)性地表達Foxp3[20]。
3 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與結(jié)核病的關(guān)系
結(jié)核病是嚴(yán)重危害人民群眾健康的呼吸道傳染病,我國是全球22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一。2001――2010年,我國肺結(jié)核報告發(fā)病人數(shù)始終位居全國甲乙類傳染病報告發(fā)病數(shù)的前列。肺結(jié)核作為呼吸系統(tǒng)常見疾病之一,具有高感染率、高患病率及死亡人數(shù)多等特點。結(jié)核病的機體免疫主要是由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫,其中CD4+T淋巴細(xì)胞在結(jié)核病免疫中的關(guān)鍵作用已在多種免疫技術(shù)的研究中得到證實。結(jié)核病患者常存在Th1/Th2免疫失衡,表現(xiàn)為Th1型細(xì)胞免疫功能低下。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能廣泛抑制各種免疫細(xì)胞的激活、增殖和效應(yīng)功能,其可能通過其免疫抑制功能抑制Th1細(xì)胞的活化而促進結(jié)核病的發(fā)生和發(fā)展。Guyot-Revol等[21]報道肺結(jié)核患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量及其FOXP3表達明顯增多。活體內(nèi)去除肺結(jié)核患者外周血單個核細(xì)胞中的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可導(dǎo)致產(chǎn)生IFN-γ的結(jié)核桿菌特異性T細(xì)胞數(shù)量增加。Ribeiro-Rodrigues等[22]在另一項研究中也發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量比健康者高,并且在抗結(jié)核治療結(jié)束6個月后仍處于增高狀態(tài),還通過清除實驗發(fā)現(xiàn)去除了CD25+的CD4+T細(xì)胞在結(jié)核桿菌的刺激下產(chǎn)生的IFN-γ要高于未經(jīng)過分離的CD4+T細(xì)胞,證實CD4+CD25+T細(xì)胞在肺結(jié)核中抑制IFN-γ產(chǎn)生。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過抑制Th1細(xì)胞免疫,導(dǎo)致Th1細(xì)胞因子如IFN-γ分泌的減少,影響結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細(xì)胞的激活,從而削弱了機體免疫系統(tǒng)對感染結(jié)核分枝桿菌的清除,使得感染慢性化。與此同時,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞也通過抑制過強的Th1細(xì)胞免疫反應(yīng),避免了其對機體造成的免疫病理損害。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在抑制Th1免疫的同時,還抑制Th2細(xì)胞免疫的產(chǎn)生,表現(xiàn)為CD4+CD25-T細(xì)胞分泌的IL-10的減少。不過,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對Th1細(xì)胞免疫的抑制強于Th2細(xì)胞免疫的抑制,從而導(dǎo)致結(jié)核患者的免疫失衡,消除CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的作用可以逆轉(zhuǎn)Th1/Th2免疫失衡的狀態(tài)。而Th1/Th2細(xì)胞免疫失衡,特別是Th2細(xì)胞因子IL-4、IL-10干擾Th1細(xì)胞免疫對病原菌的清除,是促進結(jié)核病發(fā)生和慢性感染復(fù)發(fā)的重要原因。
4 結(jié) 語
CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過細(xì)胞接觸和分泌細(xì)胞因子的方式,抑制T細(xì)胞、B細(xì)胞等從而介導(dǎo)體內(nèi)的免疫耐受,在多種自身免疫疾病、腫瘤和結(jié)核病等慢性病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。但CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在結(jié)核病中的具體作用機制尚不完全清楚,深入探索其在結(jié)核病中的免疫動力學(xué)、功能發(fā)揮的具體機制,可以進一步了解結(jié)核局部免疫應(yīng)答狀態(tài),并可為結(jié)核病的快速診斷及治療開辟新思路及獲得有效地免疫治療方法。
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