批復(fù)文件

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批復(fù)文件范文第1篇

春季氣候較為干燥，加上多風(fēng)，人體的皮膚變得特別脆弱，種種小問(wèn)題悄悄出現(xiàn)。

皮膚瘙癢

春季氣候干燥，人體水分大量丟失，同時(shí)又有靜電騷擾，身上又會(huì)干又癢，甚至脫皮起屑。

補(bǔ)救方法

1. 沐浴次數(shù)不要太多，最多每日一次，水溫不可過(guò)高。

2. 不要用堿性強(qiáng)或有消毒成分的肥皂，這類肥皂會(huì)把皮膚分泌的油脂完全清洗掉，缺乏皮脂保護(hù)，皮膚便變得干燥。建議使用性質(zhì)溫和的肥皂或沐浴露。

3. 洗后馬上涂潤(rùn)膚霜，注意脖子、肘部和腳跟部位。不要等皮膚全干后再涂。

4. 在居住的房間里養(yǎng)些魚、花之類，或使用加濕器，或用濕墩布擦地，保持室內(nèi)的空氣濕度非常重要。

5. 面部皮膚護(hù)理更為重要，。到了春季，護(hù)膚品要更換，選擇鎖水保濕的為最佳，有些美白產(chǎn)品易使皮膚干燥，用時(shí)要謹(jǐn)慎。

6. 每天至少喝8杯水，早晚喝一杯蜂蜜非常不錯(cuò)，有助于排毒與保濕。

7. 補(bǔ)充維生素，特別是維生素B族，能緩解皮膚瘙癢。

長(zhǎng)痘痘

長(zhǎng)痘痘的情況非常復(fù)雜，有些人臉上痘痘不斷，有些人只有來(lái)事的那幾天臉上才長(zhǎng)。對(duì)于頑固的痘痘，建議找中醫(yī)調(diào)理，或使用抗痘產(chǎn)品。無(wú)論是何種時(shí)期的痘痘，都要提高警惕。

補(bǔ)救方法

1. 多飲水，多吃新鮮的蔬菜和水果。

2. 不要吃辣椒、麻辣火鍋、水煮魚等，這些東西可刺激皮膚，長(zhǎng)痘更多。甜食也要遠(yuǎn)離。

3. 不要用手?jǐn)D痘痘，免得造成皮膚上的凹點(diǎn)，耐心一些，等它自己痊愈。

4. 如果有便秘情況，要多吃蘋果、香蕉，有助于排便。

5. 放松心情，不要讓壓力困擾你。

長(zhǎng)斑

有些人認(rèn)為春天陽(yáng)光沒(méi)那么足，不用防曬，但是，敏感皮膚的人過(guò)不了幾天皮膚上就出現(xiàn)棕色痕跡了。

補(bǔ)救方法

1. 在春天，應(yīng)使用防曬霜。紫外線人們是看不到的，但它會(huì)悄悄地?fù)p害你的皮膚。因此，白天最好選擇SPF8～SPF15的防曬霜。

2. 很多人嫌日霜不夠滋潤(rùn)，索性用晚霜代替。晚霜的滋潤(rùn)程度一般比日霜高，但晚霜所含動(dòng)物性油脂相對(duì)較高，在紫外線照射下，皮膚的溫度會(huì)升高，長(zhǎng)期下來(lái)可能會(huì)引起黑斑，后果令人苦惱。建議不要用晚霜代替日霜。

3. 多吃含維生素C多的食品，如西紅柿、獼猴桃、蘋果、櫻桃等，有助于美白、淡斑。

春天一定要將臉洗凈

不論肌膚如何干澀，只要臉部接觸臟污的空氣，就一定要卸妝洗臉。原則是：洗臉時(shí)不要太過(guò)用力地按摩，并且選擇含較高保濕成分的卸妝洗臉產(chǎn)品，充分搓揉起泡沫后再按摩。洗完臉后，只要再用干凈的毛巾吸掉臉部水分即可。

口角炎

嘴唇疼，口角破裂，或眼睛與鼻子周圍有裂紋，都是缺乏亞油酸、葉酸、泛酸或維生素B2及維生素B6引起的，營(yíng)養(yǎng)改善后，這些疼痛或裂紋便會(huì)消失。

補(bǔ)救方法

1. 多吃些含維生素B的食物，如燕麥、玉米、動(dòng)物肝臟等。

2. 最快的方法是補(bǔ)充核黃素或B族維生素，藥店或保健品店有售，兩天就會(huì)好。

3. 由維生素不足引起的嘴唇干燥，切忌用舌舔，用舌舔，雖有暫時(shí)濕潤(rùn)作用，但水分很快便會(huì)蒸發(fā)，嘴唇變得更干，甚至脫皮。

4. 使用無(wú)色潤(rùn)唇膏潤(rùn)唇，能給嘴唇提供良好的保護(hù)。

眼角細(xì)紋

氣候干燥的時(shí)候，眼角細(xì)紋也特別愛(ài)出現(xiàn)，隱隱地浮在皮膚上。如果不加注意，細(xì)紋就會(huì)成為一道抹不去的印痕。

補(bǔ)救方法

1. 每天早晚洗過(guò)臉后，使用適合自己膚質(zhì)的眼霜，用指肚輕輕涂抹。

2. 多吃含膠原蛋白的食物，如豬蹄黃豆湯、肉皮凍、蹄筋、魚頭豆腐湯等，能使細(xì)胞變得豐滿，從而減少細(xì)紋，令肌膚光滑富有彈性。

3. 適度按摩可緩解眼部壓力，讓肌膚得到應(yīng)有的休息。

4. 在工作時(shí)，尤其是成天與電腦打交道的女性，可每隔1～2小時(shí)輕閉眼睛休息5分鐘，將中指輕輕壓在眼球上，沿著半球輪廓緩緩按摩。

5. 每周做一次皮膚護(hù)理，美容師的按摩更徹底，能讓面部肌膚徹底放松。

皮膚不喜歡的生活方式

心情欠佳

心理狀態(tài)不好，情緒不穩(wěn)定等，不僅可以造成疾病，也影響皮膚健美，比如，引起皮膚發(fā)青、發(fā)紅，甚至痤瘡、干燥、肝斑等。人們常說(shuō)戀愛(ài)的女人最美，那是因?yàn)檎剳賽?ài)使人內(nèi)分泌功能活躍而容光煥發(fā)。

營(yíng)養(yǎng)不均衡

不正確的減肥方法，或暴飲暴食、挑食、飲酒過(guò)度等，造成營(yíng)養(yǎng)失調(diào)，導(dǎo)致皮膚早衰。

抽煙

抽煙的人皮膚灰暗，因?yàn)槌闊熆上拇罅康难酢?/p>

熬夜

晚間11點(diǎn)前入睡，可以充分美容。一般人稱夜間11點(diǎn)至凌晨1點(diǎn)為“美容時(shí)間”，這是因?yàn)?1點(diǎn)起經(jīng)脈循行至膽、肝，如果此二器官不健康，往往會(huì)明顯表現(xiàn)在皮膚上，易出現(xiàn)粗糙、色澤偏黃、長(zhǎng)痘等。尤其是肝沒(méi)有獲得良好休息時(shí)，黑斑、眼袋、黑眼圈更為明顯。所以，最好在23點(diǎn)入睡。

過(guò)夜生活者不但耗損肝功能，也常見(jiàn)精神萎靡、臉色蒼白現(xiàn)象。因?yàn)榧词挂关堊辶璩?點(diǎn)睡，睡到下午4點(diǎn)，也無(wú)法和晚上10點(diǎn)入睡、早上5點(diǎn)起床的人獲得相同的睡眠質(zhì)量。

護(hù)膚不當(dāng)

*經(jīng)?；瘽鈯y，面頰會(huì)呈現(xiàn)褐紅色?；瘖y品涂得過(guò)厚過(guò)多，妨礙汗腺、皮脂腺的分泌、排泄，易引起茨疹及痱子等出現(xiàn)。

*濫用化妝品。比如油性皮膚使用油質(zhì)性化妝品而引起脂溢性皮炎。

*風(fēng)可摧毀皮膚的表皮、真皮，導(dǎo)致皮膚失水、干燥。

*紫外線可使皮膚衰老，變得無(wú)彈性。

*按摩不當(dāng)，可增加皺紋。過(guò)多的按摩，亂按摩，或者逆著面部肌肉的方向按摩，都屬按摩不當(dāng)。

批復(fù)文件范文第2篇

【關(guān)鍵詞】縱隔； 臨床病理； 免疫組化

Malignant mesothelioma of the mediastinum : a case report and review of literature

【Abstract】 Objective To study clinicopathologic features and to analyze differential of malignant mesothelioma.Methods A case of malignant mesothelioma of the mediastinum was observed with pathologic examination and the literaturenas briefly reviewed.Results The malignant mesothelioma showed biphasic forms， fibrous component and neoplastic cells arranged in stream-or nest-or cabinet-like forms， immumohistochemical staining showed that the neoplastic cells were positive for Vimentin， Desmin， NSE， CD99， CEA， MYOD1.Conclusion Malignant mesothelioma of mediastinum is a relatively rare poor prognosis，with the combination of clinical histopathological and immunohistochemical data， its correct diagnosis and differential diagnosis can be made.

【Key words】mediastinum; clinic-pathology; immunohistochemistry

惡性間皮瘤發(fā)病率很低，大部分發(fā)生于胸膜和心包膜［1］，此瘤臨床無(wú)特異性癥狀和體征，需與其他縱隔腫瘤相鑒別，方能作出正確診斷，現(xiàn)將1例縱隔惡性間皮瘤的臨床病理資料報(bào)告如下，并結(jié)合文獻(xiàn)對(duì)該腫瘤的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、診斷與鑒別診斷、治療與預(yù)后進(jìn)行討論。

1 臨床資料

患者，男， 68歲， 因無(wú)明顯誘因出現(xiàn)右胸疼痛19天伴胸悶、氣短4天，查體：呼吸急促，右肺呼吸音低，叩診呈實(shí)音，CT檢查提示：右前上縱隔內(nèi)可見(jiàn)95mm×94mm巨大類圓形軟組織密度影，密度欠佳，邊緣光滑銳利，境界清楚。右肺上葉支氣管開(kāi)口略受壓變窄，肺內(nèi)未見(jiàn)明確異常密度影，手術(shù)中見(jiàn)：縱隔占位性腫塊，大小約為9cm×8cm。腫瘤實(shí)質(zhì)為白色髓樣物，與右肺中上葉、胸腺、前胸壁上腔靜脈粘連。

2 病理檢查

2.1 巨檢

縱隔腫塊不整形灰紅色破碎組織9cm×9cm×4cm，切面實(shí)性、細(xì)膩感，大部分為魚肉狀，部分區(qū)域似腦組織。右肺上葉：19cm×14cm×16cm，近肺門一端邊緣可見(jiàn)一潰瘍，大小為12cm×7cm×5cm，灰紅色、爛肉樣腫塊，該組織與肺界限欠清，切面灰紅，灰黃似壞死，腫瘤侵入肺組織。

2.2 鏡檢

腫瘤細(xì)胞呈片狀彌漫、編織狀排列，瘤細(xì)胞形態(tài)呈梭形、圓形、卵圓形和不規(guī)則形，異型性明顯，核分裂較多，在成片的瘤細(xì)胞間有不規(guī)則的裂隙，上皮樣型瘤細(xì)胞胞漿多少不一，嗜酸性梭形細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)少，核橢圓形。

2.3 免疫組化檢查

瘤細(xì)胞CK (+)、Vimentim (+)、 desmin (+)、 NSE (+)、CD(+)、CEA (+)、 Myod1 (+)。病理診斷：縱隔惡性間皮瘤。

3 討論

縱隔惡性間皮瘤是一種源于間皮的少見(jiàn)高度惡性腫瘤，因細(xì)胞形態(tài)復(fù)雜，易誤診轉(zhuǎn)移瘤及肉瘤等。 本病主要發(fā)生于成年人，患者年齡中位值為60歲［2］，兒童少見(jiàn)，患者常有石棉接觸史，臨床無(wú)特異性癥狀，本例患者出現(xiàn)胸痛、胸悶氣短，而無(wú)咳嗽、咳血等癥狀，與胸膜轉(zhuǎn)移性癌難以鑒別，CT檢查提示：右前上縱隔內(nèi)可見(jiàn)9.5cm×9.4cm巨大類圓形軟組織密度影，密度欠佳，邊緣光滑銳利，境界清楚。右肺上葉支氣管開(kāi)口略受壓，變窄，肺內(nèi)未見(jiàn)明確異常密度影。

惡性間皮瘤常伴有出血和壞死，由于間皮瘤的多潛能分化功能，使該瘤組織形態(tài)多樣，WHO（1999）將彌漫性惡性間皮瘤分為上皮樣型、肉瘤樣型和雙向型。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者又提議增加纖維形成型和低分化型兩個(gè)亞型［3］，上皮樣型惡性間皮瘤一般由上皮樣型瘤細(xì)胞組成，形成小管、腺泡、或片狀，不典型生長(zhǎng)方式，瘤細(xì)胞呈立方狀，胞質(zhì)豐富，呈淡嗜伊紅或透亮，核大而圓，呈泡狀，核仁明顯，核分裂易見(jiàn)，局部瘤組織常有壞死［1，3，4］。網(wǎng)狀纖維染色往往呈雙向分化特點(diǎn)。間皮瘤細(xì)胞內(nèi)糖原豐富，經(jīng)淀粉酶消化的PAS染色呈陰性反應(yīng)，由于間皮及腫瘤可產(chǎn)生大量透明質(zhì)酸，為酸性黏多糖，故奧辛藍(lán)染色呈陽(yáng)性，經(jīng)透明質(zhì)酸消化后轉(zhuǎn)為陰性，瘤細(xì)胞胞質(zhì)calretinim 陽(yáng)性，胞膜EMA陽(yáng)性，胞質(zhì)Vimentin 弱陽(yáng)性，而CEA為陰性或局灶性弱性［5，6］。超微結(jié)構(gòu)可見(jiàn)惡性間皮瘤細(xì)胞表面由密集細(xì)長(zhǎng)的微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)由豐富的張力微系及糖原顆粒，并見(jiàn)新腔形成［6］。雙向型間皮瘤一半病例呈間皮細(xì)胞與梭形細(xì)胞的混合，在該腫瘤不同部位梭形細(xì)胞成分多少不等。

由于間皮的多潛能分化功能使惡性間皮瘤的形態(tài)比較復(fù)雜，在光鏡下與縱隔轉(zhuǎn)移性癌、胸腺癌、惡性神經(jīng)鞘瘤不易鑒別，給臨床和病理診斷帶來(lái)了一定的困難，診斷時(shí)要多取材，仔細(xì)尋找腫瘤雙向分化的特征，特別是找到移行過(guò)度現(xiàn)象，并可借助組化免疫組化技術(shù)及電鏡來(lái)提高診斷準(zhǔn)確性。目前已發(fā)現(xiàn)的幾種單克隆抗體在惡性間皮瘤診斷和鑒別診斷上有一定的價(jià)值。

縱隔惡性間皮瘤首先應(yīng)與縱隔轉(zhuǎn)移性癌鑒別。區(qū)分腺癌和惡性間皮瘤有意義的腫瘤標(biāo)志物為CEA，惡性間皮瘤CEA幾乎均為陰性，僅極少數(shù)有局灶性弱陽(yáng)性表述，而95％的腺癌呈陽(yáng)性表述。EMA在腺癌和惡性間皮瘤都可表述，二者的區(qū)別在于腺癌EMA表述定位于細(xì)胞質(zhì)，而間皮瘤則通常定位于細(xì)胞膜。如果Vimentim 陽(yáng)性，CEA陰性，同時(shí)伴有其他上皮性標(biāo)志如 Keratin、EMA等陽(yáng)性則對(duì)診斷惡性間皮瘤有十分重要的價(jià)值，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，間皮細(xì)胞及腫瘤均表述 calretinin ，它是間皮瘤最特異性的標(biāo)志物。Calretinin 分子量為29KDa，是S－100蛋白家族中的一種鈣結(jié)合蛋白，中樞和周圍神經(jīng)組織中含量豐富，大約90％的上皮樣型間皮瘤彌漫性高表達(dá)，而腺癌極少表達(dá)［7］。電鏡對(duì)惡性間皮瘤的鑒別診斷有很高的價(jià)值，在超微結(jié)構(gòu)惡性間皮細(xì)胞表面有密集細(xì)長(zhǎng)的叢狀微絨毛，平均絨毛長(zhǎng)寬比>11，且瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有豐富的張力微絲及糖原顆粒并且新腔形成，而轉(zhuǎn)移性腺癌微絨毛短而粗，呈棒狀，平均絨毛長(zhǎng)寬之比＜5，胞質(zhì)內(nèi)有分泌顆粒伴細(xì)胞外腺腔形成，兩者有明顯不同［6］。

縱隔惡性間皮瘤還需與多種縱隔內(nèi)腫塊的病變鑒別，如：胸腺癌、惡性神經(jīng)鞘瘤、滑膜肉瘤等鑒別。

縱隔惡性間皮瘤是一種高度惡性腫瘤，其預(yù)后差，一般認(rèn)為手術(shù)切除是主要的治療方法［2］。

參考文獻(xiàn)

1 Attanoos RL， Gibbs AR. Pathology of malignant mesothelioma. Histopathology，1997，30:403-404.

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3 同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)病理教研室.中山醫(yī)科大學(xué)病理教研室.外科病理學(xué).第二版.武漢：湖北科學(xué)技術(shù)出版社，1999，422-423.

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5 Donna A，Betta PG， Bellingeri D，et al . New marker for mesothelioma: an immunoperoxidase study. J Clin Pathol ， 1986，39:961-965.

批復(fù)文件范文第3篇

【關(guān)鍵詞】腹膜間皮細(xì)胞；胰蛋白酶；大網(wǎng)膜

腹腔粘連是腹部手術(shù)后常見(jiàn)的并發(fā)癥，常引起腸梗阻、慢性腹痛，以及不孕、不育等，而且粘連很難通過(guò)再次手術(shù)加以改善[1]。近年來(lái)對(duì)腹腔粘連的形成機(jī)制有了較深入的研究，認(rèn)為腹腔粘連的形成與多種因素有關(guān)，其中腹膜間皮細(xì)胞的完整性及功能正常與否是腹腔粘連形成的關(guān)鍵因素[2]。因此，建立人腹膜間皮細(xì)胞培養(yǎng)體系，為體外研究人腹膜間皮細(xì)胞生理功能及其在腹腔粘連防治中的作用提供了有效手段。

早在20世紀(jì)80年代初，Wu等[3]通過(guò)直接從患者腹水中獲取腹膜間皮細(xì)胞的方法，成功地培養(yǎng)出人腹膜間皮細(xì)胞。此后Kern[4]和Stylianou[5]等分別采用膠原酶消化組織法和直接種植法，培養(yǎng)出人腹膜間皮細(xì)胞，Stylianou并完整地闡述了人腹膜間皮細(xì)胞的鑒定方法。雖然目前人腹膜間皮細(xì)胞培養(yǎng)方法很多，但由于培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞的條件苛刻且易受成纖維細(xì)胞污染等原因，要獲得大量、高純度的人腹膜間皮細(xì)胞仍為實(shí)驗(yàn)研究中的難題。我們綜合文獻(xiàn)方法并加以改進(jìn)，建立了人腹膜間皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法。

1材料與方法

1.1取材

無(wú)菌取自江蘇省中醫(yī)院普外科、肛腸科腹部手術(shù)切除的大網(wǎng)膜。

1.2主要儀器設(shè)備

眼科剪、鑷，培養(yǎng)皿，50mL培養(yǎng)瓶，吸管，10mL尖底離心管，CO2培養(yǎng)箱，超凈臺(tái)，離心機(jī)，倒置相差顯微鏡，100目不銹鋼篩，0.22濾膜過(guò)濾器。

1.3主要試劑

1.3.1PBS液氯化鈉8.0g，氯化鉀0.2g，磷酸氫二鈉1.56g，磷酸二氫鉀0.2g溶于1000mL三蒸水中，過(guò)濾滅菌分裝，室溫保存。

1.3.21640培養(yǎng)基InvitrogenCorporation公司產(chǎn)品，按說(shuō)明配制，并使其含有青鏈霉素各100U/mL，小牛血清20%。

1.3.3細(xì)胞消化液胰蛋白酶（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）2.5g，EDTA二鈉鹽0.16g溶于1000mLPBS液中，過(guò)濾除菌，分裝于小瓶?jī)?nèi)，-20℃保存。

1.3.4免疫組化抗體波形蛋白抗體，第8因子抗體，CD45抗體均為福建邁新公司產(chǎn)品。

1.4腹膜間皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)

無(wú)菌摘取腹部手術(shù)切除的大網(wǎng)膜，剪取血管脂肪相對(duì)少的網(wǎng)膜組織，大小約3cm×3cm，將剪取的網(wǎng)膜組織置于含500U/mL青霉素和500L/mL鏈霉素的無(wú)菌生理鹽水中浸泡20min，然后用生理鹽水流動(dòng)沖洗5min，將漂洗后的網(wǎng)膜組織平鋪于無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再用PBS反復(fù)漂洗至沒(méi)有油珠漂浮，同時(shí)剪除血管及脂肪，將洗凈的網(wǎng)膜組織剪成1cm×1cm大小，加入0.2%胰蛋白酶-0.02%EDTA細(xì)胞消化液20mL，用吸管反復(fù)吹打均勻，裝于50mL培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放置于37℃，體積分?jǐn)?shù)為5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)消化25min，每5min振搖1次，最后5min保持靜止。消化結(jié)束后將消化液用100目不銹鋼篩過(guò)濾于培養(yǎng)皿內(nèi)，加入等量含20%體積分?jǐn)?shù)的胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液終止消化。用移液器分裝于10mL尖底離心管，1000r/min，離心10min，棄上清，加入適量完全培養(yǎng)液溶解細(xì)胞沉淀，分裝于50mL培養(yǎng)瓶，放置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

1.5腹膜間皮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

原代細(xì)胞培養(yǎng)24h后，鏡下觀察細(xì)胞貼壁情況，貼壁良好的以等體積的新鮮完全培養(yǎng)液替換瓶?jī)?nèi)全部陳舊培養(yǎng)液，貼壁情況差的以等體積的新鮮完全培養(yǎng)液替換瓶?jī)?nèi)一半的陳舊培養(yǎng)液，此后每3d全換液1次。約培養(yǎng)5~8d細(xì)胞生長(zhǎng)融合，可以首次傳代。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)融合成單層，PBS漂洗2次，每瓶加入完全消化液2mL，在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)消化15min。鏡下觀察細(xì)胞消化情況，細(xì)胞脫落變形后，加入4mL完全培養(yǎng)液終止消化。將細(xì)胞懸液分裝于離心管內(nèi)1000r/min，離心10min，棄上清，加入適量完全培養(yǎng)液溶解細(xì)胞沉淀，傳代于6孔板（將蓋玻片裁成4片，泡酸，洗凈，烘干，在盛有多聚賴氨酸的塑料培養(yǎng)皿內(nèi)浸泡5~10min，取出，在干燥箱內(nèi)60℃烘干1h，高壓滅菌。將滅菌后的蓋玻片放置于6孔板內(nèi)，每孔3片）內(nèi)，加入適量完全培養(yǎng)液。繼續(xù)在37℃，5%CO2，濕度95%的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，至細(xì)胞完全貼壁伸展。

1.6腹膜間皮細(xì)胞的鑒定

1.6.1免疫組化鑒定①吸去6孔板內(nèi)培養(yǎng)液，PBS（pH7.2~7.4）洗2次，每次3min，將細(xì)胞爬片取出，用生理鹽水洗2遍，隨即放入10%中爾馬林固定30min；蒸餾水洗4次，每次3min。②加入0.1%TritonX100（PBSpH7.4配制），室溫10min，PBS洗3次。③抗原修復(fù)，根據(jù)不同一抗的要求進(jìn)行（CD45無(wú)須修復(fù)，波形蛋白和第8因子用檸檬酸緩沖液高壓加熱修復(fù)。滴加即用型一抗、室溫下孵育60minBPS洗3次每次5min，去除PBS。每張蓋玻片滴加50LElivision試劑盒中的試劑A，室溫下20min，PBS洗3次，每次3min。每張蓋玻片滴加50LElivision試劑盒中的試劑B，室溫下30min，BPS洗4次，每次5min）。④DAB顯色，每張蓋玻片滴加新鮮配置的DAB顯色溶液，在顯微鏡下觀察3~10min；自來(lái)水洗5min，蘇木素復(fù)染，0.1%鹽酸分化，自來(lái)水沖洗，PBS返藍(lán)。⑤脫水，逐級(jí)脫水：過(guò)70%、80%、90%、95%酒精各1次，100%酒精2次，每次1min；透明，過(guò)二甲苯溶液3次，每次3min。⑥封片，將有細(xì)胞的一面向下，用中性樹膠封片。自然通風(fēng)干燥。普通光學(xué)顯微鏡觀察，拍照。

1.6.2掃描電鏡鑒定①細(xì)胞準(zhǔn)備：同間皮細(xì)胞傳代，取出細(xì)胞爬片浸入PBS中漂洗細(xì)胞表面；②固定：將細(xì)胞爬片放入青霉素小瓶中，加入4℃預(yù)冷的3%的戊二醛，4℃過(guò)夜。吸出固定液，用PBS浸洗2次，每次10min。再加入4℃預(yù)冷的1%的四氧化鋨，在4℃固定1h。PBS浸洗2次，每次10min。③脫水：用30%、50%、70%、80%、90%、100%酒精逐級(jí)脫水，各10min。④置換：將樣品放入醋酸異戊醋:丙酮=l:1的混合液中10min，然后放入醋酸異戊酯中2次，各10min；⑤臨界點(diǎn)干燥：預(yù)冷臨界點(diǎn)干燥室的樣品室，使其溫度降到0℃，將玻片放入樣品籃，樣品籃的上下兩面事先鋪好濾紙，在保證細(xì)胞被醋酸異戊醋浸潤(rùn)的情況下，將樣品籃放入樣品室。擰緊室蓋，充入液態(tài)CO2，同時(shí)緩慢排出CO2氣體，反復(fù)3次，使液態(tài)CO2置換出細(xì)胞中的醋酸異戊醋，加熱樣品室，使CO2達(dá)到臨界狀態(tài)。緩慢的排出CO2，待樣品室壓力降為零，取出樣品。⑥離子濺射鍍膜：從樣品籃中取出玻片，用銀膠將干燥樣品粘到樣品托上。

導(dǎo)電膠干燥后，將樣品托放入離子濺射儀的真空罩內(nèi)，抽真空。當(dāng)真空度達(dá)0.1托后，加高壓1000V，離子濺射鍍膜。⑦電鏡觀察：?jiǎn)?dòng)掃描電鏡，安裝樣品，觀察細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，拍照。

1.6.3透射電鏡鑒定①消化間皮細(xì)胞，1000r/min，離心5min，3%戊二醛固定，PBS洗滌2次，每次20min；②1%鋨酸固定30min，PBS浸洗2次，每次10min；③脫水：用30%、50%、70%、80%、90%、100%酒精逐級(jí)脫水，各10min；④100%丙酮固定10min；Epon812浸泡、包埋；⑤LKB-V型超薄切片機(jī)切片（70m）；H-600透射電鏡（日本）下觀察、拍片。

2結(jié)果

剛從大網(wǎng)膜消化下來(lái)的間皮細(xì)胞在倒置顯微鏡下為葡萄串狀，50%的間皮細(xì)胞大約24h左右貼壁，個(gè)別細(xì)胞伸展。72h所有貼壁細(xì)胞均伸展，呈多形性（梭形、橢圓形、多角形等），邊緣不整，細(xì)胞呈現(xiàn)拉網(wǎng)狀生長(zhǎng)，與相鄰的細(xì)胞相互連接。以后細(xì)胞拉網(wǎng)生長(zhǎng)現(xiàn)象減少，生長(zhǎng)融合呈多角形，大小較為一致，似鋪路鵝卵石樣外觀。細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)后，2~4代細(xì)胞的形態(tài)與生長(zhǎng)方式與原代細(xì)胞基本無(wú)異。5代開(kāi)始間皮細(xì)胞增殖明顯緩慢。

2.1免疫組化鑒定

光鏡下觀察所培養(yǎng)細(xì)胞的波形蛋白染色為陽(yáng)性，是間皮細(xì)胞的特征。波形蛋白抗原陽(yáng)性，CD45、第8因子抗原陰性可排除成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞。

2.2超微結(jié)構(gòu)

掃描電鏡下細(xì)胞完全鋪展，與周圍對(duì)比不強(qiáng)烈。細(xì)胞呈橢圓形或多角形，胞核圓形，位于細(xì)胞中央、較小，有核處細(xì)胞隆起較厚。細(xì)胞表面大量密集的微絨毛，細(xì)胞周圍高密度的絨毛在背景中形成高密度的暈圈。透射電鏡檢查：細(xì)胞表面存在大量多少不等的微絨毛，細(xì)胞漿內(nèi)豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體，未見(jiàn)Weibelpalade小體。

3討論

間皮細(xì)胞培養(yǎng)中要注意以下幾點(diǎn)：①正確確定首次換液時(shí)間，避免換液過(guò)早，首次換液越晚越好，最好第3天進(jìn)行，動(dòng)作輕柔，減少振蕩。原代培養(yǎng)頭3天盡量勿動(dòng)培養(yǎng)液，以免干擾間皮細(xì)胞貼壁，換液越早丟失的間皮細(xì)胞數(shù)目越多；②胰蛋白酶消化后，消化液中的間皮細(xì)胞不要，因?yàn)樽钕认聛?lái)的往往是活力不好的細(xì)胞。終止消化后用培養(yǎng)液吹打下來(lái)的細(xì)胞活力好，生長(zhǎng)快；③注入培養(yǎng)瓶中的間皮細(xì)胞要具備一定細(xì)胞密度，不要太稀。生長(zhǎng)良好的細(xì)胞可提供“化學(xué)信使”去促進(jìn)其它細(xì)胞生長(zhǎng)，因此細(xì)胞密集時(shí)它們彼此能提供和接受該“化學(xué)信使”越長(zhǎng)越好；假若過(guò)稀，則可因缺乏該化學(xué)信使而停止生長(zhǎng)、死亡。此外，腹膜供體的年齡越年輕越好。

雖然目前國(guó)內(nèi)、外的文獻(xiàn)已介紹了多種間皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法，但這些培養(yǎng)方法均較為復(fù)雜且重復(fù)性不高，不能滿足科學(xué)研究的需要。本實(shí)驗(yàn)所建立的體外人腹膜間皮細(xì)胞培養(yǎng)模型，操作簡(jiǎn)單，培養(yǎng)迅速，4~7d即可傳代，可重復(fù)性強(qiáng)。

【參考文獻(xiàn)】

〔1〕MillerG,BomanJ,ShrierI,etal.Naturalhistoryofpatientswithadhesivesmallbowelobstruction〔J〕.BrJSurg,2000,87:1240

〔2〕劉洪斌,李東華,郭世鐸.腹腔粘連形成機(jī)制及治療研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2005,11(1):84-86

〔3〕WuYJ,ParkerLM,BinderNE,etal.Themesothelialkeratins:anewfamilyofcytoskeletalproteinsidentifiedinculturedmesothelialcellsandnonkeratinzingepithelia〔J〕.Cell,1982,31:693

批復(fù)文件范文第4篇

【關(guān)鍵詞】 腹瀉/中醫(yī)藥療法；健脾溫腎；鎮(zhèn)靜安神；老年人

慢性腹瀉是老年常見(jiàn)病，多發(fā)病，直接影響老年人的生活質(zhì)量，嚴(yán)重者可造成營(yíng)養(yǎng)不良、貧血、電解質(zhì)紊亂，甚至危及生命。筆者采用健脾溫腎鎮(zhèn)靜安神法治療老年慢性腹瀉30例，取得滿意療效，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 臨床資料

本組30例均為我院門診患者，男14例，女16例；年齡60～80歲；病程6個(gè)月～12年。均符合《中醫(yī)病癥診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》：(1)大便稀薄或如水樣，次數(shù)增多，可伴有腹脹腹痛等癥。(2)慢性久瀉起病緩慢，病程較長(zhǎng)，反復(fù)發(fā)作，時(shí)輕時(shí)重。(3)飲食不當(dāng)，受寒涼或情緒變化可誘發(fā)。

2 治療方法

基本方:黃芪30 g，黨參10 g，茯苓15 g，白術(shù)10 g，茯神10 g，山藥15 g，柴胡6 g，升麻6 g，蘆根10 g，芡實(shí)10 g，陳皮10 g，鉤藤10 g，炒薏苡仁20 g，補(bǔ)骨脂10 g。加減:腹痛喜暖加吳茱萸10 g，食少納呆加雞內(nèi)金5 g。每日1劑，水煎2次，早晚分2次服。15 d為1個(gè)療程，連服2個(gè)療程。

3 療效標(biāo)準(zhǔn)與治療結(jié)果

3.1 療效標(biāo)準(zhǔn) 參照《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》。治愈：大便正常，其他癥狀消失，臨床檢驗(yàn)正常；好轉(zhuǎn)：大便次數(shù)明顯減少，其他癥狀改善；未愈：癥狀未見(jiàn)改善。

3.2 治療結(jié)果 服藥2個(gè)療程，30例中，治愈18例，好轉(zhuǎn)9例，無(wú)效3例，總有效率90%。

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腹瀉是消化系統(tǒng)疾病中的一種常見(jiàn)病，是由于胃腸道的分泌、消化、吸收及運(yùn)動(dòng)功能障礙，導(dǎo)致糞便稀薄，次數(shù)增加［13］。腹瀉對(duì)老年人損害尤為嚴(yán)重，大量水分喪失，會(huì)使人體處于脫水狀態(tài)，導(dǎo)致血容量減少，血液黏稠度增加，血流緩慢，容易形成血栓，并堵塞血管。腹瀉時(shí)由于離子紊亂，可引起心律失常，對(duì)患有心血管疾病的老年人更為不利，由于老年人抵抗力弱，對(duì)藥物的耐受性降低，抗生素治療，療效不穩(wěn)定，且容易造成菌株紊亂。采用健脾溫腎鎮(zhèn)靜安神法治療老年慢性腹瀉，既可以提高機(jī)體抵抗力，又可以除病祛邪，且不易復(fù)發(fā)，療效肯定［45］。

【參考文獻(xiàn)】

［1］楊崔領(lǐng).辨證治療慢性潰瘍性結(jié)腸炎驗(yàn)案［J］.吉林中醫(yī)藥，2004，24(1):4344.

［2］朱曉駿，宋郁珍.腸易激綜合征的中醫(yī)研究進(jìn)展［J］.吉林中醫(yī)藥，2004，24(1):54.

［3］常洪雁.慢性結(jié)腸炎直腸炎的治療與護(hù)理［J］.吉林中醫(yī)藥，2004，24(2):43.

批復(fù)文件范文第5篇

華北行政委員會(huì)交來(lái)你院1952年法秘行字第316號(hào)呈及劉院長(zhǎng)所面談，為關(guān)于婦女離婚后帶產(chǎn)問(wèn)題提出的處理意見(jiàn)，經(jīng)研究并報(bào)請(qǐng)中央人民政府最高人民法院核示后，茲分別答復(fù)如下：

（一）第一項(xiàng)意見(jiàn)：“此項(xiàng)問(wèn)題的處理，應(yīng)限于新婚姻法頒布以后的，新婚姻法頒布以前的不再處理。如為群眾所提出者，可加以說(shuō)服”。這對(duì)一般案件的處理是可以的，但在新婚姻法頒布以前的案件中，如有特殊情況，也應(yīng)根據(jù)不同的具體案件，酌情保護(hù)婦女應(yīng)帶的財(cái)產(chǎn)，不應(yīng)完全受時(shí)效的限制。

（二）第二項(xiàng)意見(jiàn)：“婦女應(yīng)帶的財(cái)產(chǎn)，應(yīng)予保障，如在離婚時(shí)未判帶財(cái)產(chǎn)或帶的財(cái)產(chǎn)過(guò)少者，應(yīng)根據(jù)婚姻法的規(guī)定予以重新處理。但須根據(jù)男（男方離婚前）女雙方經(jīng)濟(jì)情況恰當(dāng)?shù)奶幚怼?。同意此?xiàng)意見(jiàn)。