前言:想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎?我們特意為您整理了5篇愛稻草范文,相信會為您的寫作帶來幫助,發現更多的寫作思路和靈感。
[16歲的夏天]????????
我在晨報上看到一首詩,里面有這樣一句:“年輕的愛不過是場流星雨。”覺得喜歡,就剪了夾在書里。雖然只看過一遍,但那句話始終記得。一個人的時候,走在街上,路過樓宇,任何小小的觸動都可以讓我吟誦起它。
寫詩的那個人名字很怪,叫“秸稞”,我不明白好好的為什么要叫自己為一種只能燒火的草。我試圖自己來詮釋它,結果枉然。當這棵草越來越頻繁地出現在報紙上,我覺得我總有一天會找到答案。
特意的,買了一個大大的筆記本,每一張都粘貼著秸稞的詩歌,旁邊有我手繪的畫。沒人告訴我這樣的迷戀是不是一種癡愛。當然,前提是我已經把它當做了秘密,珍藏在心底。即使最好的朋友,我都不敢去言說。
那一年,我的世界里除了書本,就只有秸稞。他像一棵出生在沃土的樹,瘋狂地生長和繁衍,以至于很多個夜晚,我都以為就要見到他了。
[18歲的秋天]????????
這個季節里最熱的那一天,我接到了大學錄取通知書,中文系的。直到離開家,父母還在批判著我的錯誤選擇。天下最苦是文人,為什么一定要和自己過不去呢?我從不解釋這個疑問,因為我不能和他們說,我愛上了一個沒有見過面的人,愛上了他的文字,所以,一定要走一遍他走過的路。
喜歡秸稞已經5年了,我的收獲是每年一個厚厚的粘貼本。收拾行李的時候,我先把它們拿了出來,仔細地檢查一番,然后妥帖地放進行李箱最下面。
大學的課程輕松許多,很多同學都把過剩的精力投入到愛情中。我當然是沒有那份心思的?我給自己了一個“靠近秸稞”的計劃,第一步是給他常發稿子的報社投稿,借此和編輯混熟,要到他的聯系方式。
1O月14日,我的文字首次變成鉛字,距離秸稞是兩篇豆腐塊的距離。我想,我們近了。
[21歲的冬天】????????
實習的時候,我被分去省電臺。據說,如果表現不太差是可以留用的。我喜歡傾訴類的,所以選擇了“都市稻草人”。
主播是個50歲左右的男子,有長的發,濃的眉,喜歡穿單色的T恤和褪色的牛仔褲。當然,富有磁性的男中音才是他整個人的亮點。只一次,我就喜歡上了自己的文字讀在他唇下的感覺,他能把所有的字都讀活了,如同把灰姑娘變成了白雪公主。
一周以后,我們開始交流工作以外的話題。他翻著我的筆記說,你的筆鋒不太像一個女孩子。我的筆鋒當然不像女孩子,因為我一直試圖靠近秸稞,我習慣了和他用近似的詞和相同的語氣。可這是我一個人的秘密,一直都是,我不打算和他說。
做節目的時候,我坐在他右邊。每次聽那些聽眾講述和我類似的故事,我都會暗暗嘆氣。漸漸地,他察覺到了我的惆悵。不過,他沒有問我更多,只是說,暗戀也是有所為有所不為的。我明白,他在告訴我,我的暗戀不可為。
[22歲的春天]????????
實習快要結束的時候,我請全組同仁吃飯,算是謝了大家對我的關照。給胖胖的臺長倒酒時,被他端詳半天:很舍不得你走啊。難得給他找到一個如此合適的搭檔,你們兩個都是天生的主持的料子,又都喜歡寫點兒東西,連文風都特別像,多難得呀。
回到座位上,我悄悄問他:你也寫東西?他笑笑,說是寫點兒豆腐塊,不成什么氣候。那一瞬間,我把他想象成秸稞,我的神秘的秸稞。他幫我改稿子的樣子,他讀我文字的神情,還有他也收集晨報的習慣,我想到他即使不是秸稞,也是有關聯的。
他送我回家,很長的一段路因為彼此的沉默而越發漫長。我一直斟酌著要不要試探他是否是秸稞,但總是勇氣不足,有那么幾次話都到了嘴邊還是沒有問出口。到了我的宿舍樓下,他停下來,說:很晚了,上去吧,再見。
簡短的告別后,他轉身就走。再也顧不上矜持與禮貌,我急急地追上他:你是秸稞?他看看我,點頭。來不及掩飾,淚就先流了下來。我完全忘記了預想的寒暄和表達。我只說,秸稞,你怎么才出現啊,我等了你好久。
他把我擁在懷里,輕輕地拍我的肩,一遍遍地說,我知道我知道。他說他知道,他知道我在找他,他知道我在等著見他一面,他就一定知道我對他的感情。雖然他在最后一刻才告訴我他是秸稞,但是我不計較這個遲到的通知。
[22歲的夏天]???????
我工作了,在省電臺,做秸稞的搭檔。是個如愿以償的結果,我相信這是一個好的開始,就像我相信和他會有一個好的結局。
明顯的,秸稞不這樣認為。再見的時候,他的態度冷到了極點,我甚至懷疑幾個月前的共事可否存在過。有別人在的時候,他還象征性地和我說幾句工作的事;離開了人群,我們就只剩下沉默。
每天下午,等待上節目的空閑總因為這沉默而越發的森冷。我們對坐在桌子兩端,用電腦隔開彼此沒有表情的臉。秸稞和唐米的名字懸掛在同一個論壇里面,因為都還算半個職業,所以我們不發自己的賣字稿,只隨意地灌灌水,寫寫字。他從來不回我的帖子,而我想回,卻無處可回。他只跟別人的帖子,更多時候是潛水。
夏天,因為他而更加讓我郁悶。我需要一個出口來釋放掉心里的火山。思前想后,決定在論壇里寫寫自己的這場愛,我想他一定會來看的,盡管他一定不會回應我。
[22歲的夏天末]???????
每天一貼的《稻草人的愛》已經在論壇里被跟到了第23頁,我的愛成了全世界人眼里的固執和癡傻。那些好心人在給著我善意的鼓勵和好心的勸解,一些年輕的男孩子甚至沖動地寫著“唐米,如果你愛的是我,我就牢牢地抓住你的手”之類的感言,而他依然沒有回復。
不是沒有失落的,可我還是不能放棄。當全世界都以為這不過是一場讀者對寫者的暗戀的時候,只有我和他知道,這愛僅是一個思想轉身的距離。我始終都在猜測和尋找他不接受我的原因,遺憾的是,答案早已溺死在他的沉默里。
有人告訴我,若想得到愛情,就要給男人足夠的浪漫與吸引;若想得到婚姻,就要給男人可以幻想家庭的空間。我當然想和秸稞有場婚姻的緣,因此一直隱忍。
兩個人的辦公室讓我布置得像個小家。白的窗紗,紅的腳毯,永遠翠綠的君子蘭,流光異彩的觀賞魚。很多同事都喜歡到這里來看我的十字繡,偶爾還討一兩樣成品去。唯有他,依然沉默。
22歲的夏天,就在他的沉默里悶熱地過去了。
[22歲的秋天]????????
臺長在一個周末對我說,從現在起你和他一起主持節目吧,男女搭配會更有生氣些。
有了表達自己的機會,我開始打破沉默。我不贊成秸稞面對感情時的保守,所以,節目里他常常勸聽眾要從大局看感情,我則更多地讓他們站在理性的角度看付出與收獲的對
錯和多少。漸漸地,有人打進電話來會直接地問:唐米,我希望你告訴我該怎么辦?
短短一周,我的名字在同行里赫然躍起。臺長在周會上給了我極大的肯定,一些用詞讓我覺得他表揚的并不是我,而是他的想象。我清楚這些獲得里面,秸稞給了我很多默默的支持。正因為他在節目中的沉默,我才有了表現的機會。而那個時候,他本不該沉默的。
臺長打來電話說,在一個飯店的包間里等我,談談節目的事。彼時,我正和秸稞在加班趕一期參加全國比賽的節目。我向他請假,清楚地交代了去向和去因。他接過我手里的稿子,繼續忙碌,這態度便是他給我的批準。
胖胖的臺長拍著我的肩允諾要好好培養我,我悄悄地挪遠身體,不卑不亢地提醒他該受到提拔的人是秸稞。臺長一臉不耐煩地揮揮手:現在你和他都是沒有編制的,這節目拿出去,不論獲獎與否,都會得到一個名額。你懂我的意思嗎?
我懂,所以我答應臺長會考慮。考慮不是為了結果,而是為了拖延時間。我相信我們合作的節目會得獎,有了這個砝碼,秸稞以后的路會更順一點兒。
[22歲的冬天]????????
我們贏了,結果被宣布的時候,秸稞第一次擁抱了我。很短的一瞬間,但是很緊。我多想這一刻就是我的一輩子,忘了從前,也不要以后。
慶功宴上,恭喜的話如雪漫飛,那些漾笑的臉一次次經過我,可每一張我都覺得很陌生。臺長端了紅酒過來,笑意盈盈地走向我。他每向前一步,我就后退一下,無路可退的時候,我本能地喊:秸稞救我。
眼前滿是關切的眼睛,臺長拉著我的手說,唐米,你這樣的好同志我們是要重用的。他身后的人紛紛贊同著。我死了嗎?我恍惚著問他們,也好像在問自己。你只是暈倒了。說這話的是秸稞。可我看不見他的臉,他被擋在人群之外。
名額下來了,只有一個。臺長遺憾地對我們說這是沒有辦法的事,但不論誰得了編制,另一個也將繼續留用。臺長給我們3天時間來整理自己的述職報告,然后交領導小組討論。秸稞說,不用麻煩了,名額給唐米吧。
第二天,秸稞沒來;第三天,秸稞沒來。我知道那個位置會空上一段時間,然后由別人來坐。試圖在論壇里找他,24小時在線竟也遇不到他,一個人的消失是如此輕易。而我,喜歡了他6年,又共事1年,卻把他從眼前弄丟了。
[24歲的春天]????????
晨起的時候,發現眼角又多了一條細小的紋。我想我老了,從外表到心靈。回想第一次讀秸稞的時候,那個如花的女子竟生著一副陌生的面孔。
秸稞變了沒有?他到底有沒有喜歡過我?他為什么不接受我?他為什么要離開?都是一些不會有答案的問題,但我甘于猜想,樂此不疲。
有一次在街上,遇見一個和他貌像的男子,我便中了詛咒般地跟了5條街。后來的幻想里就多了一種假設,如果我和他不期而遇,我該說些什么,做些什么?我想我是會哭的,就像第一次知道他是誰的時候那樣盡情地在他懷里哭。
然而,一切起于幻想,也止于幻想,浪漫重逢與邂逅一次也沒有在現實里上演過。他甚至抽離了那些文字,讓我每日翻閱著晨報卻再也找不到可以看的東西。如此干凈利落,真真是我喜歡的那個他。我在這個過程里發現自己還能喜歡上這種無聲的折磨,痛,但充滿了。
我想,我依然愛他。
[26歲的秋天]????????
出版社的編輯說,原定的出書計劃現在有了變動,原因是我的書名與另一個人的有重疊。我的是《愛上一個稻草人》,而另一本是《一個稻草人的愛》,更讓他們為難的是,我們的文風很接近,宣傳上很難各具特色。
我向編輯要了那個作者的電話,那邊的聲音告訴我,秸稞出現了。幾乎用了全身的力氣才有勇氣告訴他,我是唐米,我要見你。然后迅速掛斷,不給他拒絕的機會。劇烈的喘息了一陣,才想起沒有定好時間與地點,于是再撥過去,快速地講完,快速地掛斷。
他剪短了頭發,也沒有穿單色的T恤和褪色的牛仔褲。見了他,我根本就忘了世界上還有語言這碼子事。倒是他溫和了許多,笑著打趣我和當年沒有區別。
然后,我們就談當年,談那些共同做過的節目,談我曾經的幼稚,談他昔日的沉默。終于,終于,我沒能忍住地問了他:當年,你為什么不理我?他收了所有的笑容,平和地問我:你結婚了嗎?我搖搖頭。他點著頭回答我:我以為我離開后你會結婚。
這是什么理由?我激動地回敬他:你也以為我和那個胖胖臺長不干凈嗎?事實是你離開以后,我也離開了!他吃驚地抬起頭,劍一樣的目光穿向我……
[27歲的春天]????????
我結婚了。丈夫子新算是個商人,經營著一家不大不小的清吧。他的清吧是我25歲上最為驚喜的發現,每每思念秸稞到寂寞,我都到那里去坐一坐。雖然一坐就是5年,但我與子新并沒有因此而相識相知,直到我與秸稞重逢的那個下午,他才緩緩地出現在秸稞離開之后,以遞來一盒紙巾的姿勢走進我的生活。
他沉默地看著我大把大把地抽取紙巾,胡亂地擦拭一臉淚水,耐心地等我不再哭泣,然后說:年輕的愛不過是一場流星雨,不必傷悲。我驚詫于這個男人能夠說出秸稞的詩句,顧不得掩飾自己狼狽的哭相,愣愣地目測了他良久。
我去清吧的頻率漸漸高了起來,雖然那里有著我與秸稞再度失離的記憶,但只要看見子新,我的傷悲就淡了許多。很多的瞬間,看著子新的臉,我會想起自己思念秸稞的這么多年時光。
沒有誰追求誰的事情發生。情人節的晚上去子新的店里,他擺了我寫的書在桌子上,他說書里有兩句話印象最深,一句是“年輕的愛不過是一場流星雨”,另一句是“把心里的事寫出來是對自己的一種交代,也是為了以后能再輕松地愛”。前一句是秸稞的話,后一句是我說給自己的,它們都寫在醒目的位置。子新說,如果你覺得你已經可以輕松地去愛了,那就嫁給我吧。
我低下頭,想了秸稞一秒鐘,發現已經不太記得清楚他的樣子,傷悲也不那么濃郁了。于是,我抬起頭對子新說,好。
[29歲的冬天]????????
子新的清吧連鎖已經開到第5家了,地段越選越好,生意也越來越火,可我還是喜歡呆在最初的清吧里。遇到人少的時候,我就坐在秸稞曾坐過的位置上讀書。
書是子新向我求婚時拿來的那一本,我的第一本書――《愛上一個稻草人》,記錄著我迷戀秸稞的全過程。每次讀,都有不同的感受,起初常常被自己的癡情所感動,后來漸漸覺得這一切更像是發生在別人身上的故事。
再后來,我才知道子新能說出和秸稞一樣的話只是一種巧合,那一句是很多人在愛情道路上走過時都會發出的一聲嘆息。而我愛上秸稞,也只是因為他在我懵懂于這個道理的時候先一步說了出來。換句話講,秸稞只是我青春時期的一個崇拜,我愛上的是愛本身的感覺,而不是具體的那個人,而這一愛就是10年。
制作步驟:
1、把綠豆用石磨磨后泡在溫水里,并去皮蒸出來放點鹽壓碎;
2、再放白糖做成餡;
3、把艾草洗凈煮出來,并用涼水漂一漂,除水份后搗碎;
4、蒸糯米面后加艾草,并使之染成綠色;
5、把綠豆餡摘成綠豆大小,用手抓緊;
6、使之與艾草混在一起,拌勻、和好成光滑粉團,年糕的量要比綠豆餡多;
7、取幾片鮮艾草葉洗凈,鋪在籠屜中;
實際上,減壓是都市白領的永恒主題。如果說瑜珈、SPA是以一種溫柔的方式釋放身心,那么有氧搏擊操就是讓你在劇烈的運動中完成激情釋放的過程。
有氧搏擊操(kickboxing),最早是由一位黑人搏擊世界冠軍創造,但直到最近才在國內得到一定程度的發展。它的特點是是將拳擊、空手道、跆拳道、功夫和一些舞蹈的動作混合在一起,并且配合著動感十足的背景音樂。極富爆發力的動作,讓你在汗水中盡情發泄激情和青春。
由于搏擊操更重視瞬間的爆發力、感官刺激,如果再加上動感音樂,所以曾經被稱作“男人的舞蹈”。但不甘心示弱的女性似乎比男性更快地融入到這項“男人的舞蹈”中,不知道是不是受了韓流中清純美麗的《我的野蠻女友》的啟發。北京青鳥健身中心的健美操部主管黃靚,對此深有感觸。他認為,練習有氧搏擊操并不能只從流行時尚出發,而應出于健身的目的,當然,在練習時,還有很多問題都需要注意。
1、熱身時間要足夠,否則身體得不到足夠的伸展。上課時腿部應每15~20分鐘作一次伸展。
2、腹部、下顎收緊,兩手握拳于臉前(防御姿勢)保持呼吸,不屏氣。
3、避免和專業運動員一樣進行長時間的訓練,應交替進行大運動量和低運動量的練習。
4、側踢時不向前扭跨,否則會導致壓力集中膝部,繃腳尖會扭傷膝蓋,應向腳尖方扭跨以減輕膝蓋的側壓力 。
5、膝蓋不要僵直,以減輕緩沖。在轉身時要抬起膝蓋,否則會扭傷十字韌帶。
6、擊拳時要由肩部帶動出拳,在完成擊拳和踢腿動作前一直看著目標。
7、避免在擁擠的房間內進行后踢的動作。
8、避免肘、膝部用力過猛;避免進行閃躲或猛擊動作時由于動作過大而脫臼,避免扭轉動作。
9、若發生以下情況,可停止練習(腿部疲勞、人體局部出現痛狀不適、眩暈、心率過快等)。
健美鍛煉Q&A
Q:健美鍛煉是否受年齡限制?
A:健美運動是不受年齡和性別限制的,男女老少均可參加。各人可根據自己的身體條件和體力強弱來確定練習的動作內容,選擇鍛煉器具和增減運動量。
Q:健美鍛煉要多長時間才能見效?
A:見效的快慢因人而異。除了個人的身體條件不同以外,還與鍛煉的程度和掌握動作的準確性有關系。所以有的人見效快,有的人則見效較慢。一般情況下,大多數人經過2個月的鍛煉后,體力都會有明顯的增長。
Q:健美鍛煉時,肌肉酸痛是怎么回事?
A:剛開始鍛煉的人,鍛煉過后肌肉會感到酸痛,這是由于肌肉在運動時產生大量乳酸造成的,是正常的生理現象。
Q:某些已經比較粗壯的肌肉還要不要進行鍛煉?
A:如果某些部位的肌肉已比較粗壯,對這部分肌肉可以少練,但不應完全停止鍛煉。如果長期不鍛煉,這部分肌肉的素質就會逐漸衰退,彈性和力量也會下降,對其它部位的健美有消極作用。
Q:經常進行健美鍛煉會不會把肌肉練僵?
A:經常系統合理地進行健美鍛煉,不僅不會把肌肉練僵,而且還能對身體產生良好的作用,使肌肉發達。然而,如果違背科學的鍛煉規律,就會引起過度疲勞,機體創傷或有肌肉僵硬的感覺。因此,按要求去做,循序漸進,特別是鍛煉后,必須做放松活動,使肌肉得到完全放松。
真是的、把我帶走、還讓我空著肚子回來~~
“咕嚕嚕…!!!”哎呦、肚子好餓哦
潔倪看我這副表情、就知道肯定有啥米事情了
“曉熙、你怎么了嘛??!!”她很自然的吧手搭在我的肩膀上!
“我。。我…肚子餓了####”
“暈”她用手拍了一下她自己的頭、“好啦,我給你做飯去!”
“叮咚□□□叮咚□□□”
“我去開門”我好奇地走向門口
門一開,看見一個帥氣的小伙子
許久、我才反應過來,自己已經像個花癡一樣盯了他很久了
他那雙纖細的手在我的眼前晃啊晃的
“哦。。對不起。。你找誰?”
“請問、顧潔倪在嗎?”他終于露出了潔白的牙齒
“哦。她在,我幫你叫她~”我點點頭。“潔倪、有人找你哦!!”
“啊、、來了啦!!!!!!”她從廚房里匆匆忙忙 的跑出來
“潔倪、走吧…………”那個男生笑了、好可愛哦~
“嗯,好的,你等下!”她把我一手拽到旁邊
“喂、倪,實話說,他到底是誰?”
“好啦,我招——我男朋友”
“小樣、啥時交男朋友了!”
“嘿嘿……”
“好啦,晚飯我自己搞定、去吧,祝你們玩得愉快哦~”
“謝謝大小姐的恩賜啊!!”她走向門口,“嗯,我們走吧~”
她很自然的挽起男生的手臂++++幸福啊0。0
他有著橘色溫暖的笑容,穿著帶著檸檬香味氣的白色襯衣袖口總是那么干凈。好看的唇角總是掛著暖和人心的微笑,像是三月的微風,溫暖的即將把人給融化。
潔倪怎么能交到這么帥的男朋友呢!我暗暗心里想。
“想什么呢,小傻瓜!”不知誰敲了我一下頭
當我反應過來、回頭看時,失望落及——一人也沒有
送走一對甜蜜的情侶、我又一個人躺在床上
第二天,上課時。手機突然響了,偷偷拿出來一看,是一個陌生的手機發來的短消息
打開一看——
曉熙、現在肯定沒在專心聽課吧~!
咦,誰啊?除了我認識的、還有我不認識的………………
啊,我想起來了。潔倪的男朋友@@@@@
“啊…………”我突然從座位上蹦起來
我旁邊的彬嚇了一跳,就連我的舍友---潔倪,都禁不起這一跳
“哦哦哦。。老師、對不起!”
“好好聽課!”溫柔又善良的老師放過了我
---下課---
“喂、剛剛干嘛這么大驚小怪啊”
“嘿嘿、你看看!”我拿出手機給倪看那條短信,“倪,肯定是你告訴他我的手機的吧!”
“是呀,給你們建起好的橋梁!”她壞笑,“我先去約會咯~”
“好啦,去吧。我親愛的潔倪…………”
通過手機的短信,我慢慢了解 了那個男生:
姓名:鐘凱齊
年齡:19
專長:鋼琴、提琴
家世背景:有父有母,大少爺(不過看上去沒有斯脅有架勢)
性格:開朗大方
喜歡:聽潔倪唱歌給他聽
【關鍵詞】 甘草 活性成分 人乳腺癌BCAP 37細胞
Comparative Study on the Anti-proliferation and Apoptosis-inducing Effects of Active Components from Four Glycyrrhiza Species on Human Breast Cancer BCAP-37 Cell
Abstract:ObjectiveTo select the optimal glycyrrhiza species for medicinal utilization by comparing the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects of active components from four wild glycyrrhiza species in Xinjiang on human breast cancer BCAP37 cell. MethodsThe anti-proliferation effects of different samples on BCAP37 cell were measured by MTT assay. The cell apoptotic rate was detected by Hoechst 33258 stain.ResultsActive components of four Glycyrrhiza species inhibited the proliferation of BCAP37 cells and induced apoptosis significantly. What's more, there were significant interspecific and spatial variations in the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects. ConclusionThe optimal Glycyrrhiza species for anticancer utilization is Glycyrrhiza alalensis L.
Key words:Glycyrrhiza; Active Component; Human breast cancer BCAP37 Cell
甘草是我國十分重要的中藥材,素有“十方九草”的美譽。近年來,隨著對甘草開發利用的不斷深入,甘草被廣泛用于藥品、食品、保健品、化妝品等領域[1],甘草的市場需求量劇增。我國是世界上甘草出口大國,其中80%為野生甘草,僅有20%為栽培甘草。我國甘草儲量銳減,由建國初期200~250萬噸下降到50~70萬噸[2]。現存的野生甘草資源已無法滿足日益增長的市場需求,因此,人工栽培甘草勢在必行,野生優質甘草品種的篩選顯得尤為緊迫。甘草的品質高低最終要以其藥效來衡量,前人僅以活性成分含量為指標對甘草品質進行的研究是片面的[3~7]。
甘草中最重要的兩大類活性成分甘草酸類和甘草黃酮類化合物均具有抗炎、抗病毒及抗腫瘤之功效 [8,9],甘草的抗腫瘤活性尤其受到國內外學者的關注。乳腺癌是全球婦女最常見的惡性腫瘤。新近報告,美國女性乳腺癌的發病率已躍升為1/7,而在我國過去10年中,乳腺癌發病率也上升了27%,乳腺癌業已成為威脅婦女生命和健康的頭號殺手[10]。因此,本文研究了新疆的脹果甘草Glycyrrhiza inflata Batal.,光果甘草G. glabra L.,阿拉爾甘草G. alalensis L.和黃甘草G. eurycarpa L.等4種野生甘草的甘草水提物和甘草總黃酮對人乳腺癌BCAP37細胞的增殖抑制作用,以期篩選出藥效最佳的甘草栽培種類,為優質甘草的規模化人工種植奠定基礎,為甘草抗癌新藥物的研發提供科學依據。
1 器材
1.1 細胞株人乳腺癌BCAP37細胞株由中國科學院上海細胞生物學研究所細胞庫提供。
1.2 實驗樣品各樣品采樣地點及樣品名稱見表1。所有樣品經石河子大學李學禹先生鑒定為真品。表1 采樣地點及樣品名稱(略)
1.3 試劑與儀器
1.3.1 試劑RPMI1640培養基,Gibco公司;小牛血清,杭州四季青生物工程材料有限公司;HEPES,華美生物工程公司;胰蛋白酶,上海藍季科技發展有限公司;四噻唑藍(MTT)、二甲基亞砜(DMSO), Sigma公司;順鉑(DDP),江蘇豪森藥業股份有限公司;Hoechst33258染色試劑盒,碧云天生物技術研究所。
1.3.2 儀器CO2 培養箱,美國(Forma);Metertech ∑960自動酶標儀;熒光顯微鏡,OlympusBX51;超凈工作臺,上海凈化設備廠;血球記數板,上海醫用光學儀器廠。
2 方法
2.1 實驗樣品采集與處理采集株齡一致(根莖粗細相等)的4種甘草的根莖材料,立即放入80 ℃烘箱中烘干至恒重,然后用藥材粉碎機將其粉碎成粉末,過100目篩,備用。
2.2 甘草活性成分的制備
2.2.1 甘草水提物準確稱取1.0 g甘草根莖干粉加10 ml蒸餾水于室溫下放置48 h,12 000 r/min離心10 min,0.22 μm微孔濾膜過濾除菌,加樣前用細胞培養液根據文獻[11]將不同樣品配制成含甘草酸為1 200 μg/ml的受試樣品。
2.2.2 甘草總黃酮準確稱取1.0 g甘草根莖粉末,用250 ml無水乙醇加5滴濃鹽酸溶液為提取劑在索氏提取器中于95℃的水浴加熱條件下提取6 h,濃縮至30 ml,0.22 μm微孔濾膜過濾除菌,加樣前用細胞培養液根據文獻[11]將不同樣品配制成含總黃酮為50 μg/ml的受試樣品。
2.3 細胞培養BCAP-37細胞用含10%滅活小牛血清的RPMI1640培養基,加入NaHCO3 2 g/L,谷氨酰胺0.24 g/L,Hepes 2.4 g/L,青霉素100 U/ml,鏈霉素100 mg/ml,置于37℃, 5% CO2孵箱中培養。實驗用細胞均處于對數生長期,常規臺酚藍計數活細胞大于95%。
2.4 細胞增殖抑制實驗(MTT法)將處于對數生長期的BCAP37細胞用胰蛋白酶消化后, 制成2.0×105個/ml的細胞懸液,然后以每孔100 μl接種到96孔板上, 在37℃,5% CO2孵箱中培養24 h后更換培養液,實驗組加入不同的受試樣品100 μl,終濃度分別為:甘草水提物中甘草酸濃度為600 μg/ml,甘草總黃酮25 μg/ml,每一樣品均設8個平行孔,陽性對照組加入順鉑100 μl:終濃度50 μg/ml,空白對照組加入等體積的培養液。繼續培養24 h,48 h及72 h后,每孔加入20 μl MTT溶液(濃度為5 mg/ml),輕振培養板,放回培養箱內再孵育4 h后,吸盡上清液,每孔中加二甲基亞砜150 μl,振蕩器上振蕩10 min, 用酶標儀檢測各孔吸光度(OD值)測定波長λ=570 nm。抑制率計算公式為:抑制率(%)=〔(對照組OD值-實驗組OD值)/對照組OD值〕×100%。
2.5 細胞凋亡率實驗取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡20 min,0.9%NaCl溶液洗滌3次,再用細胞培養液洗滌1次。將蓋玻片置于六孔板內,種入細胞,培養過夜,使約為50%~80%滿。加入甘草水提物和甘草總黃酮,繼續培養48 h,吸盡培養液,加入0.5 ml固定液,固定10 min。去固定液,用0.9%NaCl洗兩次,3 min/次,吸盡液體,洗滌時用搖床。加入0.5 ml Hoechst33258染色液,染色5 min,也用搖床。用0.9%NaCl洗兩次,3 min/次。滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上貼有細胞的蓋玻片,盡量避免氣泡。熒光顯微鏡下(Ex350nm,Em460nm)隨機選取5個視野拍照后計數其凋亡細胞與正常細胞,凋亡率=〔凋亡細胞/(凋亡細胞+正常細胞)〕×100%。
2.6 統計學處理實驗所得所有數據均經SPSS12.0 軟件處理并對處理組間進行單因素方差分析,P
3 結果
甘草活性成分對BCAP37細胞的增殖抑制率(%)結果見表2。經Hoechst33258熒光染色,正常細胞核呈彌散均勻熒光,凋亡細胞的細胞核呈致密濃染或呈碎塊狀致密濃染(圖1~3)。甘草活性成分誘導BCAP37細胞凋亡的實驗結果見表3。表2 甘草活性成分對BCAP37細胞的增殖抑制率(略)表3 甘草活性成分誘導BCAP37細胞凋亡的作用(略)
4 討論
4.1 甘草活性成分對BCAP37細胞具有良好的增殖抑制作用,且存在最佳處理時間細胞抑制率結果表明,與陽性對照順鉑處理組相比較,甘草活性成分處理48 h和處理72 h對BCAP37細胞都具有良好的抑制作用。陽性對照順鉑隨著作用時間的增長抑制率顯著升高,表現為明顯的時效關系,而甘草活性成分對BCAP37細胞的抑制作用式樣則不同,甘草水提物:與處理24 h相比,處理48 h的所有樣品對細胞的抑制率顯著升高,而當處理時間增長至72 h時,僅阿拉爾甘草的抑制率繼續升高,53團光果甘草和阿拉爾市脹果甘草則與處理48 h無顯著差異,其余三個樣品的抑制作用均顯著降低;甘草總黃酮:處理48 h的所有總黃酮樣品對細胞的抑制率比處理24 h亦明顯上升,而對細胞處理72 h,僅阿拉爾市脹果甘草和焉耆縣黃甘草與處理48 h無顯著變化,其余樣品的抑制作用均顯著降低。因此,甘草活性成分對BCAP37細胞的最佳抑制作用時間為48 h。
4.2 甘草活性成分對BCAP37細胞的抑制作用存在顯著的種間與產地間差異由甘草水提物對細胞處理48 h的結果可得,阿拉爾市阿拉爾甘草的抑制率最高,其次為阿拉爾市光果甘草與阿拉爾市脹果甘草,焉耆縣黃甘草、焉耆縣脹果甘草與53團光果甘草最低;由甘草總黃酮對細胞處理48 h的結果可得,阿拉爾市光果甘草與阿拉爾市阿拉爾甘草的抑制作用最強,53團光果甘草與阿拉爾市脹果甘草次之,焉耆縣脹果甘草與焉耆縣黃甘草最弱。
不同產地的同種甘草對BCAP37細胞抑制作用均表現為,阿拉爾市光果甘草明顯高于53團光果甘草,阿拉爾市脹果甘草顯著高于焉耆縣脹果甘草。
實驗所有受試樣品在活性成分濃度相同(甘草水提物中甘草酸濃度均為600 μg/ml,甘草總黃酮濃度均為25 μg/ml)的條件下對BCAP37細胞的增殖抑制與誘導其凋亡的作用存在顯著的種間和產地間差異,這表明甘草的抗癌活性高低并不與甘草酸和甘草總黃酮的含量呈正相關,而很可能與其中抗癌活性較強的其他酸類化合物和某些黃酮單體有關。因此,前人僅以活性成分含量為指標進行的甘草品質研究是值得商榷的。
4.3 甘草活性成分能有效抑制BCAP37細胞的增殖與其誘導BCAP37細胞凋亡存在相關性與抑制細胞增殖的結果相比,不同樣品的甘草活性成分誘導細胞凋亡的差異基本一致,甘草水提物中誘導BCAP37細胞凋亡作用最強的為阿拉爾市脹果甘草與阿拉爾市阿拉爾甘草,甘草總黃酮中誘導BCAP37細胞凋亡效果最佳的為阿拉爾市光果甘草與阿拉爾市阿拉爾甘草。因此,甘草活性成分誘導BCAP37細胞凋亡是其顯著抑制BCAP37細胞增殖的重要途徑。
4.4 阿拉爾甘草和黃甘草亦為很好的藥用甘草資源據2000年版《中國藥典》記載,只有脹果甘草、烏拉甘草和光果甘草等3種甘草被列為藥用甘草[12]。本實驗的研究結果表明,阿拉爾市阿拉爾甘草對BCAP37細胞的增殖抑制作用與誘導凋亡作用均最佳;雖然焉耆縣黃甘草對BCAP37細胞的增殖抑制率最低,但是其水提物和總黃酮對BCAP37細胞的凋亡誘導作用均明顯高于陽性對照順鉑處理組。因此,阿拉爾甘草和黃甘草同樣具有良好的藥用價值。
總之,4種甘草的活性成分甘草水提物與甘草總黃酮對人乳腺癌BCAP37細胞具有顯著的增殖抑制與誘導凋亡的作用,且存在顯著的種間與產地間差異。本研究的結果對于甘草資源的合理利用與甘草抗癌新藥物的研發具有重要的理論意義和實際應用價值。建議用于規模化人工栽培的甘草物種當首選抗癌活性最佳的阿拉爾市阿拉爾甘草,其次為阿拉爾市光果甘草與阿拉爾市脹果甘草,同時要重視對焉耆縣黃甘草的開發與利用;在甘草酸類與甘草黃酮類成分進行甘草抗癌新藥物篩選時,應優先考慮甘草黃酮類成分。
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