螞蟻與大象
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螞蟻與大象范文第1篇
近來，圍繞著蘋果iPad在中國大陸的商標所有權糾紛受到了極大的關注。在私下暗斗了兩年之后。唯冠和蘋果的這出好戲終于從幕后轉為臺前。
唯冠PK蘋果的這出商業諜戰既有蘋果的克敵先機。又有唯冠的后發制人，更兼兩者均是IT界廝混多年的角色，你來我往，針鋒相對，雙方的奪“標”大戰日趨白熱化，一眾看客們也大呼過癮。
蘋果“雙翼”巧奪商標
此次iPad商標之爭要追溯到10年前。2000年唯冠國際旗下子公司深圳唯冠在中國申請iPad文字商標和文字圖形結合商標的商標專用權，2001年獲得核準注冊。之后將該商標使用在其自行研發的液晶顯示器等電子產品上。
唯冠國際系香港上市公司，在中國大陸、香港、中國臺灣、美國、英國等7個國家和地區設有子公司。2001年至2004年，唯冠國際旗下另一子公司臺灣唯冠在歐盟、韓國、墨西哥、新加坡等國家共獲得8個“iPad”相關注冊商標專用權。
唯冠國際、臺灣唯冠、深圳唯冠的實際控制人均為楊榮山。深圳唯冠曾經推出自己的iPad電腦。不過國內當時由于市場環境并不成熟，因此唯冠科技iPad電腦的銷售并不太好。
有消息顯示。在蘋果公司策劃其iPad平板電腦進入歐洲市場之時。發現iPad商標已經被唯冠注冊。在英國，蘋果公司曾以撤銷閑置不用商標等理由將唯冠告上法庭，但是最后該場官司以唯冠勝訴而告終。
據楊榮山最近在北京新聞會上介紹的信息。唯冠的iPad是公司1998年下半年開始研發的一款產品。全名為Internet PersonaI Acess Device，定位于一款網絡終端設備，是唯冠iFamlly系列產品之一，這一系列產品唯冠曾投入超3000萬美元開發。
楊榮山介紹。在本次糾紛發生前。雙方2003年就結下了“梁子”。當年，蘋果在歐洲注冊iPod商標時，曾因與唯冠iPad的商標相似，而發生訴訟。“唯冠花了大量精力阻擊蘋果。但最后選擇放棄”。這之后，才是目前紛紛擾擾的iPad商標案。
2009年。蘋果公司律師在英國設立了IP申請發展有限公司，并與臺灣唯冠公司聯系。當年12月23日，唯冠國際CEO兼主席楊榮山授權員工麥世宏簽署相關協議，將10個商標的全部權益轉讓給英國口公司，其中包括中國內地的商標轉讓協議。協議簽署之后，英國IP公司向中國臺灣唯冠公司支付了3.5萬英鎊購買所有的iPad商標，然后英國IP公司以10美元(也有稱是10英鎊)的價格，將iPad商標的所有權益轉讓給了蘋果。
對于此樁交易，楊榮山2月17日稱，“當時蘋果那個小公司來和我們談判時，只是表示因為該公司的名字縮寫是iPad才要買，而且承諾其業務不會和臺灣唯冠競爭。這樣的行為，蘋果有欺詐的嫌疑。”唯冠“后手”反戈一擊
2010年1月27日，在美國舊金山芳草地藝術中心所舉行的蘋果公司新聞會上，iPad正式并由此開始引導“平板電腦”的發展潮流。
原本奇貨可居的iPad全球商標以3.5萬英鎊出售，面對如此暗虧，唯冠對此有何感想不得而知。但是令蘋果沒有想到的是，不知道出于有意還是無意，唯冠在這次普通的商業交易中留了“后手”。
深圳唯冠認為，深圳唯冠和臺北唯冠雖同屬香港唯冠國際的子公司，但二者并不是隸屬關系，是兩個完全不同的民事主體，因此盡管蘋果公司和臺灣唯冠公司簽署了合同，購買了iPad商標專用權，但這一合同對深圳唯冠公司并不具有約束力。
針對愈演愈烈的商標權糾紛，蘋果在2月14日晚間了一份簡短聲明：“多年前，我們購買了唯冠在全球十個不同國家的iPad商標權。唯冠拒絕承認和履行涉及中國部分的協議。香港法院已支持蘋果，我們在中國內地的訴訟仍在進行中。”
站在蘋果公司的角度來看，在IP公司與臺灣唯冠簽署的協議中，的確包括一份《中國商標轉讓協議》，其中約定臺灣唯冠以1英鎊的對價將相關商標轉讓給口公司。
但從技術細節分析，按照中國法律，“商標權的轉讓以登記為要件，不經國家工商主管部門的登記，權利并不發生轉移”，這意味著中國內地的Wad商標權如果沒有經過主管部門批準，是無法被認定已經從深圳唯冠轉讓至蘋果公司的。
深圳唯冠正是抓住了這一點，堅稱中國內地的iPad商標權并沒有被轉讓。而深圳唯冠的現狀，決定了該公司必須抓住這最后一根救命稻草，目前該公司流動負債凈額達28.7億元，38億元貸款逾期未償還，另對中國銀行、民生銀行等8家銀行的負債大約為1.8億美元。
在本次iPad商標糾紛中，對于蘋果最為不利的就是蘋果拿不出和深圳唯冠的商標轉讓合同。從蘋果公司利用殼公司購買iPad商標的過程來看，蘋果在知識產權方面還是花了很多心思的，但為何在內地的商標轉讓過程中出現了如此低級的失誤?對此蘋果公司的解釋是，當時商標權轉讓請的是英國律師，不懂中文，所以對中國法律的理解有差異，但這樣的辯解太過牽強。
唯冠PK蘋果，在很多人看來，有如螞蟻和大象的較量。然而，幾經交手之后，蘋果如今已經焦頭爛額，有苦難言。
事實上，唯冠并不是一家普通的公司。唯冠公司成立于1989年，是全球四大顯示器生產商之一，產品銷往50余個國家。截至2006年10月，唯冠公司在全球約有11000名員工。全球11個國家和地區擁有17處分公司，在全球5個國家共計擁有7處生產基地。
可以說，唯冠也曾經是IT界的風云人物，只不過后來突如其來的全球金融危機，導致唯冠國際最大客戶寶麗來破產，欠款無法收回，公司經營由盛轉衰。2010年8月，唯冠破產。但是，曾經的業界經歷足以令唯冠在應對與蘋果的商標糾紛時進遇自如。
按照慣例來講，通常這類涉及商標權的官司都是可以用錢解決的問題。例如iPhone正式進入中國之前，漢王科技搶先在電話、手機等商品領域注冊了i-phone商標。最后雙方經過協商，漢王公司將“i-phone”商標賣給了蘋果。
實際上蘋果公司不是沒有嘗試過與深圳唯冠達成和解，據深圳唯冠的律師謝湘輝透露，2009年蘋果公司曾與深圳唯冠接觸，協商iPM商標的使用權問題，當時深圳唯冠的開價是幾百萬美元。但蘋果公司沒有同意，而是一邊打官司一邊賣iPad。
螞蟻與大象范文第2篇
隨著城市化發展的推進，越來越多公共場合廁所安裝上了馬桶，本來是希望給人們帶來更舒適的如廁享受，卻因為衛生問題和使用習慣使得大家對公廁的馬桶聞之色變。公廁里裝馬桶，到底對大家來說是享受還是折磨？從趨勢來看，公廁安裝馬桶成為潮流，但從使用體驗來說，公廁到底應不應該安裝馬桶？
隨著城市化發展的推進，越來越多公共場合廁所安裝上了馬桶，本來是希望給人們帶來更舒適的如廁享受，卻因為衛生問題和使用習慣使得大家對公廁的馬桶聞之色變。公廁里裝馬桶，到底對大家來說是享受還是折磨？從趨勢來看，公廁安裝馬桶成為潮流，但從使用體驗來說，公廁到底應不應該安裝馬桶？
正方觀點：應裝馬桶
外觀時尚符合城市發展需求
現代的抽水馬桶是由英國人發明的，后來才傳入亞洲國家，目前馬桶在歐美、日韓等地普及率非常高。自發明那天馬桶就被稱為偉大的發明，它解決了人自身吃喝拉撒的進出問題，它的出現也人類讓如廁快速進入文明時代。評價一個地方的文明程度，只要看廁所就可以了。隨著現代化的進步，馬桶以其舒適、美觀、大方、干凈、衛生等眾多優勢擊敗傳統蹲便器，成為現代文明的代表。
目前眾多高檔場合如星級酒店、高檔寫字樓、高級食市等地都會按照建筑定位安裝馬桶，以求符合建筑整體形象。座便器的外形時尚美觀，可以和多種風格的裝修搭配，適合愛美的年輕人。而事實上，蹲廁從已經難以適應現在如廁享受，而且相比馬桶也會有比較低級的印象。
使用舒適 適合各類人群需求
就使用體驗來說，馬桶明顯比蹲廁更為舒適，也更為人性化。特別對行動不便的老人、肥胖者、孕婦或者殘疾人來說，下蹲如廁非常困難，而公廁安裝馬桶，可以有效滿足各個群體的需求，減少了因如廁時間太長雙腳發麻、壓迫靜脈等情況出現，讓如廁成為一種享受。另外，馬桶配置的蓋板也能讓馬桶內部的排泄物與外間隔離，讓空間更為干凈衛生。
安裝便捷無需建臺階
由于座便器與蹲便器的構造差異，蹲便器排水管以及主要構造都是彎曲向下，而一般的建筑大廈衛生間都沒有沉箱，安裝蹲廁必須安裝15～20厘米的臺階。若公廁安裝馬桶則無此麻煩，直接鋪好排水管道就可以安裝，對工程方施工而言更加方便快捷。而且，專家分析目前沖水馬桶在沖水力度方面要比蹲便器好，長期使用也不容易造成管道的阻塞。
新聞連線——
擔心旅館的馬桶不衛生，顧客雙腳踩在馬桶上如廁，結果馬桶翻倒摔破，劃傷顧客。昨日，受傷顧客張女士反映：旅館該不該承擔她的醫藥費？
反方觀點：不應裝馬桶
各種親密接觸 容易傳播疾病
座便器最大的缺點就是不衛生，特別是在公共場所使用座便器讓“人心惶惶”。馬桶上容易附細菌、寄生蟲等，很容易造成交叉感染。
廣東省中醫院皮膚科主任醫師遲鳳好認為通過馬桶傳染疾病的機會確實存在的，一般人的臀部或大腿受到細菌感染，接觸馬桶，然后另一個人緊接著也接觸同一個馬桶，這樣傳染的幾率是比較大的。目前國內公共馬桶普遍并沒有馬桶紙墊，女孩如廁時更需要注意衛生，避免感染疾病。
習慣難改 蹲馬桶導致公廁更臟亂
從使用習慣上來說，中國人習慣蹲廁，這是全世界都知道的。越來越多的公廁安裝馬桶，不一定能表現城市的現代化程度，反而因為使用不習慣而凸顯出更多的陋習。騰訊網亞太家居調查顯示，90%以上的人都不愿意直接與公廁的馬桶親密接觸，一半以上的人嘗試過蹲在馬桶上面如廁。蹲馬桶直接造成馬桶圈臟得慘不忍睹，而且也極容易將贓物弄到馬桶外，而往往這些公共場合使用頻率太高無法頻繁清潔，于是安裝馬桶的公廁成為臟亂差的代表。由于使用習慣無法短期改變，市民寧愿排隊等候蹲廁都不愿意使用馬桶，公廁安裝馬桶就是勞民傷財不好看也不好用的“面子工程”。
價格昂貴難清潔 后期保養成本高
螞蟻與大象范文第3篇
【摘要】 ：目的 圍繞海馬結構的形態學研究定志小丸的抗抑郁機制。方法 40只雌性大鼠分為對照組、抑郁癥模型組(模型組)、蒸餾水組(DW組)和定志小丸組(中藥組)，Open field法檢測行為學得分，ELISA法檢測血清皮質醇和雌二醇(E2)含量，HE染色和電鏡技術觀察海馬CA3區神經元形態，免疫組化技術檢測齒狀回神經干細胞(NSC)增殖。結果 與對照組比較，模型組和DW組行為學得分及血清E2含量顯著下降，皮質醇水平升高和NSC增殖明顯降低，海馬CA3區神經元損傷明顯；中藥組行為學得分和血清E2含量無明顯變化，皮質醇明顯減少，NSC增殖顯著增加，海馬CA3區神經元基本正常。結論 定志小丸能夠保護海馬結構，這可能是其抗抑郁機制之一。
【關鍵詞】 抑郁癥 定志小丸 雌二醇 神經干細胞 皮質醇 大鼠
Abstract：Objective To study the anti-depression mechanism of Dingzhixiaowan concerning on histology of hippocampal formation. Methods 40 female rats were pided into control， depression model group (model group)， distilled water group (DW group) and Dingzhixiaowan group (Chinese herb group). Behavior points were measured by open field method. Serum concentrations of cortisol and estradiol (E2) were checked with ELISA. HE staining and electron microscopy were applied to observe the histology of neurons in hippocampal formation. Immunohistochemistry method was employed to detect Nestin expression. Results Compared with the control， behavior points， serum E2 level and Nestin expression decreased obviously and serum cortisol level increased markedly， CA3 neurons were seriously damaged in model and DW groups. While behavior points， serum E2 level did not change， Nestin expression increased obviously and serum cortisol level decreased markedly， CA3 neurons were basically normal in Chinese herb groups. Conclusion Dingzhixiaowan can protect hippocampal formation， which might be one of the anti-depression mechnisms.
Key words：depression；Dingzhixiaowan；estradiol；neural stem cell；cortisol；rat
目前認為，慢性應激刺激造成的海馬結構損傷是抑郁癥發病的主要原因。對海馬結構來說，糖皮質激素是損傷激素，雌激素為保護激素，而女性的雌激素水平變化較大，其保護作用時常減弱，這可能是女性抑郁癥發病率較高的原因。本研究以此為出發點，研究定志小丸的抗抑郁機制。
1 材料與方法
1.1 動物及分組
成年Wistar雌性大鼠(230±20)g，遼寧中醫藥大學動物實驗中心提供，合格證號：SCXK(遼)2004-0018。適應性飼養1周后，選擇體重和行為學得分相近的40只大鼠，隨機分為對照組、模型組、蒸餾水組(DW組)和定志小丸組(中藥組)，每組10只。對照組每籠5只飼養，其余3組每籠1只飼養。
1.2 抑郁癥模型的建立
除對照組外，其余3組動物均接受慢性應激刺激，復制慢性不可預見性應激模型。其方法是：在21 d內施加電擊足底(36 V交流電，5 min)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、搖晃(1 min)、夾尾(1 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)等刺激，每種刺激3～4次。
1.3 給藥
對照組不給藥；模型組只施加灌胃動作；DW組灌服1 mL蒸餾水；中藥組灌服定志小丸。定志小丸為人參、茯苓、遠志、石菖蒲的標準提取物(購于安徽宣城百草生物有限公司，提純比例為5∶1)，劑量分別是10、10、6、6 g，溶于適量水中，加熱后濃縮為1 kg/L。按成人用量折算成灌胃劑量[1 mL/100(g? d)]，于刺激前1 h灌服。
1.4 大鼠行為學檢測
采用Open field法檢測，以3 min內大鼠水平穿越方格數作為水平活動得分，以前肢抬起次數為垂直活動得分。檢測過程中保證時間、光照、溫度及環境噪音的一致性。檢測由3人同時完成，1人負責計時，1人負責觀察大鼠的水平活動，1人負責計數垂直活動。正式檢測前，3人首先熟悉檢測標準，并進行多次訓練，盡量減少人為誤差。
1.5 血清皮質醇和雌二醇檢測
在第22天，大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯(0.4 mL/100 g)麻醉后，腹主動脈取血，離心后取血清，凍存備用。于總醫院內分泌實驗室采用ELISA方法檢測血清皮質醇和雌二醇(E2)含量。
1.6 海馬組織學觀察
將取血后的大鼠用150 mL生理鹽水經主動脈快速沖洗，取一側海馬行常規HE染色，另一側于掃描電鏡下觀察形態學變化。
1.7 齒狀回神經干細胞(NSC)增殖檢測
采用Nestin免疫組化方法，取經生理鹽水快速沖洗后的海馬，4%多聚甲醛固定4～6 h，30%蔗糖溶液沉底。冰凍連續切片，片厚25 μm，隔4片取1片。將切片置含新鮮0.5% H2O2的純甲醇中30 min；0.1% Triton溶液中30 min；正常山羊血清60 min；兔抗鼠Nestin一抗(1∶2000，Sigma)，25 ℃孵育1 h，4 ℃過夜；生物素化山羊抗兔IgG(博士德二抗試劑盒)，室溫下60 min；SABC復合物，室溫60 min；DAB顯色(博士德)。染色對照：用正常山羊血清和PBS代替Nestin一抗作孵育，其余步驟同上。利用BI-2000醫學圖像分析系統，計數陽性細胞數。
1.8 統計學方法
實驗數據以x±s表示，采用SPSS11.5進行統計處理。
2 結果
2.1 各組大鼠海馬CA3區神經元的形態學變化
光鏡下可見，對照組CA3區有大量致密錐體細胞，排列整齊，細胞完整，邊緣清晰，死亡細胞較少；模型組和DW組可見細胞層次減少、紊亂、中斷，大量細胞壞死；中藥組神經元形態與對照組基本接近。電鏡下可見，對照組細胞器豐富，輪廓清晰，細胞核呈圓形，核膜清晰光滑完整，核染色質分布均勻；模型組和DW組細胞器減少，線粒體空泡化，細胞核變小，不規則，且核膜增厚，核周電子密度降低；中藥組與對照組基本相同。
2.2 各組大鼠齒狀回Nestin表達
鏡下可見Nestin免疫陽性反應產物呈棕黃色，環形分布于核膜周圍。對照組鏡下可見較多的棕黃色反應物，邊緣相對清晰，細胞大小相近；模型組和DW組棕黃色反應物較少，邊緣不清，細胞大小不一致；中藥組鏡下可見大量棕黃色反應物，邊緣清晰，細胞大小一致。各組Nestin陽性細胞數見表1。表1 各組大鼠Nestin陽性細胞數(略)注：與對照組比較，*P
2.3 各組大鼠行為學得分
(見表2)表2 各組大鼠的行為學得分(略)注：與本組第0天比較，P
2.4 各組大鼠血清皮質醇和雌二醇含量
(見表3)表3 各組大鼠血清皮質醇和雌二醇含量變化(略)
3 討論
海馬結構具有調節內臟功能、情緒和行為的多種作用，主要由海馬和齒狀回組成。齒狀回存在NSC，能夠增殖、遷移至海馬CA3區，分化形成新的神經細胞。因為抑制齒狀回NSC增殖后，許多抗抑郁藥物會失效，所以，海馬CA3與齒狀回的關系在抑郁癥發病中的作用逐漸受到重視。抑郁癥的發病機制目前認為是慢性應激刺激引起腎上腺皮質過度分泌糖皮質激素，繼而損傷海馬神經元。本實驗也觀察到同樣現象。由于高水平的糖皮質激素還能抑制齒狀回NSC增殖，從而降低了海馬結構的自我修復能力[1]，繼而導致海馬結構出現不可逆損傷。因此，抑郁癥的根治應圍繞保護海馬成熟神經元和齒狀回NSC兩方面進行。
定志小丸由遠志、石菖蒲、茯苓和人參組成，具有祛痰開竅、健脾益智作用，主治心氣不定、五臟不足、憂悲不樂等。實驗結果表明，該方能夠對抗慢性應激對大鼠行為學的影響，具有抗抑郁作用，這可能與其保護海馬CA3區神經元和齒狀回NSC增殖有關。盡管定志小丸不能抑制皮質醇的過度分泌，但其維持E2水平的作用可能更為重要，因此，該方可能是替代雌激素的一種選擇，成為治療女性抑郁癥的備選藥物。
螞蟻與大象范文第4篇
關鍵詞： 運動；慢性應激抑郁模型；神經營養
中圖分類號： G804.5文獻標識碼： A文章編 號： 1007-3612(2011)05-0043-05
Effect of Exercise on Neurotrophic Signal Pathway in ChronicaleUnpredictablly Stressed Rats
WEI Hongwen1, JIAO Wei1, ZHANG Youzhi2, ZHANG Liming 2, CHEN Hongxia2, XUE Rui2
(1.Beijing SportUniversity，Beijing 100084，China;2Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Science，B eijing 100850，China)
Abstract:Objective: To investigate the effect of exercise on neurotrophic signal pathwayin the chronically unpredictable stress (CUS) animal model of depression, and di scuss partial antidepressant mechanism of exercise.Methods: 56 male SD rats wer e divided into seven groups: Control, CUS, Fluoxetine (Flu), low intensity tread mill running (LIR), moderate intensity treadmill running (MIR), Flu+LIR and Flu+ MIR.After four weeks of CU S, hippocampal brain-derived neurotrophic factor (BDNF), extracellular signal re gulated kinase (ERK1/2) and phosphor-extracellular signal regulated kinase(pERK 1/2), and neuropeptide VGF expression were tested using western-blotResults:1) CUS down-regulated significantly the expression of pERK, BDNF and VGF in hip pocampusFlu, MIR, Flu+LIR and Flu+MIR could improve these changes obviouslyFlu+LIR up-reguated the expression of hippocampal pERK and BDNF but did notaffect the expression of hippocampal VGF markedly.2) The up-regulaed effect o f MIR and Flu+LIR on the expression of hippocampal pERK was better than that ofLIRThe up-regulated effect of Flu+MIR on the expression of hippocampal BDNF w as better than that of Flu or MIR respectively; Flu+LIR was better than LIR.Co nclusions: The antidepressant mechanisms of exercise may be related to following : exercise can antagonize the chronic stress-induced hipocampal impairment via:1) up-regalting the expression of hippocampal BDNF, pERK and VGF which were rel ated to BDNF’s signal pathway may be underlying the neurotrophic and neuroplast ic effects of exercise;2) The neurotrophic effect of fluoxetine can be enhance d further by exercise
Key words:depression; exercise; neurotrophy
目前研究認為，抑郁癥的發生不僅與腦內神經遞質及其受體有關，還涉及受體后信號傳 導系統及基因轉錄過程，從而引起特定腦區神經營養障礙，神經可塑性下降等改變［1 ］。神經營養因子及其信號傳導通路可能參與并介導了抗抑郁劑的作用［2］。
適量運動可以通過保護神經元［3］、促進神經再生［4］和增加海馬腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的表達［5 ］來促進腦可塑性。本課 題組前期對大鼠慢性應激抑郁模型施加運動干預，行為學評價結果顯示運動對慢性應激抑 郁模型具有抗抑郁樣作用［6］。本實驗旨在前期研究的基礎上，從神經營養通路重 要分子表達水平出發，探討運動抗抑郁作用可能存在的機制。
1 材料與方法
1.1 實驗動物 SPF級雄性SD大鼠56只，購入時體重150～160 g。購自維通利華實驗動物有限公司，飼養 于軍事醫學科學院動物實驗中心。大鼠每籠4只群養，自由攝食飲水，室溫22～24℃，濕度5 0%±10%，自然晝夜節律光照。
1.2 主要儀器設備 DSPT-202動物跑臺(杭州段氏，中國)，大鼠穿梭箱反應儀(Med Associate，美國)，噪 聲儀(中國)，恒溫振蕩器(江蘇太倉實驗設備廠，中國)，Model 4001P穩壓穩流電泳儀(LifeTechnologies，美國)，DYCZ-24D垂直板電泳槽，DYCP-40C型石墨半干轉移槽，WD-9405型 水平搖床(北京六一儀器廠，中國)，超聲波細胞破碎儀(Sonic，美國)，Olympus BX-50普通 生物學顯微鏡(Olympus，日本)，A20005電子天平(Sartrious，德國)，UV160-A型紫外分光 光度計(島津，日本)，Microprocessor PH Meter(HANNA PH123)。
1.3 主要試劑 小鼠抗MAP-2C多克隆抗體(Neomarker公司)、兔抗ERK多克隆抗體、小鼠抗pERK單克隆 抗體、兔抗BDNF多克隆抗體、羊抗VGF多克隆抗體(Santa Cruz公司)、辣根酶標記山羊抗兔I gG、辣根酶標記山羊抗小鼠IgG、辣根酶標記兔抗山羊IgG(北京中杉金橋生物技術有限公司) ，脫脂奶粉、硝酸纖維素膜(北京普利萊基因技術有限公司)，SuperECL底物化學發光檢測試 劑(北京蓋寧生物科技有限公司)，預染蛋白分子量標準(Fermantas SM0671)(北京百匯中源 生物科技有限公司)，醫用X射線膠片(Kodak公司)，其它化學試劑均為分析純。
1.4 實驗設計
1.4.1 大鼠慢性應激模型的建立 參考文獻方法［7,8］，并盡量使應激程序符合不可預知性的特點，連續4周每天下 午時 間采用1～2種給予大鼠如下刺激：禁食24 h、禁水24 h、潮濕飼養(200 mL水加到150 g墊料 )+孤養24 h、鼠籠45°傾斜24 h、夾尾1 min、電擊(0.8 mA，電擊15次/min，共30 min)、 通宵照明12 h、白噪音(110分貝)1 h、10℃冰水游泳6 min、制動1～2 h。
動物按照體重均衡分為7組，每組8只。各組之間體重沒有顯著性差異(P>0.05)。各組 具體情況見表1。
1.4.2 藥物干預 Flu組、Flu+LIR組、Flu+MIR組每次應激前1 h給予氟西汀(Fluoxetine Hydrochloride， 批號000530，白色粉末，純度>99%，由常州第四制藥廠惠贈)，灌胃給藥(10 mg/kg)，給藥 體積2 mL/kg，1次/d。其余組大鼠灌胃給予相應體積的生理鹽水。
1.4.3 跑臺訓練每天上午8:30-12:30進行跑臺運動。具體訓 練負荷安排見表2。
1.4.4 蛋白免疫印跡分析 大鼠海馬組織總蛋白提取按Western細胞裂解液說明書操作。考馬斯亮藍法測定蛋白濃 度，加入6×上樣緩沖液，沸水浴變性5 min，-70℃凍存備用。40 組織總蛋白在10%(測 定 MAP-2C、VGF)、12%(測定ERK1/2和pERK1/2)、15%(測定BDNF)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠中電泳 分離。而后將凝膠半干式電轉印至硝酸纖維素膜(NC膜)。取出NC膜，浸于含5%脫脂奶粉的Tr is緩沖生理鹽水(Tris buffered saline，TBS)中室溫輕搖封閉1 h，用含0.05%的吐溫-20 ℃的TBS(TBS-T)緩沖液漂洗干凈，浸入TBS-稀釋的一抗(兔抗人BDNF抗體1：1 000；山羊抗 人-actin抗體1：2 000；小鼠抗人pERK抗體1：1 000；兔抗人ERK抗體1：1 000)， 4℃孵育 15 h。用TBS-T漂洗NC膜3次，在TBS-T稀釋的HRP標記的二抗溶液(山羊抗兔IgG1∶2 000；兔 抗山羊IgG 1：2 000；山羊抗小鼠IgG 1：2 000)中室溫孵浴1 h。NC膜用TBS-T緩沖液 漂洗2次，再用TBS漂洗1次，用ECL檢測試劑盒顯色，曝光、顯影和定影。
信號條帶經數碼相機拍照后，用NIH Image J圖像分析軟件進行定量分析。以各組目的 蛋白條帶光密度值對內參蛋白光密度值計算相對比值，再以對照組比值作為100％，其余各 組與之相比再次計算比值作為該組目的蛋白相對光密度值。
1.5 統計學分析 所有數據以“X ±S”表示。統計分析用Windows SAS 6.12軟件完成。Control 與CUS組之 間的比較，方差齊性的數據采用T檢驗，方差非齊性的數據采用Mann-Whitney Rank SumTest。其余各組之間的分析，進行two-way ANOVA檢驗。顯著性水平P
2 結 果
2.1 對慢性應激大鼠海馬ERK蛋白表達水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬ERK表達沒有顯著性變化(P>0.05)；Flu、LIR、MIR、Flu +LIR、Flu+MIR干預均沒有顯著影響CUS大鼠海馬ERK的表達(P>0.05)(圖1)。 2.2 對慢性應激大鼠海馬pERK蛋白表達水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬pERK表達顯著減少(P
2.3 對慢性應激大鼠海馬BDNF蛋白表達水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬BDNF表達顯著減少(P
圖1 慢性應激及氟西汀、運動伴隨干預對大鼠海馬ERK表達的影響
A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達水平光密度分析
圖2 慢性應激及氟西汀、運動伴隨干預對大鼠海馬pERK表達的影響
A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達水平光密度分析2.4 對慢性應激大鼠海馬VGF蛋白表達水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬VGF表達顯著減少(P
3 討 論
腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是神經營養素家族 中的主要成員之一，BDNF與其特異性受體結合后，激活受體內在的酪氨酸激酶，繼而啟動細 胞內多條信號通路。MEK-ERK-CREB通路是介導BDNF活性的重要途徑［9］，抑郁癥存 在該信號 通路的功能失調，該失調與BDNF的下調相關［10］。上調BDNF系統揭示了抗抑郁 治療的新機制，選擇性神經營養因子的激活成為抗抑郁治療的新靶點［11］。
圖3 慢性應激及氟西汀、運動伴隨干預對大鼠海馬BDNF蛋白表達水平的影響
A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達水平光密度分析
圖4 慢性應激及氟西汀、運動伴隨干預對大鼠海馬VGF蛋白表達水平的影響
A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達水平光密度分析
應激、抑郁癥下調海馬BDNF表達，而抗抑郁劑可以逆轉這些變化。慢性應激抑郁動物模 型其腦內BDNF水平下降［12］；將BDNF注入大鼠海馬齒狀回可以在獲得性無助(learn ed helpl essness)和強迫游泳(forced swimming test)模型上產生抗抑郁樣作用［13］；慢性 應激抑郁 模型所出現的海馬神經元萎縮和細胞丟失是由于海馬BDNF表達下降導致的［14］。抑 郁癥患者 與正常對照者相比其血清BDNF降低；抗抑郁治療能提高抑郁癥患者血清BDNF水平，改善抑郁 癥患者的抑郁狀態、降低漢密爾頓抑郁量表得分［15］。細胞外信號調節蛋白激 酶(extra cellular signal-regulated protein kinase，ERK)功能及其通路在抑郁癥的發病和治療過 程都起著重要作用。抑郁病自殺者額葉皮層和海馬ERK活性明顯下降；束縛應激導致大鼠額 葉皮層磷酸化細胞外信號調節激酶(phosphorylation extracellular signal-regulatedk inase，pERK)顯著減少，抑郁模型大鼠額葉皮層和海馬pERK水平減少［14］。抗抑郁 劑可以增強ERK1/ERK2的活性［8］。
VGF神經肽，首先是作為被神經生長因子(nerve growth factor，NGF)在PC12細胞中誘 導的基因而引起注意，它具有調節能量平衡、參與調解循環血葡萄糖水平及機體胰島素敏感 性等功能［16］。VGF是一種在腦內表達的神經營養因子，在神經元分化和存活中起 著重要作 用，其功能可能與海馬神經元的突觸功能調節有關［17］。VGF可能涉及情感性疾病 的發病機 制，VGF可能具有抗抑郁作用；慢性給予抗抑郁劑丙咪嗪、電驚厥療法均能夠增加海馬VGF表 達［18］。VGF可能作為BDNF的下游基因，通過神經可塑性方式，加強海馬區神經 元再生來 發揮其抗抑郁作用；VGF基因的下調參與了抑郁癥的發病機制，而增加腦中VGF表達水平，則 出現抗抑郁樣效應［19,20］。
本研究結果表明，CUS顯著下調海馬BDNF表達，CUS伴隨給予氟西汀，進行中、小強度跑 臺訓練，以及氟西汀分別聯合中、小強度跑臺訓練，均能夠逆轉CUS所致的海馬BDNF表達的 下調。CUS及氟西汀、運動伴隨干預、氟西汀聯合運動干預，對海馬ERK表達均沒有顯著性影 響；而CUS顯著下調海馬pERK表達，CUS伴隨給予氟西汀，中、小強度跑臺訓練，氟西汀分別 聯合中、小強度跑臺訓練，均能夠逆轉CUS所致的海馬pERK表達的下調。
目前運動對BDNF影響的絕大多數研究采用動物自主、隨意的轉輪跑方式。動物實驗表明 ，中、小強度跑臺訓練、自愿轉輪跑均能夠上調正常大鼠海馬BDNF表達［5］。 轉輪跑 也逆轉慢性應激引起的大鼠海馬BDNF mRNA 表達的降低［21］。但是，轉輪跑這種運 動方式只 能用距離表達運動量，無法進行運動強度的評估，這就局限了該方法及其研究結果的進一步 推廣運用。運動強度是運動訓練的核心因素，跑臺運動(treadmill exercise)可通過調節速 度改變運動強度。于是近年來，利用動物跑臺研究運動負荷與BDNF表達的研究逐漸開展起來 。研究結果一致表明，小強度的跑臺運動對增加大腦BDNF表達的效果優于中等強度和大強度 ［22-24］。BDNF表達的上調被認為與神經可塑性有關，而神經可塑性受損是抑郁癥 的發病 機制之一，所以，運動誘導的BDNF表達的上調促進了中樞神經營養調節功能，這可能也是運 動抗抑郁作用的機制之一。
本研究結果還表明，對pERK、BDNF表達的上調，中等強度跑臺訓練優于小強度訓練，與 文獻［23,24］報道不一致。有研究表明［22］，跑臺運動對海馬BDNF mRNA的 表達與運動強度有 關，小強度的跑臺運動對BDNF mRNA表達的促進作用最為顯著，而大強度的跑臺運動則對海 馬BDNF mRNA 的表達沒有產生促進作用。分析認為是由于他們的研究對象是正常大鼠，訓練 周期較短(7 d)等因素有關。本研究以慢性應激抑郁模型為對象，慢性應激伴隨進行規律性 跑臺訓練，隨著實驗的進行，大鼠對運動逐漸適應，運動能力得以提高，實驗初期的中等強 度負荷逐漸變為小強度負荷。
本研究還顯示，氟西汀聯合運動干預對于pERK、BDNF的上調，顯著優于氟西汀或運動的 單一干預。氟西汀能夠有效地抑制神經元從突觸間隙攝取5-HT，增加間隙中可供實際利用的 5-HT，可有效保護慢性應激所致的ERK-CREB信號通路的損傷［25］，從而改善情感狀 態，治療 抑郁性精神障礙。適量運動也顯著增加腦區單胺類遞質的水平［26,27］。所以，運 動與氟西 汀的聯合干預可能進一步提高了腦區5-HT水平，并同時增強了NE、5-HT介導的BDNF表達上調 的信號通路，和/或保護慢性應激所致的ERK相關信號通路損傷，從而進一步增加了BDNF的表 達、提高了ERK相關信號通路的活性，最終表現為運動與氟西汀的聯合干預上調BDNF的表達 不僅優于單一的運動療法，也優于氟西汀的單獨治療。總之，規律性的運動通過增強pERK表 達來上調BDNF的表達，運動進一步強化了氟西汀的神經營養作用。
盡管研究顯示VGF可能參與抑郁癥的發病機制和抗抑郁應答反應，但目前缺乏慢性應激 抑郁模型VGF的變化、長期給予抗抑郁劑后VGF如何調節抗抑郁應答，以及VGF抗抑郁應答的 信號通路方面的研究。本研究首次觀察了慢性應激對海馬VGF表達的影響，以及運動和氟西 汀干預對CUS抑郁模型大鼠海馬VGF表達的影響，發現慢性應激顯著下調海馬VGF表達，慢性 應激伴隨給予氟西汀，中等強度跑臺訓練，氟西汀分別聯合中、小強度跑臺訓練，均能夠逆 轉慢性應激所致的海馬VGF表達的下調。
VGF是BDNF的靶基因［19］，而VGF既是MEK-ERK信號通路的上游調節劑，又是MEK-ERK 信號 通路的下游靶基因［20］。因此本研究的結果：慢性應激下調VGF、運動和氟西汀干 預上調VGF 的表達，我們認為與pERK-BDNF通路活性下降有關，而且pERK、BDNF、VGF三者之間存在相互 的影響，即：慢性應激下調了pERK和BDNF的表達，進而導致了VGF表達的下降，VGF的下調反 過來又影響pERK和BDNF的表達，形成一個類似于反饋的調節環路。運動、氟西汀均能夠上調 pERK-BDNF通路，進而增加了VGF的表達；上調了的VGF又促進pERK-BDNF通路的表達。
4 結 論
1)運動可以上調慢性應激大鼠海馬BDNF及其相關的神經營養通路重要信號分子pERK和VGF 的表達。這有利于保護應激狀態下海馬結構和功能的進一步被破壞，促進神經營養和神經可 塑性。
2)運動能夠增強氟西汀的神經營養作用。
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螞蟻與大象范文第5篇
【摘要】 探討柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP的影響。［方法］健康雄性SD大鼠84只，隨機分為正常組、模型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調氣血組、養心脾組、馬普替林組。參照Katz刺激方法制備慢性輕度不可預見性應激(CUMS)抑郁模型。采用放射免疫法測血清ACTH、COR和大鼠海馬cAMP含量。［結果］與正常組相比，模型組大鼠血清ACTH和COR水平明顯升高、海馬cAMP含量明顯降低。同模型組相比，柴郁溫膽湯組及調氣血組能明顯降低ACTH濃度(P
【關鍵詞】 柴郁溫膽湯；組分；抑郁癥；HPA軸；ACTH；COR；cAMP
UniversityAbstract:［Objective］ To explore the effects of the traditional Chinese drugs Chaiyuwendantang (CYWDT) and its component on the plasm levels of ACTH， COR and cAMP in hippocampus of depressed mode. ［Methods］ Eighty-four male rats were pided into seven groups: control group， depressed model group， group of CYWDT， group of HuaTan， group of TiaoQiXue， group of YangXinPi， group of maprotiline equally and made up models in chronic unpredictable mild stress (CUMS). The plasm levels of ACTH， COR and the level of cAMP in hippocampus were detected by radioimmunoassay. ［Results］ We found that the plasm levels of ACTH， COR were significantly increase and cAMP in hippocampus was significantly decreasd in depression model of rat. CYWDT and TiaoQiXue could significantly decreased the level of ACTH(P＜0.05); CYWDT， HuaTan and TiaoQiXue could significantly decreased the level of COR(P＜0.01). CYWDT， HuaTan and TiaoQiXue could significantly increase the level of cAMP in hippocampus. ［Conclusion］ Chronic unpredictable mild stress can increase the plasm levels of ACTH， COR and the level of cAMP in hippocampus of depression rats. CYWDT could reverse all the changes. The mechanism maybe relatd to regulate hypothalamicpituitaryadrenal axis and signal transmission in cell.
Key words: Chaiyuwendantang; component;depression; hypothalamicpituitaryadrenal axis; adrenocorticotropic hormone; cortisol; cyclic adenosine monophosphate
抑郁癥(depression)是最常見的心境障礙，嚴重威脅人類的身心健康。我們在前期研究中證實柴郁溫膽湯對腦單胺類神經遞質代謝紊亂具有良好的調節作用，且可明顯增加大鼠海馬部位PKA表達［1］。本實驗擬觀察柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP的影響。并與四環類抗抑郁藥馬普替林相對照，現報告如下。
1 材料與方法
1.1 材料
(1) 實驗動物:健康SpragueDawley(SD)雄性大鼠84只，體重（180±20）g，由南京醫科大學實驗動物中心提供(許可證號：SCXK(蘇)20020031)。所有大鼠均用普通飼料喂養兩周后開始造模。(2)實驗藥品:柴郁溫膽湯組（柴胡、郁金、半夏、陳皮、竹茹、枳實、人參、茯苓、炙甘草）濃度為1.84g生藥量/ml。化痰組（半夏、陳皮、竹茹）濃度為0.64g生藥量/ml。調氣血組（柴胡、郁金、枳實）濃度為0.6g生藥量/ml。養心脾組（人參、茯苓、炙甘草、大棗）濃度為0.5g生藥量/ml。以上藥物的煎制和濃縮均手工操作，所用煎藥器具為陶瓷制品以保證藥物在煎制過程中的穩定性。濃縮后的藥物中每種單味藥的濃度在整方和拆方中均相同，以保證各組實驗結果的可比性。鹽酸馬普替林(北京諾華制藥有限公司生產，國藥準字H19991047)用去離子雙蒸水配制成1mg/ml藥物混懸液。(3)主要實驗試劑和儀器 促腎上腺皮質激素(adrenocorticotropic hormone ACTH)放射免疫分析試劑盒(北京北方生物技術研究所)、皮質醇(cortisol COR)放射免疫分析試劑盒(北京華英室溫技術研究所)、環磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate cAMP)放射免疫分析試劑盒(上海中醫藥大學核醫學試驗室)。儀器：GC911γ放射免疫計數器(科大創新股份有限公司中佳分公司)。
1.2 方法
1.2.1 動物分組及給藥
選取Openfield評分相近的大鼠84只，隨機分為正常組、模型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調氣血組、養心脾組、馬普替林組，每組12只。各治療組在應激的第2天開始均按提取液(濃縮后)1ml/100g灌胃給藥；模型組和正常組給予等量生理鹽水。每天上午8時給藥1次，持續至實驗的第23天。
1.2.2 模型制備
正常組每籠飼養6只，正常攝水飲食，不給任何刺激。其余各組，每只均單籠飼養，并接受21天各種不同的應激刺激，參照Katz方法［2］，每天隨機給予一種刺激。使大鼠不能預料刺激的發生，以避免產生適應。
1.2.3 行為學測定
Openfield法測定行為 所用自制敞箱規格為高40cm、直徑80cm的內空圓柱桶，周壁為黑色，地面用黑線劃分為面積相等的25塊。以動物四肢完全進入一個分區作為一個水平活動(crossing)得分、以雙前肢完全抬離地面至放下作為一次垂直活動(rearing)得分、以及觀察大鼠的理毛(修飾)次數和大便顆粒數。每只動物僅進行一次測定，每次觀察3min。
1.2.4 糖水消耗實驗
在實驗第22天所有實驗大鼠均單籠飼養并禁食和禁水，只給1%蔗糖溶液150ml，計算大鼠24h飲用1%蔗糖溶液量。
1.2.5 大鼠血清ACTH和COR測定
用10%水合氯醛(0.36ml/100g) 給大鼠腹腔注射，麻醉后開腹，腹主動脈抽取血液5ml，待測ACTH和COR。按試劑盒方法要求分離血清，采用125I標記放免法測定。
1.2.6 大鼠海馬cAMP含量測定
按大鼠腦立體定向圖譜(包新民等編著，人民衛生出版社，1991年)定位，冰上分離大鼠一側海馬，裝于凍存管并立即投入液氮中，待固化后稱重，放入-86℃冰箱保存待測。檢測時海馬置于pH4.75的醋酸緩沖液中勻漿，加入無水乙醇沉淀蛋白，離心取上清液。采用125I標記放免法測定cAMP含量。
1.3 統計學方法
所有數據均以均數±標準差(x±s)表示。用SPSS11.5統計軟件對兩組間均數進行兩獨立樣本t檢驗和F檢驗。
2 結果
各組大鼠行為學變化，見表1。表1 柴郁溫膽湯及其組分對大鼠行為學評分的影響(略)．與正常組比較 P
3 討論
對于抑郁大鼠的行為學觀察多采用經典的Openfield法，目前比較肯定的觀察指標是大鼠的水平運動得分和垂直運動得分。本試驗觀察了大鼠的修飾次數以及大便顆粒數。其中水平得分代表動物的活動度；垂直得分代表動物對新鮮事物的好奇程度和對外界環境的探究興趣［2］。修飾次數代表了動物對周圍環境的要求和自身的關注程度，大便顆粒數反應了CUMS抑郁模型大鼠是否有便秘的抑郁癥常見并發癥。結果顯示復方柴郁溫膽湯能夠顯著提升抑郁模型大鼠的水平得分、垂直得分、修飾次數和大便顆粒數。相對于馬普替林，更是顯示了少或無馬普替林的抗膽堿能副作用—便秘。
本實驗研究觀察到模型組大鼠血清ACTH和COR濃度較正常組顯著增高，與上述文獻報道一致，這也進一步證實模型組大鼠存在HPA軸功能亢進。柴郁溫膽湯組和調氣血組能能夠逆轉ACTH的升高；柴郁溫膽湯組、化痰組和調氣血組能逆轉大鼠COR水平的增高；馬普替林組能夠同時逆轉ACTH和COR的升高。說明柴郁溫膽湯具有調節HPA軸功能紊亂的作用，強度與馬普替林相似，其中起主要作用的是化痰和調氣血組分。
cAMP是細胞內第二信使，可介導多種細胞內激素、神經遞質及其他信號分子的作用。本試驗研究表明，模型組大鼠海馬cAMP含量較正常組明顯降低。柴郁溫膽湯組、化痰組、馬普替林組均能夠逆轉這種改變，提示柴郁溫膽湯參與了細胞信號通路的調節，其中起主要作用的是化痰藥，可能為其抗抑郁機理之一。
參考文獻
