病菌集中營

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病菌集中營范文第1篇

關鍵詞：四君子湯； 內(nèi)科疾病； 脾胃氣虛證； 臨床療效

【中圖分類號】R139+.1 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）04-0498-02

中醫(yī)中四君子湯是一種很古老的方劑，基本中草藥方為甘草?茯苓?白術和人參，尤其對于存在脈虛弱?氣短乏力?舌淡苔白和面白食少等癥狀的患者非常適用?由《傷寒論》中的“理中丸”衍化而來的四君子湯是治療脾胃氣虛證的基礎方，在《太平惠民和劑局方》中進行了詳細的記載[1]?隨著人們生活節(jié)奏逐漸加快和工作壓力的增大，人們的生活方式發(fā)生了很大的變化，加上人們?nèi)狈ψ晕医】当Ｗo意識，導致中醫(yī)內(nèi)科疾病脾胃氣虛證發(fā)病率逐年上升，嚴重影響人們的健康?臨床醫(yī)學和中醫(yī)藥學在不斷發(fā)展的過程中，發(fā)現(xiàn)四君子湯對脾胃氣虛證有很好的治療效果?本文通過分析127例脾胃氣虛證患者的臨床資料，研究四君子湯在中醫(yī)內(nèi)科疾病脾胃氣虛證中的應用和治療，以期提高脾胃氣虛證患者的臨床療效，現(xiàn)將研究成果報道如下?

1 資料和方法

1.1 臨床資料：

將我院從2013年5月―2014年5月收治的共137例脾胃氣虛證患者作為研究對象，對所有患者的臨床資料進行回顧性分析?將患者隨機分為對照組和治療組，對照組患者57例，治療組患者80例?排除符合以下狀況的患者：1）伴有精神疾病的患者；2）處于哺乳期或妊娠期的婦女；3）存在嚴重心血管疾病的患者；4）存在病毒?細菌或真菌感染癥狀的患者[2]?所有患者均確診為脾胃氣虛證，其中女性患者63例，男性患者74例，年齡范圍為21―63歲，平均年齡為（43.2±8.3）歲?兩組患者在年齡?性別?病史及病情等方面無較大差別，具有可比性（P>0.05）?

1.2 治療方法：

給予對照組患者常規(guī)治療；治療組患者通過四君子湯進行治療，藥方為甘草5g?茯苓?白術和人參各10g，添加水后煎取服用，分三次服用，1劑/天?所有患者治療周期均為3周，在治療后觀察記錄患者的不良反應和復發(fā)狀況，對比治療效果?

1.3 療效評價標準：

無效：患者的臨床癥狀在治療前后沒有較大變化，治療前后療效指數(shù)下降程度小于20%；有效：患者癥狀有所改善，治療前后療效指數(shù)下降20%―59%；顯效：患者癥狀基本消失，治療前后療效指數(shù)下降60%―89%；痊愈：患者癥狀在治療后全部消失，治療前后療效指數(shù)下降程度大于90%?有效率=顯效率+痊愈率，療效指數(shù)=（治療前積分-治療后積分）/治療前積分×100%?

2 結果

2.1 兩組患者療效對比結果：

進行積極的治療后，經(jīng)常規(guī)療法治療的對照組有效率為67.3%，經(jīng)四君子湯治療的治療組有效率為93.3%，治療組臨床療效明顯優(yōu)于對照組，兩組對比數(shù)據(jù)有顯著性差異（x2=16.622，P

2.2 不良反應及復況：

137例脾胃氣虛證患者均完成治療，無中途退出者，所有患者中無不良反應；治療1個月后進行隨訪觀察，治療組無復發(fā)現(xiàn)象，徹底治愈，對照組4例患者出現(xiàn)復發(fā)現(xiàn)象，癥狀較輕?

3 討論

脾胃氣虛是脾胃虛弱的基本類型，指的是脾氣不足，失其健運而出現(xiàn)的食欲下降?腹瀉?神疲倦怠?腹脹?面色萎黃和舌質(zhì)淡等癥狀，主要是由于勞累過度?飲食無規(guī)律?久病耗傷脾氣引起的?

四君子湯由甘草?茯苓?白術和人參四味基礎藥方構成，其中甘草味甘，性平，含有黃酮類化合物甘草黃甙?三萜類化合物甘草酸?甘草黃甙等成分，具有鹽皮質(zhì)激素樣作用和糖皮脂激素樣抗炎作用，起到解毒?抗?jié)?鎮(zhèn)咳祛痰的功效，對中氣不足?脾胃虛弱?腹中攣急作痛?咳嗽氣喘等癥狀的患者療效顯著；茯苓又名茯菟，主要包括三萜類（茯苓酸?茯苓新酸等）?多糖（茯苓聚糖?茯苓次聚等）和無機元素等多種成分構成，性味歸經(jīng)為甘?淡，平?茯苓不僅具有寧心安神?補中健脾?利水滲濕?抗腫瘤的功效，還能用于痰飲咳嗽，痰濕入絡，肩背酸痛?心悸?失眠的治療，可以增強機體免疫力，同白術?澤瀉及豬苓聯(lián)用對治療小便不利?水腫漲滿有很好的療效[4]；白術氣清香，味甘?微辛，具有多項藥用功能，能夠起到補脾益胃?健脾益氣?燥濕利水?止汗等作用，主治脾胃氣弱，由蒼木酮?蒼術醇及維生素等物質(zhì)構成，適用于小便不利?虛脹?泄瀉?食欲下降的病癥；人參是一種主要的強壯滋補藥物，性平?味甘?微苦，適用于健脾益肺，具有補脾益肺?復脈固脫?生津止渴?安神益智等功效，主治神經(jīng)衰弱?勞傷虛損?心悸?失眠?頭暈目眩?失眠多夢等癥狀，能夠保持中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的穩(wěn)定，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)，增強機體免疫力?

上述多味藥同用則達到益氣健脾，補益肝腎的效果?通過大量的臨床經(jīng)驗與數(shù)據(jù)，現(xiàn)代藥理研究得出結論：在益氣補中方面，可以采用多種途徑對甘草?茯苓?白術和人參加以利用達到治療效果?該研究表明四君子湯對治療中醫(yī)內(nèi)科疾病脾胃氣虛證患者有很好的臨床療效，臨床應用價值較高，應該普遍推廣?

參考文獻

病菌集中營范文第2篇

細菌性陰道病（BV）是一種由一些厭氧菌和兼性厭氧菌的過度增殖以及正常菌群的減少或缺失所引起的多細菌性紊亂疾病，是育齡婦女最常見的陰道感染性疾病之一。在臨床上又稱為非特異性陰道炎。據(jù)文獻報道，感染率為30%～50%，發(fā)病率在10%～30%，患者例數(shù)遠遠高于陰道滴蟲、霉菌等感染人數(shù)，且易復發(fā)。快速單項唾液酸酶和聯(lián)合測定試劑法現(xiàn)在已是實驗室檢測BV的常用方法，我們對兩法的臨床應用價值作了比較。

1 材料與方法 1.2標本采集 用2根無菌棉拭子采集患者陰道壁下1/3處的盡可能多的分泌物樣本。采樣后立即送檢。標本盡快檢測，放置過久影響檢出率。

1.3檢測方法 細菌性陰道病聯(lián)合測定試劑盒（福建泰普公司）。

單項快速唾液酸苷酶測定法（天津瑞愛公司）。

按試劑說明書操作。

1.4兩法比較 進行BV單項快速唾液酸酶法和聯(lián)合測定試劑法的檢測結果比較。對于上述兩種方法檢測結果不同的標本，用經(jīng)典檢查項目Amsel診斷標準進行判斷。

2 結果

2.1 BV快速單項唾液酸酶法和聯(lián)合測定試劑法檢測結果。 2.2 BV快速單項唾液酸酶法與聯(lián)合測定試劑法的敏感性和特異性比較 綜合上述兩種方法檢測結果不一致的22份標本,以經(jīng)典Amsel方法為標準進行判斷分析。在BV快速單項唾液酸酶法檢測陽性而聯(lián)合檢測陰性的17例標本中，Amsel標準的診斷為13例陰性，4例陽性；在聯(lián)合檢測陽性而BV快速單項唾液酸酶法檢測陰性的5例標本中，Amsel標準的診斷為4例陽性，1例陰性。單項唾液酸酶測定診斷BV的敏感性93.7%,特異性94.5%,陽性預測值81.9%,陰性預測值98.2%。聯(lián)合測定診斷BV的敏感性93.7％，特異性99.6％，陽性預測值98.3％，陰性預測值98.3％。

3 討論

本文介紹的兩種快速診斷法具有敏感度和特異性都較高，速度快，操作簡便，主觀因素少，可保證實驗結果客觀準確等優(yōu)點，適用于門診病人的快速檢測，是值得臨床普遍推廣的檢測方法。

病菌集中營范文第3篇

【摘要】 目的 研究鱟試劑凝膠法與家兔測溫法檢測抗狂犬病血清不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品中細菌內(nèi)毒素與熱原試驗結果的相關性，來確定抗狂犬病血清細菌內(nèi)毒素的限量標準。方法 確定內(nèi)毒素的限值和供試品溶液最大有效稀釋倍數(shù)；制備供試品溶液在最大有效稀釋倍數(shù)下作干擾試驗；確認無干擾作用后，用鱟試劑凝膠法檢測抗狂犬病血清不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品進行細菌內(nèi)毒素的限量檢查，并與家兔測溫法結果相對比。結果 連續(xù)檢查十批抗狂犬病血清制品細菌內(nèi)毒素的限量符合規(guī)定，鱟試劑凝膠法與家兔測溫法試驗符合率100%。結論 用鱟試劑凝膠法對抗狂犬病血清不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品進行細菌內(nèi)毒素的限量檢測為快速、準確，可用鱟試劑凝膠法代替家兔測溫法檢測抗狂犬病血清制品中熱原。

工作標準品用細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內(nèi)毒素標準溶液，每個內(nèi)毒素濃度平行做4管，另外2管作為陰性對照管。按凝膠法鱟試劑說明書檢查操作進行，封閉管口，輕輕搖勻，垂直放入(37±1)℃的恒溫器中，保溫(60±2)min。然后取出觀察結果。

1.2.1.4 凝膠法干擾試驗 取3批經(jīng)熱原檢查法檢測合格的抗狂犬病血清，根據(jù)MVD將抗狂犬病血清溶液稀釋做為3批供試品溶液，每批取36支鱟試劑，其中16支根據(jù)鱟試劑靈敏度的標示值（λ），將細菌內(nèi)毒素工作標準品用供試品溶液溶解，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內(nèi)毒素標準溶液，每個內(nèi)毒素濃度平行做4管，作為干擾試驗系列（E/S系列）；而另16支，也根據(jù)鱟試劑靈敏度的標示值（λ），將細菌內(nèi)毒素工作標準品用細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內(nèi)毒素標準溶液，每個內(nèi)毒素濃度平行做4管，作為鱟試劑標示靈敏度的對照系列（E系列）；把剩余4管，2管作為供試品溶液檢查（S），另外2管作為陰性對照（NC）。按凝膠法鱟試劑說明書檢查操作進行，封閉管口，輕輕搖勻，垂直放入(37±1)℃的恒溫器中，保溫(60±2)min。然后取出觀察結果。

1.2.1.5 凝膠限量試驗 將抗狂犬病血清10批制品，按MVD稀釋作為供試品溶液，每批取鱟試劑8支，其中2支作為供試品溶液檢查管（MVD-S）；2支作為供試品陽性對照管（MVD-PPC）；2支作為陽性對照管（PC）；2支作為陰性對照管（NC）。按凝膠法鱟試劑說明書檢查操作進行，封閉管口，輕輕搖勻，垂直放入(37±1)℃的恒溫器中，保溫(60±2)min。然后取出觀察結果。

1.2.1.6 結果判斷標準 將試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉180°，若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陽性；未形成凝膠或形成的凝膠不堅實、變形并從管壁畫脫者為陰性。

1.2.2 家兔測溫法 （依照《中國藥典》2005年版 三部附錄Ⅻ D檢查）［2］

1.2.2.1 試驗前準備和操作 家兔在檢查前至少1h開始停止給食并置于固定架上，直至檢查完畢。挑選預測體溫合格的家兔3只，自家兔耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量的抗狂犬病血清，每隔30min測體溫一次，共測6次，根據(jù)體溫升高均值和總和判定結果。

1.2.2.2 注射劑量 按家兔體重每1kg注射3.0ml。

1.2.2.3 結果判斷標準 在3只家兔中，體溫升高均低于0.6℃，并且3只家兔體溫升高總和低于1.4℃，認為供試品的熱原檢查符合規(guī)定；反之認為不符合規(guī)定。

2 結果

2.1 鱟試劑靈敏度復核試驗 將18支鱟試劑試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉180°，觀察凝膠是否變形，記錄結果。計算反應終點濃度的幾何平均值，即鱟試劑靈敏度的測定值λc=0.52EU/ml，由于0.5λ≤λc≤2λ，本批鱟試劑的靈敏度標示值正確。結果見表1。

2.2 凝膠法干擾試驗 將每批36支鱟試劑試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉180°，觀察凝膠是否變形，記錄結果。計算E系列和E/S系列的反應終點濃度的幾何平均值，即Es和Et值，由于Es在0.5～2λ及Et在0.5～2Es之間，則供試品在該濃度下無干擾作用，結果見表2。

2.3 抗狂犬病血清二次除菌過濾后細菌內(nèi)毒素檢查和熱原檢查結果 將十批抗狂犬病血清，按MVD稀釋作為供試品溶液，將每批8支鱟試劑試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉180°，觀察凝膠是否變形，判斷結果。并與熱原檢查法結果比較，見表3。

3 討論

鱟試劑凝膠法系通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應的原理來檢測內(nèi)毒素的方法。熱原是指在臨床上能使哺乳類動物產(chǎn)生熱原反應的物質(zhì)；細菌內(nèi)毒素是革蘭陰性細菌細胞壁的產(chǎn)物，具有多種生物活性，其化學結構是脂多糖，為熱原的主要來源，能引起機體發(fā)熱。熱原與細菌內(nèi)毒素的關系是包含與被包含的關系，在藥品檢定范疇，可以說無細菌內(nèi)毒素就無熱原；在藥品生產(chǎn)范疇，控制細菌內(nèi)毒素就是控制熱原。藥品和生物制品用細菌內(nèi)毒素檢查取代熱原檢查已成為必然的趨勢。傳統(tǒng)家兔測溫法不僅檢測時間長，樣品用量多，并存在較多的干擾因素。另外，家兔的人工飼養(yǎng)和居住條件等經(jīng)費大，成本高，也存在一定問題。鱟試劑是一種生物制劑，鱟試劑凝膠法檢查細菌內(nèi)毒素具有快速、簡便、經(jīng)濟、靈敏度高、再現(xiàn)性好等優(yōu)點，已廣泛應用于《中國藥典》2005年版 三部生物制品的檢定中［2］。本實驗通過對鱟試劑靈敏度復核試驗、三批抗狂犬病血清凝膠法干擾試驗和十批抗狂犬病血清細菌內(nèi)毒素檢查，結果表明，供試品溶液和檢查用水對細菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用，制品的鱟試劑凝膠法檢查結果與家兔測溫法結果相同，兩方法比較，結果符合率為100%。生物制品檢測的持續(xù)性和復雜性等決定了要對每個指標的檢測做實際驗證實驗［3］。兩者檢測結果一致，表明應用鱟試劑凝膠法對抗狂犬病血清不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品進行細菌內(nèi)毒素檢測和質(zhì)量控制是可行的。此方法快速、準確，能作到時時監(jiān)控，能獲得即經(jīng)濟又安全、有效和可控的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

1 Moesby L，Hansen EW，Christensen JD.Endotoxin testing of proteins for administration using the Mono Mac 6 assay.J Clin Pharm Ther，2000，25(4):283-289.

病菌集中營范文第4篇

摘 要 目的：探討高敏C反應蛋白在早產(chǎn)兒細菌感染性疾病的診斷意義。方法：2012年3月-2014年1月收治早產(chǎn)兒感染30例，作為觀察組。收集同期分娩的健康兒童30例，作為對照組，對兩組進行對比分析。結果：觀察組hs-CRP（14.66±4.69）mg/L，對照組hs-CRP（2.46±0.83）mg/L，觀察組明顯高于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P

關鍵詞 早產(chǎn)兒 感染 高敏C反應蛋白

Significance of high-sensitivity C-reactive protein in the diagnosis of bacterial infectious diseases in preterm neonates

Zhang Yingchun

The People's Hospital of Guazhou County，Gansu 736100

Abstract Objective：To explore the diagnostic significance high-sensitivity C-reactive protein in the bacterial infectious diseases in preterm neonates.Methods：30 cases of rremature infant patients were selected as the observation group from March 2012 to January 2014.30 cases of delivery of healthy children at the same time were collected as the control group.The two groups were compared and analyzed.Results：The hs CRP of the observation group was 14.66 ±4.69 mg/L.The hs CRP of the control group was 2.46±0.83 mg/L.The observation group is significantly higher than the control group，and the difference was statistically significant （P

Key words Preterm neonates；Infection；High-sensitivity C-reactive protein

早產(chǎn)兒感染是由于產(chǎn)婦、早產(chǎn)兒以及生產(chǎn)過程中等因素導致的感染，是早產(chǎn)兒常見的疾病，高敏C反應蛋白（hsCRP）是人體的急性時相反應蛋白，在機體發(fā)生急性感染時，高敏C反應蛋白明顯升高。早產(chǎn)兒不同于正常新生兒，其感染是否存在高敏C反應蛋白明顯升高等臨床意義是值得討論的課題[1]。為此，筆者收集我院2012年3月-2014年1月治療的30例早產(chǎn)兒患者進行總結和分析。

資料與方法

2012年3月-2014年1月收治早產(chǎn)兒感染30例作為觀察組，男18例（60.0%），女12例（40.0%），胎齡30+2～36周，平均33+3周，出生體重1 052～2 577g，平均3 633g。收集同期分娩的健康兒童30例，作為對照組。對兩組進行對比分析。

方法：所有入組患兒都給予抽取靜脈血，檢查hsCPR，對于觀察組的患兒，還要給予血液、尿液、呼吸道分泌物等標本的細菌培養(yǎng)。

統(tǒng)計學方法：用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料用（x±s）形式表示，計量資料采取t檢驗，計數(shù)資料采取χ2檢驗。當P

結 果

兩組新生兒hsCRP試驗結果比較：觀察組hs-CRP（14.66±4.69）mg/L，對照組hs-CRP（2.46±0.83）mg/L，觀察組明顯高于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P

患兒細菌培養(yǎng)情況：本組30例患者采用大便細菌培養(yǎng)5例（16.7%），采用尿液細菌培養(yǎng)10例（33.3%），進行血液細菌培養(yǎng)7例（23.3%），進行痰液細菌培養(yǎng)4例（13.3%），采用咽拭子細菌培養(yǎng)4例（13.3%）。均培養(yǎng)出致病菌。各細菌分類：革蘭陽性菌株18株（60.0%），其中表皮葡萄球菌8例，金黃色葡萄球菌9例（50.0%），溶血葡萄球菌1株。革蘭陰性菌株12株（40.0%），其中大腸埃希菌5株，肺炎克雷伯桿菌4株，陰溝腸桿菌2例，產(chǎn)酸克雷伯桿菌1株。

討 論

由于我國人口眾多，兒童患者較多，其中在新生兒監(jiān)護病房的患者中，早產(chǎn)兒占>50%。在某種程度上，早產(chǎn)兒尤其是極低體重兒的救治成活率代表著一個國家新生兒重癥監(jiān)護的水平[2]。在新生兒期，早產(chǎn)兒感染性敗血癥是導致患兒死亡的主要原因之一，特別是早產(chǎn)兒細菌感染敗血癥。為了降低早產(chǎn)兒感染患者的死亡率，提到救治成活率，應該重視對疾病的監(jiān)測和早期診斷。早期診斷為下一步的治療提供的理論基礎，而治療的關鍵是及時給予有效的抗生素治療。

在早產(chǎn)兒感染的診斷中，血培養(yǎng)是金標準，但血培養(yǎng)檢查出結果較慢，最快也要36～48小時，而且檢查的結果還受到多種因素的影響，如細菌的種類，檢查前的用藥及血培養(yǎng)的技術水平。血培養(yǎng)檢查的陽性率較低，很多有明顯感染癥狀的患兒，其血培養(yǎng)結果可能是陰性[3]。在臨床中，未被治療的早產(chǎn)兒感染性敗血癥死亡率高達50%，所以人們已認識到了等待血培養(yǎng)結果指導治療的危害性，加之血培養(yǎng)檢查結果較慢，不能較好指導早期臨床用藥[4，5]。

近年來，在細菌感染的診斷中，CRP、白細胞及血沉等間接實驗室指標中，CRP廣泛被應用于臨床工作。在采用高敏感CRP（hsCRP）測定法反映炎癥的情況時，hsCRP比CRP更敏感。本研究結果顯示，觀察組hs-CRP（14.66±4.69）mg/L，對照組hs-CRP（2.46±0.83）mg/L，觀察組明顯高于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P

因此，高敏C反應蛋白在早產(chǎn)兒細菌感染性疾病診斷中具有重要的意義，值得在臨床中推廣應用。

參考文獻

1 Zwaka TP，Hombach V，Torzewski J.C-reactive proteinmediated low density lipoprotein uptake by macrophages：implications for atherosclerosis[J].Circulation Journal，2001，（9）：1194-1197.

2 黃惠娟，鄭鎧軍，陳敬國.新生兒超敏C反應蛋白水平觀察及研究[J].現(xiàn)代臨床醫(yī)學生物工程學雜志，2005，11（1）：39-40.

3 Pasceri V，Cheng JS，Willerson JT.Modulation of C-reactive protein-mediated monocyte chemoattractant protein-1 induction in human endothelial cells by anti-atherosclerosis drugs[J].Circulation Journal，2001，（21）：2531-2534.

病菌集中營范文第5篇

關鍵詞：馬鈴薯（Solanum tuberosum）；晚疫病病原菌（Phytophthora infestans）；水楊酸；乙烯；基因表達

中圖分類號：S532；Q786；S435.32 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）17-4238-03

Effects of Infection of Phytophthora infestans on Gene Expressions of Key Enzymes in Salicylic Acid and Ethylene Biosynthesis in Potato

ZHU Jia-li1，DING Yan1，XU Hong-zhang1，XIN Cui-hua1，CAI Lu1，XIAO Huan-huan1，

HE Yan-hong2，LI Na1，GUO Jiang-bo1

（1. Inner Mongolia Key Laboratory of Biomass-Energy Conversion/School of Mathematics， Physics and Biological Engineering， Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou 014010， Inner Mongolia， China； 2. Forestry College， Inner Mongolia Agricultural University， Huhhot 010020， China）

Abstract： Phenylalanine ammonia-lyase（PAL） and 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid（ACC） synthase（ACS） are the key enzymes in the biosynthesis pathway of salicylic acid and ethylene respectively. Expression patterns of gene encoding these key enzymes（poPAL and poACS） in potato（Solanum tuberosum） were investigated by semi-quantitative RT-PCR after injection of Phytophthora infestans physiological strain 89148-9 to potato transgenic resistant strains DR1， DR3a and wild susceptive line DG. The results showed that expression of poPAL and poACS genes was increased in leaves of the three potato lines after inoculation of P. infestans. The expression level in transgenic lines was mostly higher than that in wild line and the peak value in transgenic lines generally appeared earlier to that in wild line. The results suggested that poPAL and poACS were related with the resistance to late blight in potato； but the expression models were different between transgenic lines and wild line， which might be responsible for resistance or susceptibility to P. infestans.

Key words： potato（Solanum tuberosum）； Phytophthora infestans； salicylic acid； ethylene； gene expression

收稿日期：2012-08-27

基金項目：國家自然科學基金項目（31260344）；內(nèi)蒙古自然科學基金項目（2011BS0506，2012MS0301）；高等學校科學研究項目

（NJZZ11139）；內(nèi)蒙古科技大學李保衛(wèi)大學生科技創(chuàng)新基金項目；教育廳“青年科技英才支持計劃”項目

作者簡介：朱佳莉（1990-），女，江蘇丹陽人，在讀本科生，生物技術專業(yè)；通訊作者，郭江波（1976-），男，內(nèi)蒙古呼和浩特人，副教授，博士，

主要從事植物抗逆分子生物學研究，（電話）15044701654（電子信箱）。

馬鈴薯（Solanum tuberosum）是世界第四大糧食作物，在緩解全球糧食安全問題中占有重要的地位[1]。馬鈴薯晚疫病則是限制馬鈴薯生產(chǎn)的第一大病害，給馬鈴薯產(chǎn)業(yè)造成了嚴重的損失，培育優(yōu)良的抗病品種、探明其抗病機制意義重大。

植物在受到病原菌的侵染后其體內(nèi)會發(fā)生一系列生理生化反應以降低病害造成的傷害。其中體內(nèi)產(chǎn)生信號分子進而誘導一系列防衛(wèi)基因表達和代謝變化是植物抗病行而有效的方法之一。水楊酸（Salicylic acid，SA）和乙烯是植物體內(nèi)重要的信號分子，可以誘導植物的抗病反應[2，3]。本研究以通過轉基因技術獲得的2個馬鈴薯抗晚疫病株系DR1、DR3a和野生型株系DG為材料，利用水楊酸合成途徑中的關鍵酶——苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanineammonialyase，PAL）基因（poPAL）和乙烯合成途徑中的關鍵酶——1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸（1-Aminocyclopropane-1-carboxylic acid，ACC）合成酶（1-Aminocyclopropane-1-carboxylate synthase，ACS）基因（poACS）的保守區(qū)設計特異引物，通過半定量RT-PCR研究接種晚疫病病原菌（Phytophthora infestans）生理小種89148-9后各株系中兩種酶基因的表達情況，為深入了解馬鈴薯抗晚疫病能力與水楊酸和乙烯信號分子介導植物抗病防衛(wèi)反應之間的關系提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以前期試驗獲得的轉基因抗晚疫病馬鈴薯株系DR1、DR3a和野生型株系DG為材料，采用苗缽（10 cm×10 cm）溫室培養(yǎng)。取生長8～10周的植株為接種對象。

1.2 試驗方法

1.2.1 馬鈴薯接種晚疫病病原菌 ①制備游動孢子。將生長14 d的晚疫病病原菌生理小種89148-9的孢子囊用無菌水沖洗到滅菌培養(yǎng)皿中，在4 ℃冰箱中放置6 h使其釋放游動孢子，然后鏡檢游動孢子濃度并稀釋調(diào)整到終濃度為5×104 個/mL用于接種。②接種。每株系只取中上部3片葉接種，每片葉接種20 μL游動孢子液，接種后置于接種箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為18～25 ℃、光照16 h/d，接種后24 h內(nèi)用塑料膜覆蓋保持100%的相對濕度，分別于接種后0、12、24、48、72 h取樣用于poPAL和poACS基因表達量的分析。

1.2.2 基因特異引物設計 根據(jù)GenBank中發(fā)表的poPAL（序列號Z37106）和poACS（序列號AB041521）基因序列，使用軟件Prime 5.0設計特異引物，引物序列分別為poPAL，5′-GCTAGAGGTGCT

AGTGCTAAGGGATT-3′和5′-TTTGAAACCCTAGA

TAAGGAAATGGC-3′；poACS，5′-TCCTGGTGATGC

ATTTCTAGTTCCT-3′和5′-ATCCATCCAAATAAA TAGGCCAGCAT-3′。

1.2.3 目的基因半定量RT-PCR分析 植物總RNA采用天根生化科技（北京）有限公司植物總RNA提取試劑盒RNAprep法提取，cDNA的合成按照普洛麥格（北京）生物技術有限公司的M-MLV逆轉錄酶操作說明進行。各株系cDNA濃度通過內(nèi)標引物（poactin，5′-GATGGTGTCAGCCACAC-3′和5′-ATTCCAGCAGCTTCCATTCC-3′）來調(diào)整，然后以該cDNA為模板擴增。反應程序為：94 ℃ 4 min；94 ℃ 45 s，60 poPAL/57 poACS ℃ 45 s，72 ℃ 70poPAl（poactin）/40poACS s。PCR產(chǎn)物用1.2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。RT-PCR半定量積分分析使用GelPro 60分析軟件。

2 結果與分析

2.1 接種晚疫病病原菌后各株系poPAL基因的表達情況

接種晚疫病病原菌生理小種89148-9對3個馬鈴薯株系poPAL基因的表達都有持久的誘導作用，從3個株系中都擴增出了長度約為1.2 kb的產(chǎn)物。對RT-PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖1）和半定量積分分析（圖2）發(fā)現(xiàn)，轉基因DR1株系中poPAL基因的表達量在接種后24 h時達到最大，然后隨著時間的延長其表達量迅速下降，到72 h時該基因的表達量顯著低于接種前水平；轉基因DR3a株系中poPAL基因的表達量也在接種后24 h時達到最大，并保持一段時間的高表達量然后緩慢下降；野生型DG株系中poPAL基因表達量在接種后12 h時達到最大，到48 h時仍保持在相對穩(wěn)定的水平上，接種72 h后該基因的表達量略低于接種前水平。除72 h時轉基因DR1株系中poPAL基因的表達量與野生型DG株系相當外，接種晚疫病病原菌后72 h內(nèi)轉基因DR1和DR3a株系中poPAL基因的表達量均明顯高于野生型DG株系。

2.2 接種晚疫病病原菌后各株系poACS基因的表達情況

接種晚疫病病原菌生理小種89148-9對3個馬鈴薯株系poACS基因的表達都有明顯的誘導作用，從3個株系中都擴增出了長度為681 bp的產(chǎn)物。對RT-PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖3）和RT-PCR半定量積分分析（圖4）可以看出，DR1株系在接種后12 h時poACS基因的表達量達到最大，在12～48 h內(nèi)一直保持較高的表達水平，然后逐漸下降，但72 h時其表達量仍高于接種前；轉基因DR3a株系接種后12 h poACS基因表達量迅速升高，24 h時poACS基因的表達量略有升高，但與12 h時沒有顯著差異，之后poACS基因的表達量逐漸下降，到72 h時其表達量低于接種前水平；野生型DG株系接種后24 h時poACS基因的表達量達到最大，然后逐漸下降，到72 h時poACS基因的表達量已檢測不到。在整個觀察期內(nèi)，轉基因DR1和DR3a株系中poACS基因的表達量遠高于野生型DG株系，而且轉基因株系中的誘導為連續(xù)誘導，而野生型為不連續(xù)誘導，在接種后72 h時該基因不表達。

3 小結與討論

水楊酸在植物的系統(tǒng)獲得性抗性中是必不可少的信號物質(zhì)[4]，研究發(fā)現(xiàn)增加內(nèi)源水楊酸表達量或者外施水楊酸都可以誘導系統(tǒng)獲得性抗性[5-7]。本研究發(fā)現(xiàn)，接種晚疫病病原菌生理小種89148-9后，在馬鈴薯轉基因株系和野生型株系中都誘導了poPAL基因的表達，表明水楊酸可能是馬鈴薯抗晚疫病過程中重要的信號分子，這與前人的研究結果[8]一致。但同一株系不同時間和不同株系同一時間該基因的表達量存在一定的差異，說明轉基因株系可能通過調(diào)控poPAL基因誘導表達的強度來實現(xiàn)對晚疫病的抗性。

在高等植物中，ACC經(jīng)ACS或者ACC氧化酶（ACO）合成乙烯，它們是乙烯合成途徑的關鍵酶，而ACS和ACO受生物脅迫或者非生物脅迫正調(diào)控[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，在接種晚疫病病原菌生理小種89148-9后，在馬鈴薯轉基因和野生型株系中都誘導了poACS基因的表達，表明乙烯可能是馬鈴薯抗晚疫病過程中重要的信號分子，這與之前的報道一致[10]。但同一株系不同時間和不同株系同一時間該基因表達量有一定的差異，這說明轉基因株系可能通過對該基因誘導表達的強度和時序的調(diào)控來實現(xiàn)其對晚疫病的抗性。

本研究選用的2個轉基因株系和野生型株系在接種晚疫病病原菌后都啟動了水楊酸和乙烯信號轉導途徑，只是啟動的強弱和時序上有較大的差異。這表明并非只有抗病株系才啟動防御反應機制，而是在植物與病原菌互作中，植物都具有潛在的防御反應機制，這些防御反應基因通過識別、信號傳遞和誘導，使植物自身防御系統(tǒng)被激活而相關防御反應基因被誘導表達[11，12]。同時也支持了有關水楊酸和乙烯信號轉導途徑在抗病防御反應機制中的復雜性和可能存在多條信號轉導途徑復雜的交叉與重疊作用的結論。但是各株系接種晚疫病病原菌后相關基因的啟動強度與時序性有較大的差異，這可能是由于不同植物與病原菌所組成的不同互作系統(tǒng)引起的，也可能就是抗、感晚疫病的原因所在。

參考文獻：

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