生物醫(yī)學(xué)工程倫理

前言：想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇生物醫(yī)學(xué)工程倫理范文，相信會(huì)為您的寫作帶來(lái)幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

生物醫(yī)學(xué)工程倫理范文第1篇

1 臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)存在的倫理隱患與分析

1.1 來(lái)自醫(yī)院內(nèi)部倫理隱患

1.1.1 責(zé)任擔(dān)當(dāng)?shù)腻e(cuò)位

責(zé)任擔(dān)當(dāng)?shù)卯?dāng)是確立正確倫理關(guān)系的基礎(chǔ)，責(zé)任擔(dān)當(dāng)錯(cuò)位則很難維系良好的醫(yī)患關(guān)系。從現(xiàn)行的醫(yī)學(xué)倫理道德規(guī)范看，主要是規(guī)范醫(yī)護(hù)人員與患者之間的關(guān)系，作用于患者的醫(yī)療器械產(chǎn)品的責(zé)任擔(dān)當(dāng)是由其使用者醫(yī)護(hù)人員來(lái)實(shí)現(xiàn)，如在診療過(guò)程中由于醫(yī)療設(shè)備故障或質(zhì)量缺陷導(dǎo)致的醫(yī)療事故，被患者追究責(zé)任的首先是醫(yī)護(hù)人員。但是，醫(yī)療器械產(chǎn)品是基于物理學(xué)、微電子學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)等領(lǐng)域的知識(shí)、技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)患者的診斷與治療，按照現(xiàn)行醫(yī)護(hù)人員的知識(shí)結(jié)構(gòu)，客觀上無(wú)法實(shí)現(xiàn)醫(yī)療器械產(chǎn)品作用于患者的所有責(zé)任擔(dān)當(dāng)。特別是由于醫(yī)療設(shè)備故障或質(zhì)量缺陷導(dǎo)致的醫(yī)療事故，單方面由醫(yī)療器械產(chǎn)品使用者醫(yī)護(hù)人員實(shí)現(xiàn)其責(zé)任擔(dān)當(dāng)，則顯得責(zé)任錯(cuò)位。臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)符合醫(yī)學(xué)倫理要求，醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員具有良好的專業(yè)技能、責(zé)任意識(shí)、職業(yè)道德并完成對(duì)醫(yī)療器械產(chǎn)品故障、質(zhì)量特性、不良事件等要素的責(zé)任擔(dān)當(dāng)，才能夠?qū)崿F(xiàn)正常的醫(yī)患倫理關(guān)系，最終才能完成或體現(xiàn)醫(yī)護(hù)人員對(duì)患者的責(zé)任擔(dān)當(dāng)。

1.1.2 醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員的作用得不到重視

醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員承擔(dān)著醫(yī)療器械產(chǎn)品使用的技術(shù)支持任務(wù)，如維修、使用培訓(xùn)等，其作用理應(yīng)得到醫(yī)院管理者和醫(yī)護(hù)人員的重視。但受中國(guó)傳統(tǒng)社會(huì)文化觀念影響，醫(yī)者為尊、醫(yī)者為上的思想根深蒂固，醫(yī)院管理者和醫(yī)護(hù)人員對(duì)服務(wù)于醫(yī)療工作的其他人員常常不屑一顧，醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員的作用常常得不到應(yīng)有的重視。另一方面，中國(guó)醫(yī)院管理者和醫(yī)護(hù)人員一般不同時(shí)具備工程技術(shù)理論知識(shí)，對(duì)醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員發(fā)揮的作用沒(méi)有予以正確理解。一些醫(yī)生和醫(yī)院管理人員甚至認(rèn)為醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員是低水平的維修人員，臨床或輔診專業(yè)人員也很少征求他們的意見(jiàn)。當(dāng)醫(yī)院管理者、醫(yī)護(hù)人員不重視或不理解醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員的作用，不提供實(shí)現(xiàn)他們作用所需要的職權(quán)支持，也就無(wú)法實(shí)現(xiàn)其應(yīng)有的責(zé)任擔(dān)當(dāng)，最終還是會(huì)影響醫(yī)患之間的關(guān)系。這種對(duì)醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員工作的重要性及專長(zhǎng)的不正確看法及對(duì)他們工作任務(wù)和作用的不理解，是導(dǎo)致對(duì)醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員的待遇、繼續(xù)教育、個(gè)人發(fā)展等得不到重視的一個(gè)基本誘因。當(dāng)出現(xiàn)屬于醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員責(zé)任問(wèn)題時(shí)，甚至可能就逃之夭夭而不主動(dòng)承擔(dān)責(zé)任。因此，醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員在醫(yī)療工作中的作用得不到重視是一個(gè)潛在并十分危險(xiǎn)的倫理隱患。

1.1.3 受制于衛(wèi)生政策制度和行業(yè)文化機(jī)制

臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)沒(méi)有列入醫(yī)學(xué)倫理責(zé)任規(guī)范，醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員沒(méi)有所需要的職權(quán)及制度上的支持，其倫理制約和責(zé)任擔(dān)當(dāng)可能就難以實(shí)現(xiàn)。從現(xiàn)行行業(yè)管理機(jī)制和衛(wèi)生政策制度看，還僅僅把診斷、治療的責(zé)任范圍理解為醫(yī)生、護(hù)士、技師等診斷、治療直接相關(guān)的人員，不認(rèn)為醫(yī)療服務(wù)的責(zé)任與醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員密不可分;從現(xiàn)行醫(yī)院文化價(jià)值指向上看，醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員做出的貢獻(xiàn)和發(fā)揮的作用，在醫(yī)療服務(wù)人員群體中的認(rèn)同度較低，或不認(rèn)為醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員在醫(yī)療服務(wù)中的貢獻(xiàn)和體現(xiàn)的價(jià)值是醫(yī)學(xué)人文精神的體現(xiàn)。這種醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員對(duì)醫(yī)療服務(wù)的責(zé)任不擔(dān)當(dāng)、對(duì)醫(yī)療服務(wù)的貢獻(xiàn)和價(jià)值不認(rèn)同，可能導(dǎo)致對(duì)他們工作的醫(yī)院不負(fù)責(zé)任，進(jìn)而導(dǎo)致對(duì)患者乃至社會(huì)不負(fù)責(zé)任。因此，落實(shí)醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員責(zé)任擔(dān)當(dāng)，認(rèn)同他們對(duì)醫(yī)療服務(wù)的貢獻(xiàn)和價(jià)值，建立適用的醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員倫理道德規(guī)范，具有同等重要的作用。

1.2 來(lái)自醫(yī)院外部倫理隱患

1.2.1 醫(yī)療器械供貨商方面

醫(yī)院需要依靠醫(yī)療器械供應(yīng)商提供臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)，如新技術(shù)產(chǎn)品推廣、新設(shè)備的安裝與調(diào)試、使用方法的培訓(xùn)等。從目前醫(yī)療器械供應(yīng)商銷售管理看，主要為貿(mào)易性公司，當(dāng)?shù)厮幈O(jiān)管理機(jī)構(gòu)辦理醫(yī)療器械經(jīng)營(yíng)許可對(duì)其營(yíng)銷人員并無(wú)專業(yè)化要求。臨床醫(yī)療服務(wù)需要把具有安全性、可靠性和準(zhǔn)確性的產(chǎn)品用于患者，而作為供應(yīng)商是推動(dòng)醫(yī)療器械產(chǎn)品用于患者基本路徑，非專業(yè)性的營(yíng)銷即是非倫理性因素。另一方面，追求營(yíng)銷成功率和市場(chǎng)占有率是銷售管理基本方法，在現(xiàn)行醫(yī)療器械產(chǎn)品銷售過(guò)程中，部分供應(yīng)商或銷售人員不實(shí)事求是介紹產(chǎn)品性能，或只講產(chǎn)品可行性、不講產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)性，或夸大產(chǎn)品功能和療效，甚至在醫(yī)療器械招標(biāo)中存在虛假應(yīng)標(biāo)的行為，是非倫理性的。即使供應(yīng)商具有對(duì)患者、對(duì)社會(huì)高度負(fù)責(zé)的態(tài)度，愿意高薪聘用醫(yī)療器械專業(yè)人員進(jìn)行營(yíng)銷或咨詢服務(wù)，但現(xiàn)行中國(guó)高等院校醫(yī)療器械專業(yè)畢業(yè)生主要流向還是科研教學(xué)機(jī)構(gòu)或部分國(guó)際知名醫(yī)療器械企業(yè)集團(tuán)，多數(shù)醫(yī)療器械銷售公司難以吸納專業(yè)人才從事其營(yíng)銷或相應(yīng)的咨詢服務(wù)[3]，非專業(yè)化營(yíng)銷還將在一定范圍內(nèi)存在。從這個(gè)意義上說(shuō)，醫(yī)院醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員具有專業(yè)化能力和倫理意識(shí)，對(duì)遏制來(lái)自供應(yīng)商方面的非倫理性和非專業(yè)化的營(yíng)銷，從根本上保證社會(huì)公眾健康權(quán)益和利益，具有重要作用。

1.2.2 醫(yī)療設(shè)備維修方面

醫(yī)院自行進(jìn)行的維修保障并不能滿足需求，供應(yīng)商或第三方的維修服務(wù)是維系醫(yī)院醫(yī)療設(shè)備運(yùn)行不可或缺的因素。現(xiàn)階段供應(yīng)商通常將營(yíng)銷和維修分開(kāi)管理、分別核算，并且將公司的維修盈利能力與個(gè)人收益掛鉤，這一機(jī)制促使其維修機(jī)構(gòu)以營(yíng)利為目的，在實(shí)施維修過(guò)程中采取各種方式或手段謀求盈利。另一方面，由于供應(yīng)商對(duì)醫(yī)療器械產(chǎn)品的技術(shù)壟斷或技術(shù)專有性，醫(yī)院依賴于供應(yīng)商的維修服務(wù)。供應(yīng)商方面也看好醫(yī)院醫(yī)療設(shè)備維修這個(gè)可以盈利的市場(chǎng)，當(dāng)某醫(yī)院CT 出現(xiàn)故障，患者排隊(duì)等候檢查，院方要求供應(yīng)商盡快到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行維修，但他們并不是從救治患者角度考慮盡快實(shí)施維修，而是要求醫(yī)院先行預(yù)付維修款項(xiàng)，后實(shí)施維修，從而耽誤患者的診斷與治療。如果醫(yī)院采取購(gòu)買保修的方式，高額的保修價(jià)格同樣會(huì)抬高醫(yī)療服務(wù)成本，增加患者負(fù)擔(dān)。甚至一些維修供應(yīng)商或第三方維修機(jī)構(gòu)認(rèn)為醫(yī)院用戶不懂得設(shè)備原理，蓄意夸大故障原因，脅迫承擔(dān)更多的維修費(fèi)用，提高其盈利水平。無(wú)論哪種方式，高額的醫(yī)療設(shè)備維修服務(wù)成本最終也是轉(zhuǎn)移到患者身上，損害患者的利益，背離醫(yī)學(xué)目的，是道德的缺失。規(guī)范醫(yī)療器械產(chǎn)品的維修管理，使其獲利合理，減輕患者負(fù)擔(dān)，是醫(yī)學(xué)工程行業(yè)需要研究解決的問(wèn)題。

1.2.3 醫(yī)療器械產(chǎn)品研制方面

近年來(lái)，中國(guó)醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)平均增速在25%左右，醫(yī)療器械研制能力得到了加強(qiáng)。但是在臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)過(guò)程中常常聽(tīng)到醫(yī)護(hù)人員的抱怨：國(guó)產(chǎn)質(zhì)量不如進(jìn)口的、國(guó)產(chǎn)設(shè)備不好用。另一方面，中國(guó)每年發(fā)生醫(yī)療器械不良事件至少在4萬(wàn)件以上， 如此高頻率的不良事件對(duì)患者健康構(gòu)成了極大的威脅。醫(yī)療器械產(chǎn)品最終作用于人體，將存在設(shè)計(jì)質(zhì)量缺陷的醫(yī)療器械產(chǎn)品投放市場(chǎng)一定是不道德的。由于醫(yī)療器械市場(chǎng)準(zhǔn)入制度的要求，中國(guó)已經(jīng)建立了醫(yī)療器械注冊(cè)檢測(cè)與臨床試驗(yàn)機(jī)制。但是醫(yī)療器械注冊(cè)與臨床試驗(yàn)前的倫理學(xué)審查不涉及產(chǎn)品設(shè)計(jì)要素的質(zhì)量審核，主要是安全性和有效性驗(yàn)證或評(píng)價(jià)，不易發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品內(nèi)在設(shè)計(jì)的質(zhì)量缺陷。一個(gè)正常使用、正常運(yùn)行但人體工效學(xué)設(shè)計(jì)存在缺陷的醫(yī)療器械產(chǎn)品用于臨床，仍然可以給人體造成傷害，為此中國(guó)也建立了醫(yī)療器械不良事件報(bào)告制度，但不能夠從根本上解決產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題。設(shè)計(jì)質(zhì)量是產(chǎn)品質(zhì)量決定要素，醫(yī)療器械產(chǎn)品研制涉及的安全性和可靠性設(shè)計(jì)沒(méi)有進(jìn)行倫理學(xué)審查的路徑或規(guī)定，是一個(gè)潛在的倫理隱患。

2 對(duì)策研究

2.1 制定臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)倫理公約

臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)是使用醫(yī)療器械臨床診斷與治療的依靠，其倫理缺陷的危害不但可能導(dǎo)致其本身的機(jī)制和功能的顯性或潛性退化，還會(huì)影響醫(yī)院倫理機(jī)制整體作用，給患者乃至社會(huì)造成危害。需要建立相應(yīng)的倫理約束機(jī)制來(lái)規(guī)范臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)行為。建立臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)倫理公約是維系醫(yī)療服務(wù)整體倫理秩序的基礎(chǔ)。一旦臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)失去倫理性制約，特別是部分醫(yī)療器械供應(yīng)商對(duì)醫(yī)護(hù)人員采取的非倫理性營(yíng)銷方式，甚至可能擾亂醫(yī)護(hù)人員的思想，最終損害患者利益和權(quán)益。制定臨床醫(yī)學(xué)工程倫理服務(wù)公約顯得必要而又緊迫。從臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)的學(xué)科屬性看，其倫理公約可以通過(guò)醫(yī)學(xué)工程全國(guó)性專業(yè)委員、省級(jí)專業(yè)委員會(huì)、軍隊(duì)系統(tǒng)專業(yè)委員會(huì)等制定并推廣實(shí)施，具體做法上可以通過(guò)入職簽約、集會(huì)宣誓、專題教育等方式，使得臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)倫理公約在醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員中入心、入腦。臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)倫理公約的形成，需要構(gòu)建相應(yīng)的倫理道德標(biāo)準(zhǔn)，使得其倫理公約具有公信力。

2.2 構(gòu)建臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)倫理道德標(biāo)準(zhǔn)

依靠醫(yī)療器械產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)對(duì)患者的診斷與治療是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的一個(gè)特點(diǎn)，臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)同樣在促進(jìn)患者健康、追求和促進(jìn)醫(yī)學(xué)目的的實(shí)現(xiàn)，構(gòu)建臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)倫理道德標(biāo)準(zhǔn)顯得十分重要。同時(shí)，臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)倫理道德責(zé)任規(guī)范應(yīng)朝著職業(yè)化的最高標(biāo)準(zhǔn)發(fā)展，并且醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員的地位和作用也能通過(guò)建立高標(biāo)準(zhǔn)的職業(yè)道德規(guī)范而提高。因此，建立其倫理規(guī)范應(yīng)首先考慮滿足臨床需求、維護(hù)患者健康權(quán)益和利益、實(shí)事求是、誠(chéng)實(shí)守信、不留隱患、保證患者及時(shí)診斷與治療、得利合理、突出質(zhì)量與安全等方面。具體內(nèi)容擬另文探討。

2.3 強(qiáng)化對(duì)醫(yī)療器械產(chǎn)品供應(yīng)商的倫理管理

2.3.1 建立醫(yī)療器械供應(yīng)商專業(yè)化許可機(jī)制

醫(yī)療器械產(chǎn)品的應(yīng)用關(guān)系到公眾健康和安全，營(yíng)銷又有重要的引導(dǎo)性，非專業(yè)性的營(yíng)銷需要加以制止。而醫(yī)療器械新產(chǎn)品需要通過(guò)營(yíng)銷方式使得醫(yī)務(wù)人員了解其臨床作用機(jī)制，醫(yī)療器械供應(yīng)商的專業(yè)化營(yíng)銷又至關(guān)重要。因此，對(duì)醫(yī)療器械供應(yīng)商進(jìn)行專業(yè)化許可成為一種必然要求，如核發(fā)醫(yī)療器械經(jīng)營(yíng)許可證時(shí)，要求醫(yī)療器械供應(yīng)商具有與營(yíng)銷產(chǎn)品一致的培訓(xùn)記錄，核查醫(yī)療器械供應(yīng)商醫(yī)學(xué)工程專業(yè)人員的數(shù)量能否滿足經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品的營(yíng)銷要求等。甚至可以探討依據(jù)專業(yè)能力和水平建立醫(yī)療器械供應(yīng)商等級(jí)制管理機(jī)制。

2.3.2 建立醫(yī)療器械產(chǎn)品營(yíng)銷人員倫理教育機(jī)制

由于醫(yī)療器械產(chǎn)品基于工程技術(shù)理論與知識(shí)進(jìn)行設(shè)計(jì)和生產(chǎn)，臨床醫(yī)護(hù)人員并不具備分析或辨別產(chǎn)品的能力，十分需要相應(yīng)專業(yè)營(yíng)銷人員的講解與推廣。營(yíng)銷人員實(shí)事求是并負(fù)責(zé)任地進(jìn)行產(chǎn)品講解與推廣，對(duì)醫(yī)護(hù)人員正確選擇產(chǎn)品具有重要的引導(dǎo)作用。建立醫(yī)療器械產(chǎn)品營(yíng)銷人員的倫理教育機(jī)制，對(duì)營(yíng)銷人員進(jìn)行醫(yī)學(xué)倫理教育，樹(shù)立對(duì)患者、對(duì)社會(huì)高度負(fù)責(zé)的態(tài)度，應(yīng)成為對(duì)醫(yī)療器械供應(yīng)商倫理管理基本內(nèi)容。

2.4 建立醫(yī)療器械產(chǎn)品研制(設(shè)計(jì))倫理審核機(jī)制

醫(yī)療器械產(chǎn)品設(shè)計(jì)者需要從患者角度充分考慮醫(yī)療器械的安全性和可靠性;醫(yī)學(xué)工程類科研項(xiàng)目的立項(xiàng)應(yīng)有倫理學(xué)專家或臨床人員審核其科研項(xiàng)目的倫理符合性。這兩者已經(jīng)是醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域課題研究和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)倫理學(xué)研究不能回避的。國(guó)家鼓勵(lì)醫(yī)療器械產(chǎn)品創(chuàng)新，發(fā)展民族醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)。醫(yī)療器械產(chǎn)品研制人員自身應(yīng)具有醫(yī)學(xué)倫理意識(shí)，懂得符合法律及倫理責(zé)任的設(shè)計(jì)和測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)，熟悉醫(yī)療器械產(chǎn)品研制倫理學(xué)審查的途徑。特別是醫(yī)療器械產(chǎn)品研制(設(shè)計(jì))人員對(duì)其產(chǎn)品可能出現(xiàn)的危險(xiǎn)、事故及濫用應(yīng)具有預(yù)見(jiàn)性，需要了解產(chǎn)品使用者的可能行為及使用產(chǎn)品的可能環(huán)境，并考慮如何提醒設(shè)備使用者錯(cuò)誤使用時(shí)可能出現(xiàn)的危險(xiǎn)及危害，如設(shè)計(jì)專用監(jiān)測(cè)軟件控制危險(xiǎn)值的上下限并報(bào)警等。醫(yī)療器械產(chǎn)品研制(設(shè)計(jì))人員需要認(rèn)真設(shè)計(jì)、測(cè)試，并能預(yù)測(cè)使用危險(xiǎn)和事故，從源頭控制存在的風(fēng)險(xiǎn)性。但是，現(xiàn)行醫(yī)學(xué)科研管理辦法，尚未制定醫(yī)療器械產(chǎn)品研制(設(shè)計(jì))和醫(yī)學(xué)工程科研立項(xiàng)的倫理審查要求。筆者認(rèn)為，制定醫(yī)療器械產(chǎn)品研制人員到醫(yī)院臨床實(shí)習(xí)的規(guī)定可能是個(gè)好方法，可以讓他們懂得醫(yī)療器械產(chǎn)品設(shè)計(jì)如何更加適用于臨床使用并取得好的診斷、治療效果，如何更加具有方便性、安全性和可靠性。

2.5 樹(shù)立醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員是健康服務(wù)隊(duì)伍成員的意識(shí)

不認(rèn)為醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員是健康服務(wù)隊(duì)伍的重要成員是其作用得不到重視的一個(gè)原因，也使得臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)面臨很多的醫(yī)學(xué)倫理方面的爭(zhēng)端，如醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員的倫理責(zé)任問(wèn)題。但是隨著大量、復(fù)雜醫(yī)療器械產(chǎn)品應(yīng)用于臨床， 特別是當(dāng)新的儀器、設(shè)備及方法被選擇或評(píng)價(jià)時(shí)，臨床醫(yī)護(hù)人員需要更多地聽(tīng)取醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員的意見(jiàn)，以正確評(píng)價(jià)相應(yīng)醫(yī)療器械產(chǎn)品對(duì)病情分析和治療的適應(yīng)性。還有如信息科工程師掌握有關(guān)患者技術(shù)數(shù)據(jù),這些信息可能影響患者治療進(jìn)程或者中斷一些瀕臨死亡的患者的治療。其次，醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員(含廠家工程師)還要培訓(xùn)醫(yī)生、護(hù)士及其他專門使用儀器的人員,甚至在醫(yī)療設(shè)備配置管理方面發(fā)表意見(jiàn)。盡管如此，以上方面仍然難以概括醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員所有可能的作用。這就意味著醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員在技術(shù)應(yīng)用的倫理和實(shí)踐兩方面需要承擔(dān)重要責(zé)任。不認(rèn)為醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員是健康服務(wù)隊(duì)伍的重要成員，不認(rèn)同他們?cè)诨颊呓】捣?wù)方面發(fā)揮的重要作用，不符合現(xiàn)代醫(yī)流。醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員應(yīng)加強(qiáng)自身能力建設(shè)，按照新的醫(yī)療器械使用質(zhì)量監(jiān)督管理辦法高標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施臨床醫(yī)學(xué)工程保障。更重要的是，國(guó)家有關(guān)衛(wèi)生政策改革、衛(wèi)生行業(yè)管理及醫(yī)學(xué)工程行業(yè)自身都應(yīng)該樹(shù)立醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員是健康服務(wù)隊(duì)伍的成員這樣一個(gè)基本意識(shí)，并明確其倫理責(zé)任。

3 結(jié)語(yǔ)

(1) 建立醫(yī)療器械產(chǎn)品倫理管理規(guī)范具有必要性：隨著生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)產(chǎn)業(yè)不斷發(fā)展，臨床使用醫(yī)療器械產(chǎn)品的范圍更加廣泛，成為實(shí)施診斷、治療基本依靠，臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)的內(nèi)涵將不斷延伸。應(yīng)建立醫(yī)療器械產(chǎn)品應(yīng)用倫理管理規(guī)范，強(qiáng)化臨床醫(yī)學(xué)工程服務(wù)的倫理管理，維護(hù)患者健康權(quán)益。

生物醫(yī)學(xué)工程倫理范文第2篇

據(jù)悉，對(duì)于腦的高級(jí)功能，諸如感知、運(yùn)動(dòng)控制、學(xué)習(xí)記憶、情緒、語(yǔ)言、意識(shí)等的認(rèn)識(shí)，可能會(huì)取得突破性的進(jìn)展。由于大腦是生物體內(nèi)結(jié)構(gòu)和功能最復(fù)雜的組織，需要從分子、細(xì)胞系統(tǒng)、全腦、和行為等不同層次進(jìn)行研究和整合，才有可能揭示其奧秘，復(fù)雜性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了我們目前的認(rèn)識(shí)能力。傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究對(duì)于解決人腦對(duì)復(fù)雜信息的獲取、處理與加工及高級(jí)認(rèn)識(shí)功能機(jī)制方面顯得蒼白無(wú)力，因此，在短時(shí)間內(nèi)還難以有較大的突破。

最近，美國(guó)科學(xué)家在腦科學(xué)研究中取得了一項(xiàng)進(jìn)展。他們發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室里制造的一個(gè)類似甜甜圈的東西，可以模仿腦組織的一項(xiàng)基本功能。這個(gè)圓圈的環(huán)狀部分由絲材料制成，圈里面填的是膠原蛋白凝膠。

生物工程師在培養(yǎng)皿中制成了相當(dāng)于原始灰質(zhì)和白質(zhì)的材料，其中用了大鼠神經(jīng)元，這些神經(jīng)元能通過(guò)圓圈中間的物質(zhì)相互交換信號(hào)。當(dāng)科學(xué)家讓重物掉到這個(gè)圓圈上，以模擬創(chuàng)傷性損傷時(shí)，這個(gè)三維大腦模型中的神經(jīng)元釋放出了化學(xué)信號(hào)和電信號(hào)，與受傷動(dòng)物的大腦釋放的信號(hào)類似。

專家們表示，這是科學(xué)家首次能在實(shí)驗(yàn)室里如此逼真地模仿大腦功能。如果研究人員能用人的神經(jīng)元重建這個(gè)模型，并提升到足以反映其他一些神經(jīng)系統(tǒng)功能的水平，這個(gè)模型可用于研究疾病，研究創(chuàng)傷情況和治療大腦，從而避免人體臨床試驗(yàn)的高費(fèi)用和倫理問(wèn)題。

該研究由美國(guó)塔夫茨大學(xué)生物工程系主任戴維?卡普蘭主持，于最近發(fā)表在《美國(guó)科學(xué)院院刊》上。這是用生物醫(yī)學(xué)工程手段制造器官―比如心臟、肺和肝臟―仿真模型的一個(gè)最新例子。

過(guò)去，研究人類大腦發(fā)育的工作大多依賴于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，或人死亡后獲取的大腦切片。以上兩種手段都有用，但都有局限性。卡普蘭研究小組的研究人員將絲制材料做成一個(gè)圓圈，在其中心添加了膠原蛋白凝膠。軸突從圓圈的一邊長(zhǎng)出來(lái)，通過(guò)替代白質(zhì)的凝膠，把信號(hào)發(fā)送給圓圈另一邊的神經(jīng)元。通過(guò)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子，科學(xué)家把這個(gè)類似腦的組織放在孵化器中，讓其存活了2個(gè)月，然后開(kāi)始在它上面做試驗(yàn)。

生物醫(yī)學(xué)工程倫理范文第3篇

學(xué)科融合;醫(yī)學(xué)教育;寄生蟲(chóng);腫瘤

學(xué)科融合是指在承認(rèn)學(xué)科差異的基礎(chǔ)上不斷打破學(xué)科界限，促進(jìn)學(xué)科間相互滲透、交叉的活動(dòng)。學(xué)科融合既是學(xué)科發(fā)展的趨勢(shì)，也是產(chǎn)生創(chuàng)新性成果的重要途徑［1］。作為醫(yī)學(xué)教育者，如何拓展學(xué)生的知識(shí)面、教育并督促學(xué)生掌握多學(xué)科知識(shí)，以適應(yīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要，是我們必須深入思考的問(wèn)題。

1學(xué)科融合信息在醫(yī)學(xué)教育中的重要性

隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的進(jìn)步、科技發(fā)展和醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變，學(xué)科交叉對(duì)醫(yī)學(xué)發(fā)展的推動(dòng)力更加顯著，學(xué)科融合信息在醫(yī)學(xué)教育中的重要性也日益凸顯。例如，隨著研究的深入，我們發(fā)現(xiàn)，疾病通常并不只對(duì)單一器官造成損傷，更多時(shí)候的表現(xiàn)卻是多系統(tǒng)、多器官受損，這遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了某個(gè)三級(jí)學(xué)科的單一研究范圍，若繼續(xù)從器官醫(yī)學(xué)的角度去解決問(wèn)題，則難免出現(xiàn)疏漏［2］。因而，學(xué)科交叉與融合已成為醫(yī)學(xué)教育的重要需求，我們必須加大學(xué)科融合信息在教學(xué)中的應(yīng)用力度和范圍，督促并幫助醫(yī)學(xué)生掌握多學(xué)科的知識(shí)，以適應(yīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要。

2學(xué)科融合信息在醫(yī)學(xué)教育中的應(yīng)用舉例

2．1寄生蟲(chóng)的抗腫瘤作用

某些人體寄生蟲(chóng)的存在不僅與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，甚至還具有抗腫瘤作用，這可能與以下幾方面機(jī)制有關(guān)。

2．1．1寄生蟲(chóng)本身的抗腫瘤作用

一方面，某些寄生蟲(chóng)的感染可阻斷腫瘤細(xì)胞周期而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，如人蛔蟲(chóng)提取物對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞增殖的抑制［3］，旋毛蟲(chóng)蟲(chóng)體蛋白對(duì)宿主體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制［4］;再如，瘧原蟲(chóng)對(duì)S180腹水癌細(xì)胞的抑制作用［5］，弓形蟲(chóng)對(duì)小鼠結(jié)腸癌ct26細(xì)胞及黑色素瘤的抑制［6－7］;另一方面，寄生蟲(chóng)能夠分泌一些抗腫瘤的物質(zhì)，對(duì)于某些腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的毒性，能夠引起該腫瘤細(xì)胞的調(diào)亡，例如阿米巴滋養(yǎng)體對(duì)于Hela細(xì)胞具有較強(qiáng)的毒性作用，能夠引起該腫瘤細(xì)胞的凋亡［8］。

2．1．2通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)抗腫瘤

寄生蟲(chóng)通過(guò)調(diào)節(jié)宿主免疫系統(tǒng)抗腫瘤的現(xiàn)象可見(jiàn)于蠕蟲(chóng)及原蟲(chóng)感染。如旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)能夠刺激感染小鼠NK細(xì)胞，進(jìn)而加強(qiáng)細(xì)胞毒性［9］;當(dāng)卵巢癌患者感染尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷型剛地弓形蟲(chóng)后，卵巢癌微環(huán)境中受到抑制的CD11c+抗原遞呈細(xì)胞會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨停黾恿薚細(xì)胞受體協(xié)同刺激分子CD80和CD86的表達(dá)水平，CD11c+抗原提呈細(xì)胞重新獲得了抗原遞呈能力，啟動(dòng)CD8+T細(xì)胞特異性應(yīng)答，引起效應(yīng)T細(xì)胞的抗腫瘤免疫應(yīng)答，進(jìn)而增強(qiáng)了對(duì)卵巢癌細(xì)胞的抑制效果［10］。

2．1．3寄生蟲(chóng)與腫瘤的共同分子結(jié)構(gòu)為抗腫瘤研究提供思路

由于腫瘤細(xì)胞可逃避機(jī)體的免疫監(jiān)控，抗腫瘤疫苗的研究一直舉步維艱。有研究表明，某些寄生蟲(chóng)具有和腫瘤相似的抗原表位，因而，對(duì)寄生蟲(chóng)免疫逃避機(jī)制的研究可為深入認(rèn)識(shí)腫瘤的免疫逃避機(jī)制提供新的思路。例如，腫瘤細(xì)胞表面黏蛋白型O－聚糖的結(jié)構(gòu)和數(shù)量的變化可導(dǎo)致腫瘤抗原特異性的改變，進(jìn)而引起腫瘤細(xì)胞抗原性和黏附能力的變化，加速腫瘤細(xì)胞向惡性增殖和轉(zhuǎn)移。因而，關(guān)于黏蛋白型O－聚糖的深入研究可為部分腫瘤的診斷和抗腫瘤藥物或疫苗研發(fā)提供依據(jù)。巧合的是，有些寄生蟲(chóng)細(xì)胞表面具有和腫瘤細(xì)胞表面相同的黏蛋白型O－聚糖結(jié)構(gòu)，這為探求寄生蟲(chóng)和腫瘤免疫逃避之間的聯(lián)系提供了可能，也為研究復(fù)雜的腫瘤免疫提供了幫助和借鑒［11］。

2．1．4抗寄生蟲(chóng)藥物的研究促進(jìn)抗腫瘤藥物的研究

研究發(fā)現(xiàn)，一些抗寄生蟲(chóng)藥物具有抗腫瘤的作用，而一些抗腫瘤藥物同樣可以抗寄生蟲(chóng)，這提示，這兩類藥物可能具有相同的藥物作用靶點(diǎn)。如組蛋白脫乙酰酶抑制劑Apicidin可通過(guò)結(jié)合組蛋白脫乙酸酶而導(dǎo)致組蛋白過(guò)度乙酞化，從而抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和增殖，并使腫瘤細(xì)胞凋亡、分化，巧合的是寄生蟲(chóng)也具有此類組蛋白，所以Apicidin還具有抗寄生蟲(chóng)的效果［12］。由此看來(lái)，寄生蟲(chóng)與腫瘤在某些方面有著極為相似的生命特征，因此，深入研究抗寄生蟲(chóng)藥物的作用機(jī)制，可有效促進(jìn)抗腫瘤藥物的研發(fā)。

2．2學(xué)科融合信息應(yīng)用于授課及學(xué)生的反映

2．2．1學(xué)科融合信息在授課中的應(yīng)用

為拓展學(xué)生的知識(shí)面、教育并督促學(xué)生掌握多學(xué)科知識(shí)，以適應(yīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要，我們?cè)诓桓淖儌鹘y(tǒng)教學(xué)方式的前提下，以專題講座的形式加入了有關(guān)寄生蟲(chóng)抗腫瘤的相關(guān)知識(shí)和研究進(jìn)展，為了考察教學(xué)效果，隨機(jī)挑選了部分同學(xué)進(jìn)行了問(wèn)卷調(diào)查，以觀察學(xué)生對(duì)講座的反映。

2．2．2學(xué)生對(duì)于學(xué)科融合信息應(yīng)用于授課的反映

本次調(diào)查共發(fā)放調(diào)查問(wèn)卷328份，全部收回。通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)90．55%(297/328)的學(xué)生表示非常喜歡這一授課形式，97．56%(320/328)的學(xué)生表示愿意接受更多的學(xué)科融合信息，可見(jiàn)學(xué)生對(duì)于學(xué)科融合信息應(yīng)用于教學(xué)的歡迎程度。但與此同時(shí)，也有學(xué)生對(duì)于考試產(chǎn)生了疑慮，分析發(fā)現(xiàn)，有83．23%(273/328)的學(xué)生擔(dān)心在期末考試中出現(xiàn)有關(guān)學(xué)科融合的考題。

3結(jié)語(yǔ)

從現(xiàn)代的醫(yī)學(xué)發(fā)展趨勢(shì)來(lái)看，學(xué)科融合在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域不僅僅停留在各傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)學(xué)科之間，醫(yī)學(xué)甚至還將在更廣泛的領(lǐng)域與數(shù)學(xué)、工學(xué)、理學(xué)、化學(xué)等學(xué)科相互滲透，從而派生出像人體工程學(xué)、醫(yī)學(xué)倫理學(xué)、生物醫(yī)學(xué)工程等邊緣學(xué)科，而這些交叉學(xué)科將成為醫(yī)學(xué)新發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)點(diǎn)和新課題的孕育區(qū)，為突破醫(yī)學(xué)發(fā)展瓶頸，擴(kuò)展醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的新天地具有十分重要的意義［13］。不容否認(rèn)，學(xué)科的交叉與融合是科學(xué)研究取得突破性進(jìn)展的重要途徑，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的許多重要突破也必將通過(guò)學(xué)科的交叉與融合來(lái)實(shí)現(xiàn)。這就對(duì)未來(lái)的醫(yī)學(xué)工作者提出了更高的要求，要適應(yīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的這一發(fā)展需要，我們必須從在校醫(yī)學(xué)生抓起，在教學(xué)中適時(shí)適量加入經(jīng)典的學(xué)科融合信息，提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，拓寬其知識(shí)面，因?yàn)橹挥惺煜ふ莆樟硕喾N學(xué)科知識(shí)背景，才能夠輕而易舉地將各種知識(shí)融匯交叉、進(jìn)而激發(fā)出創(chuàng)新的思想。總之，恰如其分的在教學(xué)中加入學(xué)科融合信息，對(duì)于培養(yǎng)復(fù)合型高素質(zhì)醫(yī)學(xué)人才而言，具有非常重要的實(shí)踐意義。

作者：姜鵬 王黎 張璽 張紫芳 劉若丹 崔晶 薛長(zhǎng)貴 王中全 單位：鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系

參考文獻(xiàn):

［1］胥秋．學(xué)科融合視角下的大學(xué)組織變革［J］．高等教育研究，2010，31(7):20－27．

［2］李紅濤，張金鐘，邱明才．醫(yī)學(xué)發(fā)展中的整體觀念與學(xué)科綜合［J］．醫(yī)學(xué)與哲學(xué):人文社會(huì)醫(yī)學(xué)版，2009，30(4):8－9．

［3］楊小軍．人蛔蟲(chóng)提取物抗腫瘤作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究［D］．南昌:南昌大學(xué)，2009．

［4］段玲欣，關(guān)學(xué)敏，張傳生，等．旋毛蟲(chóng)抗腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展［J］．中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2011，29(2):142－146．

［5］薛長(zhǎng)貴，楊勝利．感染瘧原蟲(chóng)小鼠對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制作用的實(shí)驗(yàn)觀察［J］．河南腫瘤學(xué)雜志，1997，10(2):90－92．

［6］高劍，葉彬，武衛(wèi)華，等．剛地弓形蟲(chóng)RH株速殖子協(xié)同VP-16體外殺傷小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞ct26的作用［J］．中國(guó)共患病學(xué)報(bào)，2010，26(8):720－724．

［7］徐軍，孫新，楊曉迪，等．致弱RH株弓形蟲(chóng)抗小鼠B16黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中國(guó)基層醫(yī)藥，2010，17(3):305－306．

［8］錢晻，張秀華，梅兵，等．棘阿米巴滋養(yǎng)體對(duì)Hela細(xì)胞的毒性作用［J］．中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2001，19(1):37－40．

［9］BanyJ，JaniakMK，BudzynskiW．Activityofnaturalkiller(NK)cellsinthecourseofexperimentaltrichinellosisinmice［J］．WiadParazytol，1992，38(3/4):117－126．

［10］BairdJR，F(xiàn)oxBA，SandersKL，etal．AvirulentToxoplasmagondiigeneratestherapeuticantitumorimmunitybyreversingimmunosup-pressionintheovariancancermicroenvironment［J］．CancerRes，2013，73(13):3842－3851．

［11］劉春亮，吳士良．黏蛋白型O－聚糖在人類腫瘤中的結(jié)構(gòu)異常及生物學(xué)功能［J］．生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2010，37(5):475－483．

生物醫(yī)學(xué)工程倫理范文第4篇

[關(guān)鍵詞] 軟骨細(xì)胞；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；移植；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

[中圖分類號(hào)] R392.33[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1673-7210（2008）08（b）-016-03

Study on rabbit bone marrow mesenchymal stem cells differentiation to the chondrogenic to transplant for repairing articular cartilage

LIANG Xiao-peng，TIAN li, LI Na, WANG Zhuo, TIAN Xiao-ye, FAN Ni-na

(Shenyang Medical College, Shenyang 110034, China)

[Abstract] Objective: To observe the differentiation effect of stem cells into chondrocytes by induced rabbit bone marrow mesenchymal stem cells(MSCs). Methods: Rabbit bone marrow mesenchymal stem cells were purified, and then cultured in inducing medium containing transforming growth factor-β1; MTT assay was employed to evaluate the proliferative activity of induced cells; immunohistochemical assay was used to detect the expression of type Ⅱ collagen; induced cells were transplanted into the knee of rabbit, and X-ray photography was employed to observe the repair and formation of cartilage. Results: MSCs could be effectively transformed into the chondrocytes by inducing medium, type Ⅱ collagen which was a specific extracellular matrix and necessary in the differentiation of MSCs into chondrocytes significantly increased, and the effects after transplantation were obvious. Conclusion: It is effective that MSCs are induced to repair articular cartilage after the transplantation. In summary, MSC is a possible ideal source of seed cells in cartilage tissue engineering.

[Key words] Chondrocytes; Mesenchymal stem cells; Transplantation; Transforming growth factor-β1

老年性骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)創(chuàng)傷等急、慢性疾病中，常因關(guān)節(jié)損傷導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨缺損。而各種原因造成的關(guān)節(jié)軟骨缺損，因自身缺乏有效的修復(fù)能力，損傷后常引起疼痛和關(guān)節(jié)功能障礙等。因此，關(guān)節(jié)軟骨損傷的修復(fù)一直是當(dāng)今國(guó)內(nèi)外學(xué)者極為關(guān)注的問(wèn)題。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)來(lái)源于中胚層，有較強(qiáng)的自我更新和增殖能力，且取材方便，易于培養(yǎng)，不涉及倫理道德等問(wèn)題，其最大的特點(diǎn)是能夠?qū)崿F(xiàn)個(gè)體化治療，可以冷凍保存以方便臨床使用,因而被認(rèn)為是組織工程理想的種子細(xì)胞。它在不同誘導(dǎo)條件下具有向中胚層組織細(xì)胞如成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等分化的能力[1-3]。而骨髓中存在大量的間充質(zhì)干細(xì)胞，成為開(kāi)展骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞研究最重要的來(lái)源[4]。作為軟骨組織工程的種子細(xì)胞，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為軟骨損傷的治療提供了廣闊的應(yīng)用前景[5-7]。本實(shí)驗(yàn)用含轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的誘導(dǎo)液培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞, 使其向軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化, 以期獲得向軟骨誘導(dǎo)效應(yīng)與促進(jìn)增殖效應(yīng)，然后將誘導(dǎo)后的細(xì)胞移植于白兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)，觀察移植后的效果，此法也為軟骨損傷修復(fù)提供新思路[8,9]。

1 材料與方法

1.1 材料

2～3月齡健康白兔；DMEM-F12液體培養(yǎng)基、胎牛血清、PBS液（Gibco公司）；胰蛋白酶、EDTA、青霉素、鏈霉素（北京原平皓生物技術(shù)有限公司）；人淋巴細(xì)胞分離液（天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司）；TGF-β1(Boehringer Mannheim公司)；鼠抗兔Ⅱ型膠原單克隆抗體(Neomaker公司)；地塞米松(Sigma公司)10 U/L；bFGF(Boehringer Mannheim公司) 10 g/L；維生素C(Sigma 公司)等。

1.2 方法

1.2.1 體外實(shí)驗(yàn)

1.2.1.1 骨髓MSCs的獲取、傳代培養(yǎng)2～3月齡的健康白兔(沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重2～2.5 kg，雌雄不限。采用全骨髓法分離培養(yǎng)MSCs，白兔處死后取長(zhǎng)松質(zhì)骨和長(zhǎng)骨，用咬骨鉗剪成碎塊，然后用吸管反復(fù)吹打，使骨塊中的骨髓基質(zhì)細(xì)胞充分溢出，500 轉(zhuǎn)/min離心6 min。棄上清，加入完全培養(yǎng)基(含10％胎牛血清、100 U/ml青霉素及100 g/ml鏈霉素)，反復(fù)吹打成單細(xì)胞懸液；以2×105/ml細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO2、飽和濕度孵箱內(nèi)孵育。4 d后首次全量換液，棄去大量的懸浮細(xì)胞，以后隔天換液。待細(xì)胞長(zhǎng)滿單層后，用0.025％ 的胰蛋白酶消化，以12傳代。取剛接種的第2代細(xì)胞，改用誘導(dǎo)培養(yǎng)液(完全培養(yǎng)基含地塞米松10 mol/L，維生素C 50 g/ml，p-甘油磷酸鈉10 mmol/L)培養(yǎng)，置37℃、5％CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。倒置顯微鏡下每天觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況。取第4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.1.2 MTT法測(cè)定MSCs貼壁率取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞消化傳代，以相同密度接種于96孔板中。2、4、8、24 h后換液，去除未貼壁細(xì)胞，添加新鮮培養(yǎng)基200 μl，四甲基偶氮唑鹽20 μl, 37℃ 孵育4～6 h。棄孔內(nèi)培養(yǎng)液, 每孔加入200 μl DMSO, 振蕩10 min, 吸出孔內(nèi)液體并放入新96孔板中,在酶標(biāo)儀上測(cè)定490 nm 波長(zhǎng)處各孔的吸光度值, 并對(duì)數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理[10,11]。以未換液組作為對(duì)照。

1.2.1.3 骨髓MSCs的體外誘導(dǎo)軟骨形成取第4 代MSCs , 胰酶消化, 以5×104/ml 細(xì)胞密度接種于24 孔板中，在含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)液中培養(yǎng)，并加入地塞米松10 U/L，bFGF 10 g/L，維生素C 50 mg/L，在37℃、5％CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)1周，換液2次。從第2周起用TGF-β1 10 g/L 替換bFGF，繼續(xù)培養(yǎng)3周，隨時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)變化并攝片[10－12]。分別于誘導(dǎo)的第3、6、9、12 天進(jìn)行MTT檢測(cè)，方法同上。并以同時(shí)培養(yǎng)的MSCs作為對(duì)照。

1.2.1.4 Ⅱ型膠原的表達(dá)制備實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞爬片，取出爬片后，以4％多聚甲醛固定，并經(jīng)氧化物酶阻斷溶液浸泡。正常山羊血清封閉，依次加入：一抗（鼠抗兔Ⅱ型膠原單克隆抗體），4℃過(guò)夜；二抗（生物素化羊抗鼠IgG）、鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物室溫孵育30 min。上述各步驟間均用PBS洗滌，然后顯色，脫水，透明, 封片，計(jì)算陽(yáng)性率[13－15]。

1.2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)取牛Ⅱ型膠原酸性溶液與兩倍濃度的培養(yǎng)液0.5 ml混合，分別加入上述誘導(dǎo)前后的兩種MSCs，終濃度為5×105 /ml，再加入約20 g/L 凍干人纖維蛋白原，充分溶解后加入凝血酶0.1 ml (含凝血酶約25 U)。放入37℃孵箱內(nèi)，5 min后即成為細(xì)胞載體復(fù)合物。分別將該復(fù)合物移植于白兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)（實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組各15例），3周后處死動(dòng)物并觀察培養(yǎng)結(jié)果。檢測(cè)方法：X線觀察，分別于術(shù)后4、6、8周時(shí)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，X線攝片觀察軟骨修復(fù)形成情況，重點(diǎn)觀察有無(wú)關(guān)節(jié)間隙狹窄。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表示差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MSCs的分離、培養(yǎng)

骨髓有核細(xì)胞接種48 h后開(kāi)始出現(xiàn)細(xì)胞附壁鋪伸，呈小的短梭形或三角形。第4、5天開(kāi)始形成典型的呈均勻分布的骨髓MSCs簇狀增生灶，且數(shù)量逐漸增多，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了根本變化；第1～4代細(xì)胞間的附壁和生長(zhǎng)速度無(wú)明顯區(qū)別，呈比原代更均勻的長(zhǎng)梭形，無(wú)馬蹄形細(xì)胞及懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)（圖1）。

2.2 MSCs貼壁率檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)MTT比色試驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞在490 nm波長(zhǎng)處的吸光度。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析, 由圖2可知，換液組與未換液組有明顯差異。顯微鏡下觀察，MSCs呈長(zhǎng)梭形，緊密排列。

2.3 誘導(dǎo)液對(duì)MSCs 增殖的影響

通過(guò)MTT比色試驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞在490 nm波長(zhǎng)處的吸光度。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析, 由圖3可知，誘導(dǎo)組與未誘導(dǎo)組有明顯差異。

2.4 Ⅱ型膠原的表達(dá)

以TGF-β1 濃度為10 g/L的誘導(dǎo)液誘導(dǎo)第4代MSCs 12 d ,大量MSCs變成圓形或多邊形,胞質(zhì)可見(jiàn)清晰密集的棕褐色顆粒。對(duì)照組MSCs呈長(zhǎng)梭形，胞質(zhì)未見(jiàn)棕褐色顆粒。圖4表示實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性細(xì)胞均值與對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞均值比較。

2.5 X線結(jié)果

定期行雙膝關(guān)節(jié)正側(cè)位X線攝片，觀察關(guān)節(jié)間隙改變及形成情況，重點(diǎn)觀察有無(wú)關(guān)節(jié)間隙狹窄情況(表1)。

A4、A6、A8、B4、B6、B8分別為第4、6、8周檢測(cè)的移植組和空白組

3 討論

關(guān)節(jié)軟骨在受到創(chuàng)傷后,難以自行修復(fù)。傳統(tǒng)的治療方法如軟骨下骨鉆孔術(shù)、軟骨移植、骨膜或軟骨膜移植、軟骨細(xì)胞移植等，因其修復(fù)組織以纖維軟骨為主,缺少正常透明軟骨的力學(xué)性能及耐用性,而不能取得滿意效果。應(yīng)用組織工程方法修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損展示了令人鼓舞的前景。種子細(xì)胞是組織工程化軟骨形成的首要條件。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是來(lái)源于骨髓的一群非造血干細(xì)胞,在不同誘導(dǎo)條件下具有向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞分化的潛能。MSCs因具有易于從骨髓中分離和體外大量擴(kuò)增純化、供區(qū)損傷小、便于自體移植、在適宜的體內(nèi)或體外條件下可分化形成軟骨組織等特點(diǎn),而被認(rèn)為是軟骨組織工程最有希望的種子細(xì)胞來(lái)源之一。

本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用密度梯度離心及貼壁培養(yǎng)法分離MSCs，經(jīng)密度梯度離心分離得到的單核細(xì)胞中，經(jīng)反復(fù)傳代擴(kuò)增，最終獲得成分單一的細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本研究中所培養(yǎng)的第4代MSCs，其形態(tài)為單一的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞群。本研究的重點(diǎn)是MSCs向軟骨細(xì)胞的定向誘導(dǎo), 并將其移植于白兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1) 能顯著刺激軟骨細(xì)胞的增生、分裂和分化，因此本實(shí)驗(yàn)采用含轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的誘導(dǎo)液誘導(dǎo)MSCs向軟骨分化。以含10 g/L TGF-β1的誘導(dǎo)液誘導(dǎo)第4代MSCs 12 d后,大量MSCs變成圓形或多邊形,胞質(zhì)可見(jiàn)清晰密集的棕褐色顆粒。由于Ⅱ型膠原主要存在于軟骨中,因此被作為MSCs分化為軟骨的主要特異性蛋白。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未誘導(dǎo)組比較,誘導(dǎo)后的MSCs中Ⅱ型膠原表達(dá)量增多,差異有顯著性。在體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)定期行雙膝關(guān)節(jié)正側(cè)位X線攝片，觀察到移植組和空白組的關(guān)節(jié)間隙改變及形成有明顯的不同，移植組的無(wú)關(guān)節(jié)間隙狹窄結(jié)果在第6周可達(dá)80％，可見(jiàn)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)后移植修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨是有效的。

地塞米松、維生素C、p-甘油磷酸鈉誘導(dǎo)液可有效誘導(dǎo)MSCs向軟骨細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化, 且骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨分化所需的特異性細(xì)胞外基質(zhì)Ⅱ型膠原明顯升高,移植后效果明顯，因此骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有可能成為軟骨組織工程較理想的種子細(xì)胞來(lái)源。

隨著基因工程、材料工程等技術(shù)向細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的滲透與交叉,MSCs研究將不斷深入,相信在不久的將來(lái)它有可能成為臨床醫(yī)生修復(fù)軟骨損傷的得力工具。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李亮華.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成軟骨的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2006,19(2):161-164.

[2]盧華定,蔡道章,秦驥,等.Ⅰ型膠原負(fù)載骨髓基質(zhì)細(xì)胞修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損[J].中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志,2006,21(6):452.

[3]趙秀娟,智建生.關(guān)節(jié)鏡下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合纖維蛋白封閉劑治療膝關(guān)節(jié)軟骨缺損[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐雜志,2007,16(6):411-413.

[4]葛薇,姜文學(xué),李長(zhǎng)虹.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合纖維蛋白封閉劑體內(nèi)構(gòu)建可注射性組織工程軟骨[J].中國(guó)修復(fù)重建外科雜志,2006,20(2):139-143.

[5]王軍，胡蘊(yùn)玉.創(chuàng)傷骨科微機(jī)圖象分析系統(tǒng)的建立與應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)，1992，8(3):7.

[6]王軍,劉亞平,張春禮.計(jì)算機(jī)視頻圖象處理技術(shù)在動(dòng)態(tài)生物醫(yī)學(xué)圖像研究中的應(yīng)用[J].中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，1994,13(3):135.

[7]Cook SD, Rueger DC. Osteogenic Protein-1, biologyandapplications[J]. Clin Orthop,1996,324:29.

[8]朱如森,張其清.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞于軟骨組織工程的應(yīng)用[J].國(guó)際生物醫(yī)學(xué)工程雜志,2007,30(4):209-213.

[9]李亮華,李奇,林荔軍.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外構(gòu)建纖維蛋白膠軟骨模塊[J].中國(guó)臨床康復(fù),2006,10(5):4-6.

[10]賀明,付勤,王廣斌.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞的分化[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2007,11(19):1673-

8225.

[11]同志超,王坤正，陳君長(zhǎng)，等.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)軟骨細(xì)胞表型的觀察[J].中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志,2007,22(10):832-834.

[12]黃定強(qiáng),楊大鑒,黎萬(wàn)榮.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建人工軟骨的實(shí)驗(yàn)研究3[J].西部醫(yī)學(xué),2006,18(1):15-17.

[13]Simonsen JL, Ros ada C, Serakinci N, et al. Telomerase expression extends the proliferative life-span and maintains the os teogenic potential of human bone marrow s tromal cells [J]. Nat Biotechnol,2002,20:592-596.

[14]Wang WG, Lou SQ, Ju XD, et al. In vitro chondrogenesis of human bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells in monolayer culture: activation by transfection with TGF-beta 2[J]. Tissue Cell,2003,35(1):69.

[15]Shi S, Gronthos S, Chen S, et al. Bone formation by human postnatal bone marrow stromal stem cells is enhanced by telomerase expression[J]. Nature Biotechnol, 2002,20:587-591.

生物醫(yī)學(xué)工程倫理范文第5篇

[關(guān)鍵詞] 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；腫瘤；模擬微重力

[中圖分類號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2016）01（c）-0008-05

Study of simulated microgravity affecting antitumor response of mesenchymal stem cells against A549 transplantation tumor

LI Jing1 CHEN Jun2 LI Xiuyu1 NIU Lufang1

1.Department of Traditional Chinese Medicine， PLA Navy General Hospital， Beijing 100048， China； 2.Department of Acupuncture and Massage， Shaanxi University of Chinese Medicine， Shaanxi Province， Xianyang 712046， China

[Abstract] Objective To estimate the whole cell antigens （WCAs） of mesenchymal stem cells （MSCs） cultured in different gravity can generate different immune response against cancer in mice which induced by lung cancer cell line A549. Methods The MSCs was isolated and cultured adherent cells from marrow and a 2-dimensional clinostat （2D clinostat） was used to keep cells in continuous 2D rotation at a speed of 30 r/min around the horizontal axis， to mimc the microgravity （MMG）， and the normal gravity （NG） was used as control. And then MSCs was to irradiate to X-ray （15 Gy） to get the WCAs. The experiment group （MMG group） was immunized with WACs （once/3 d， 2 weeks） and then the mice were challenged with A549 cells； the control mice immunized subcutaneously with PBS control （PBS group）， MSCs-NG control （NG group） and A549 control （A549 group）， mice were monitored for their tumor growth by measure the diameter； then the weight and volume was plotted； the expression of PCNA was monitored by immunohistochemisty. Results A well-established lung cancer （A549） model was established， MMG could improve the immune responses against A549 lung carcinoma （P < 0.05）. The A549 group had strongest inhibit effect， while the PBS group had the biggst tumor， the tumor of MMG group and NG group were found beginning to grow until 6 d； and the size in MMG group was smaller than NG group （P < 0.05）； the weight of tumor were measured on 12 d， it showed that the weight of NG group was （458.7±21.6） g， while in MMG was （315.6±18.5） g； the resist effet in MMG group was bigger than NG group （P < 0.05）. HRP stain showed MMG could down-regulated the PCNA expression （P < 0.05）. Conclusion Immunization of with MSCs getting WCAs can suppress tumor growth， MMG can enhance this suppressing effect， it can be observed PCNA expression down， the further immune mechanism need more exploring.

[Key words] Mesenchymal stem cells； Cancer； Modeled microgravity

有關(guān)腫瘤發(fā)生“胚胎”屬性的認(rèn)識(shí)由來(lái)已久，“cancer”源于古希臘語(yǔ)，意味著“anaplasia（返祖）”，其內(nèi)涵就是“to from backwards（回到起點(diǎn)）”。去分化（dedifferentiation）屬性，指某種情況下，一些細(xì)胞失去它原本所在組織的結(jié)構(gòu)和功能，成為一個(gè)具有未分化細(xì)胞特征的細(xì)胞，而具備這種特性的細(xì)胞往往都是腫瘤細(xì)胞[1]。正是基于此設(shè)想，一百多年來(lái)，研究人員嘗試采用胚胎組織進(jìn)行裂解獲得瘤苗抗原，評(píng)估其對(duì)移植瘤抑瘤效果并取得初步結(jié)論[2]，即干細(xì)胞或胚胎組織的粗抗原可產(chǎn)生類似腫瘤疫苗的作用。本研究組早前也初步摸索，發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）獲得全細(xì)胞抗原（whole cell antigens，WCAs）可以產(chǎn)生抑瘤作用[3-4]。進(jìn)一步評(píng)估發(fā)現(xiàn)，通常條件下MSCs瘤苗的抑瘤效率低，這可能將成為制約瓶頸有待突破。因此，探索可以提高全細(xì)胞瘤苗免疫原性的方法或策略顯得尤為迫切。本研究采用模擬微重力（MMG）干預(yù)MSCs全細(xì)胞抗原后進(jìn)行免疫接種，評(píng)估比較不同重力模式下MSCs的WCAs的抑瘤作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

BALB/c系小鼠（合格證號(hào)：軍KS-2012-0004，軍事醫(yī)學(xué)科院動(dòng)物中心）；CO2恒溫培養(yǎng)箱（Thermo 140型，美國(guó)HERA cell），普通離心機(jī)（HDL-40B型，成都科學(xué)儀器廠），2D回轉(zhuǎn)儀（中國(guó)科學(xué)院），臺(tái)式低溫高速離心機(jī)（Labofuge 400R型號(hào)，德國(guó)Heraeus），倒置顯微鏡（CKX31型，日本Olympus）；低糖DMEM（美國(guó)Hyclone），胎牛血清（美國(guó)Hyclone），PCNA-鼠單抗（美國(guó)Abcom），辣根過(guò)氧化物酶（HRP）-二抗（北京中杉公司）。

1.2 方法

1.2.1 MSCs、A549培養(yǎng)與全細(xì)胞抗原的制備

1.2.1.1 MSCs 全骨髓貼壁法培養(yǎng)MSCs，6周齡小鼠的股骨和脛骨，10%FBS-低糖DMEM沖出骨髓，接種于培養(yǎng)瓶里，24～48 h后去懸浮，每3～4天換液，直至需要傳代。

1.2.1.2 人肺腺癌A549細(xì)胞 從液氮罐中取出A549細(xì)胞凍存管，放入37℃水浴鍋中解凍，1000 r/min離心5 min，PBS吹打、離心后，以10%FBS+5%RPMI-1640培養(yǎng)，2～3 d換液，直到需要傳代。

1.2.1.3 MSCs全細(xì)胞抗原制備 X線照射裂解法獲得抗原，調(diào)整3～5代A549細(xì)胞密度為1×106，于培養(yǎng)皿中行X線照射，強(qiáng)度為15 Gy，時(shí)間30 s；照射后的抗原4℃保存不超過(guò)6 h。

1.2.2 CCK8細(xì)胞活力檢測(cè)

在96孔板中接種濃度為2×104個(gè)/孔的2種細(xì)胞（MMG與NG分別培養(yǎng)的MSCs）懸液，置于培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃，5%CO2）；接種細(xì)胞后分別于第3、6、9、12天加入10 μL CCK8溶液；培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h；酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。

1.2.3 MMG干預(yù)

采用2D回轉(zhuǎn)模擬微重力培養(yǎng)條件[5-6]，MSCs細(xì)胞分為MMG組與正常重力（NG）對(duì)照組，MMG組細(xì)胞上回轉(zhuǎn)儀上模擬失重（經(jīng)計(jì)算以30 r/min為最佳效果），在此回轉(zhuǎn)條件下重力及切應(yīng)力對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的影響會(huì)降至最低[7]。MSCs長(zhǎng)至融合后，消化細(xì)胞接種于蓋玻片上，隨后置于6孔培養(yǎng)板中，調(diào)整細(xì)胞密度為2×105個(gè)/孔；貼壁后上回轉(zhuǎn)倉(cāng)，將爬片插入到特制的Fixing鐵架上，每個(gè)鐵架相應(yīng)放入4個(gè)玻片，置于小室，加入培養(yǎng)基（37℃，10%低糖DMEM）；擰緊蓋子安裝至回轉(zhuǎn)器上，整個(gè)回轉(zhuǎn)系統(tǒng)放置在 37℃恒溫培養(yǎng)箱，以30 r/min旋轉(zhuǎn)回轉(zhuǎn)48 h。NG對(duì)照組所有操作相同，即爬片后入小室，但小室不上回轉(zhuǎn)器。

1.2.4 移植瘤荷瘤造模及實(shí)驗(yàn)分組

選擇3～4周齡雄性小鼠，每組6只。依據(jù)免疫應(yīng)激抗原的不同分為4組：PBS組、A549組（A549裂解獲得WACs）、MMG組（MMG干預(yù)后MSCs裂解獲得WACs）、NG組（NG干預(yù)后MSCs裂解獲得WACs），實(shí)驗(yàn)組為MMG組，余3組為對(duì)照。NG組與A549組小鼠每3天接受1次皮下注射瘤苗刺激（抗原液加PBS共2 mL），2周后（共5次）進(jìn)行腫瘤荷瘤造模。PBS組每3天接受1次皮下注射2 mL的PBS，2周后荷瘤造模。整體實(shí)驗(yàn)流程詳見(jiàn)圖1。

圖1 實(shí)驗(yàn)流程圖

1.2.5 A549皮下移植造模及腫瘤測(cè)量

1.2.5.1 造模 獲得復(fù)蘇后3～4代A549細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106接種小鼠上肢下方（腋窩下）皮膚。

1.2.5.2 測(cè)量 按皮下腫瘤體積及形狀進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，接種后分別于3、6、9、12 d觀察腫瘤增長(zhǎng)，測(cè)量最長(zhǎng)徑與最短徑，計(jì)算腫瘤體積，公式為V=1/6πab2（a為長(zhǎng)徑，b為短徑），單位為毫米（mm）。并在12 d處死小鼠，切下腫瘤，電子秤稱量腫瘤的重量，單位為克（g）。

1.2.6 HE染色及PCNA的表達(dá)

12 d獲取腫瘤組織，固定、脫水、包埋、切片。

1.2.6.1 HE染色 切片蒸餾水漂洗入蘇木精染色，酸水及氨水中分色；自來(lái)水沖洗過(guò)蒸餾水；分別入酒精中脫水，伊紅染色液染色；脫水、透明、封固。

1.2.6.2 免疫組化 二甲苯脫蠟，入3%H2O2浸泡10 min抗原修復(fù)，5%BSA封閉，加一抗，4°C過(guò)夜；PBS沖洗，加上HRP標(biāo)記二抗，然后37°C孵育半小時(shí)；顯色、蘇木精復(fù)染、脫水、封片。

1.2.6.3 結(jié)果觀察 倒置顯微鏡下，伊紅淡染示細(xì)胞漿，胞核被藍(lán)色復(fù)染記一個(gè)完整細(xì)胞，在此基礎(chǔ)上記錄HRP標(biāo)記（褐色沉淀）記錄陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，于10倍下觀察，分別取3個(gè)視野后計(jì)數(shù)平均數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 14.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMG干預(yù)MSCs的細(xì)胞形態(tài)和增殖情況

在NG組（正常對(duì)照），爬片1d即可見(jiàn)較多細(xì)胞貼壁，呈紡錘形和多角形，可見(jiàn)細(xì)胞核；而MMG組采用MMG干預(yù)后細(xì)胞出現(xiàn)“圓形”改變，細(xì)胞間距增大，排列稀疏。見(jiàn)圖2。本研究采用CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力，于第3、6、9、12天分析OD值，具體見(jiàn)圖2；提示MMG可影響細(xì)胞增殖。

2.2 MMG上調(diào)MSCs的WCAs抑瘤作用

本研究分別獲得NG及MMG條件下MSCs的WCAs，以WCAs刺激小鼠獲得免疫應(yīng)激模型，同時(shí)以A549細(xì)胞及PBS行實(shí)驗(yàn)對(duì)照；其中陽(yáng)性對(duì)照組的WCAs抑制最強(qiáng)。3 d時(shí)，4組均未觀察到明顯的腫瘤產(chǎn)生。6 d時(shí)，A549組未觀察到明顯的腫瘤產(chǎn)生，PBS組體積[（45.5±16.4）mm3]，MMG組[（19.03±6.5）mm3]，NG組[（26.4±9.2）mm3]，與NG組比較，PBS組增大（P < 0.05），MMG組減小（P < 0.05）；與MMG組比較，PBS組與NG組均增大（P < 0.05）。9 d時(shí)，A549組未有腫瘤產(chǎn)生，PBS組體積[（83.5±12.6）mm3]，MMG組[（26.7±5.9）mm3]，NG組[（57.7±10.2）mm3]，與NG組比較，PBS組明顯增大（P < 0.05），MMG組明顯減小（P < 0.05）；與MMG組比較，PBS與NG組均增大（P < 0.05）。12 d時(shí)，A549組腫瘤體積[（6.03±1.21） mm3]，PBS組體積[（138.7±9.4）mm3]，MMG組[（41.9±8.1）mm3]，NG組[（79.7±12.4）mm3]；與A549組比較，其余組別移植瘤均增大（P < 0.05）；與PBS組比較，各組體積均減小（P < 0.05）；與NG組比較，PBS組明顯增大（P < 0.05），MMG組與A549組明顯減小（P < 0.05）；與MMG組比較，A549組較小（P < 0.05），PBS組與NG組均增大（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

12 d處死小鼠切下移植瘤進(jìn)行稱重，PBS組[（892.3±10.6）g]，NG組[（458.7±21.6）g]，MMG組[（315.6±18.5）g]，A549組[（114.2±16.7）g]，與A549組比較，其余組別移植瘤均增大（P < 0.05）；與PBS組比較，各組體積均減小（P < 0.05）；與NG組比較，PBS組明顯增大（P < 0.05），MMG組與A549組明顯減小（P < 0.05）；與MMG組比較，A549組較小（P < 0.05），PBS組與NG組均增大（P < 0.05）。見(jiàn)圖3。

表1 MMG對(duì)MSCs瘤苗抑瘤體積的影響（mm3，x±s）

注：與PBS組比較，#P < 0.05；與NG組比較，P

與PBS組比較，#P < 0.05；與NG組比較，P < 0.05；與MMG組比較，P < 0.05；與A549組比較，*P < 0.05

圖3 MMG對(duì)MSCs瘤苗抑瘤12 d質(zhì)量的影響

2.3 MMG抑制移植瘤區(qū)PCNA的表達(dá)

獲取12 d的腫瘤組織，石蠟包埋切片后行PCNA組化染色（圖4a），并HE染色，可以看到均勻分布的腺癌細(xì)胞，胞漿紅染（圖4c）；其表達(dá)均數(shù)為：PBS組為（122.3±0.1）個(gè)，A549組為（31.6±0.1）個(gè)，NG組為（77.5±0.1）個(gè)，MMG組為（60.2±0.1）個(gè)。與PBS組比較，其他組PCNA細(xì)胞均降低（P < 0.05；與NG組比較，MMG組、A549組PCNA細(xì)胞降低（P < 0.05），PBS組升高（P < 0.05）；與MMG比較，A549組PCNA表達(dá)稍低（P < 0.05），NG組與PBS組均升高（P < 0.05）；與A549組比較，其他組表達(dá)均升高（P < 0.05）。見(jiàn)圖4。

a

a：PCNA的HRP染色圖（10×）；b：柱狀圖分析，與PBS組比較，#P < 0.05，與NG組比較，P < 0.05，與MMG相比，P < 0.05，與A549組比較，*P < 0.05；c：HE染色（10×）

圖4 瘤體PCNA表達(dá)情況

3 討論

腫瘤組織的異質(zhì)性與其去分化屬性高度相關(guān)，系指在某種情況下，一些細(xì)胞失去它所在組織的結(jié)構(gòu)和功能，呈現(xiàn)未分化特征，這些屬性其實(shí)就是胚胎屬性[9]。病理學(xué)家經(jīng)常通過(guò)評(píng)估比較靶細(xì)胞與本體組織的胚胎屬性標(biāo)識(shí)該腫瘤的分化程度，腫瘤細(xì)胞越接近于胚胎屬性其惡性程度往往越高[10]。正是這種腫瘤起源的探索[12]，人們猜想采用胚胎組織或可實(shí)現(xiàn)腫瘤的預(yù)防接種，然而此類探索一直未得到有效突破，直到近年來(lái)干細(xì)胞理念和技術(shù)的進(jìn)步，使得人們真正地論證了干細(xì)胞瘤苗的腫瘤預(yù)防接種作用。

2009年Li等[2]首次采用胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell，ESs）作為免疫種子，發(fā)現(xiàn)其對(duì)結(jié)腸癌株CT26的移植瘤有明顯的抑制作用；隨后又有學(xué)者發(fā)現(xiàn)ESs對(duì)肺腺癌細(xì)胞的移植瘤也有明顯的抑制作用。進(jìn)一步的研究表明，該抑制機(jī)制可能與T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（cytotoxic T lymphocyte response，CTLs）上調(diào)高度相關(guān)[11]。由于倫理及培養(yǎng)條件的顯著ES地腫瘤全細(xì)胞疫苗的研究面臨許多挑戰(zhàn)。

近兩年，本項(xiàng)目組對(duì)成體干細(xì)胞――MSCs的免疫抑瘤作用進(jìn)行了探索，發(fā)現(xiàn)其同樣具有抑瘤接種作用[3]。研究證實(shí)，MMG可使得細(xì)胞呈現(xiàn)巨大改變，那么是否可以改變其WACs特性呢？本文旨在分析MMG作用下，MSCs的WACs作用改變的情況。本項(xiàng)目之所以構(gòu)建A549組源瘤模型，是源于20世紀(jì)腫瘤WCAs“專職”免疫抑制的假說(shuō)[10]，采用干細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行比較一方面可以間接比較MSCs的抑瘤作用；另對(duì)于腫瘤的預(yù)防可能更具有潛在的臨床意義。

在重力消失的情況下，組織、細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生與正常地球重力作用下迥異的結(jié)構(gòu)與功能，并且研究人員已經(jīng)利用這種差異推行在組織工程學(xué)中[16]，而其模擬方式，無(wú)論是一維、二維或三維，都是選擇合適的速度進(jìn)行回轉(zhuǎn)來(lái)最大程度地減輕重力的影響[17-18]；本研究團(tuán)隊(duì)長(zhǎng)期進(jìn)行細(xì)胞空間動(dòng)力的研究，以二維回轉(zhuǎn)培養(yǎng)為主，反復(fù)驗(yàn)證其結(jié)果可靠[6，8]。本次研究中，將MSCs采用MMG干預(yù)48 h后通過(guò)X線裂解獲得WCAs；較之正常對(duì)照組，MMG組的抑瘤作用提高。本研究顯示早期接種3 d的腫瘤增殖無(wú)明顯改變，但是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)至第6天時(shí)其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。有學(xué)者曾分析了ESs腫瘤增殖改變情況，發(fā)現(xiàn)疫苗接種后隨著時(shí)間延長(zhǎng)，腫瘤抑制愈明顯；并深入分析不同腫瘤負(fù)荷程度下干細(xì)胞瘤苗抑瘤的差異，認(rèn)為低負(fù)荷組腫瘤抑制效果更為顯著[15]。本研究切下移植瘤分析其重量和形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)質(zhì)量的改變與體積的改變同步，提示腫瘤內(nèi)部尚未存在空洞或液化等干擾因素，但是需要進(jìn)一步采用小動(dòng)物影像攝像進(jìn)一步證實(shí)[16]。PCNA在細(xì)胞增殖的啟動(dòng)上起重要作用[17]，是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的敏感指標(biāo)[18-20]，本研究發(fā)現(xiàn)，MMG組PCNA的表達(dá)較NG對(duì)照組更低，提示腫瘤抑制率提高。本研究初步分析MMG可提高M(jìn)SCs全細(xì)胞抗原的抑瘤能力并可直接抑制細(xì)胞增殖。

在獲得這些初步數(shù)據(jù)后，更多的疑問(wèn)擺在面前，MSCs抑瘤的作用是否也與CTL作用有關(guān)？MMG是否也是通過(guò)該途徑的變化發(fā)揮其作用的？MMG是否有長(zhǎng)效抑瘤的作用，是否能觸發(fā)機(jī)體長(zhǎng)效的免疫“記憶”。因此，此后本項(xiàng)目組將針對(duì)這些突出問(wèn)題開(kāi)展進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Mendoza PR，Specht CS，Hubbard GB，et al. Histopathologic grading of anaplasia in retinoblastoma [J]. Am J Ophthalmol，2015，159（4）：764-776.

[2] Li Y，Zeng H，Xu RH，et al. Vaccination with human pluripotent stem cells generates a broad spectrum of immunological and clinical responses against colon cancer [J]. Stem Cells，2009，27（12）：3103-3111.

[3] 李靜，陳軍，李秀玉.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞全細(xì)胞抗原干預(yù)肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549移植瘤生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，11（22）：4-8.

[4] 李靜，陳軍，錢彥方，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞全細(xì)胞抗原干預(yù)移植瘤生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015， 15（4）：610-613，621.

[5] 李靜，陳軍，錢彥方，等.紅花苷對(duì)模擬微重力下細(xì)胞遷移的作用[J].中醫(yī)雜志，2013，54（1）：55-58.

[6] Braunecker S，Douglas B，Hinkelbein J. Comparison of different techniques for in microgravity-a simple mathematic estimation of cardiopulmonary resuscitation quality for space environment [J]. Am J Emerg Med，2015，33（7）：920-924.

[7] 李靜，陳軍，錢彥方，等.模擬微重力對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的黏著斑形成及整合素表達(dá)的研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，13（29）：5625-5630.

[8] Stadtfeld M，Maherali N，Breault DT，et al. Defining molecular cornerstones during fibroblast to iPS cell reprogramming in mouse [J]. Cell Stem Cell，2008，2（3）：230-240.

[9] Jabari S，Meissnitzer M，Quint K，et al. Cellular plasticity of trans-and dedifferentiation markers in human hepatoma cells in vitro and in vivo [J]. Int J Oncol，2009，35（1）：69-80.

[10] Kuppers R. The biology of Hodgkin's lymphoma [J]. Nat Rev Cancer，2009，9（1）：15-27.

[11] Yaddanapudi K，Mitchell RA，Putty K，et al. Vaccination with embryonic stem cells protects against lung cancer：is a broad-spectrum prophylactic vaccine against cancer possible [J]. PLoS One，2012，7（7）：e42289.

[12] 季曉昕，李鐸，李非.微重力反應(yīng)器在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)：生物醫(yī)學(xué)工程分冊(cè)，2004，27（3）：161-164.

[13] 杜挺媛，張舒，曹新生，等.流體剪切應(yīng)力對(duì)模擬微重力下MG-63細(xì)胞骨架系統(tǒng)的影響[J].航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程，2012，25（4）：235-238.

[14] 戴鐘銓，李瑩輝，丁柏，等.回轉(zhuǎn)對(duì)COL1A1-EGFP基因表達(dá)的影響[J].中國(guó)科學(xué)：C輯，2004，34（1）：68-74.

[15] Dong W，Du J，Shen H，et al. Administration of embryonic stem cells generates effective antitumor immunity in mice with minor and heavy tumor load [J]. Cancer Immunol Immunother，2010，59（11）：1697-1705.

[16] Savai R，Langheinrich AC，Schermuly RT，et al. Evaluation of angiogenesis using micro-computed tomography in a xenograft mouse model of lung cancer [J]. Neoplasia，2009，11（1）：48-56.

[17] Whittom A，Villarreal A，Soni M，et al. Markers of apoptosis induction and proliferation in the orbitofrontal cortex in alcohol dependence [J]. Alcohol Clin Exp Res，2014，38（11）：2790-2799.

[18] Birey F，Aguirre A. Age-dependent Netrin-1 signaling regulates NG2+ glial cell spatial homeostasis in normalgray matter [J]. J Neurosci，2015，35（17）：6946-6951.

[19] Whittom A，Villarreal A，Soni M，et al. Markers of apoptosis induction and proliferation in the orbitofrontal cortex in alcohol dependence [J]. Alcohol Clin Exp R，2014，38（11）：2790-2799.