心肌康顆粒黃芪甲苷含量測定

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【摘要】目的建立高效液相-蒸發(fā)光散射檢測法測定心肌康顆粒中黃芪甲苷的含量。方法采用色譜柱：KromasilODSC18（5μm，150mm×4.6mm），流動相：乙腈-水（32：68），流速：2.6ml/min。結(jié)果黃芪甲苷在1.8792～18.7920μg之間呈良好的線性關(guān)系，回收率為96.7%（RSD=1.68%）。結(jié)論方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】黃芪甲苷；高效液相色譜；蒸發(fā)光散射檢測法

【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofastragalosideIVinXinjikanggranulesbyhighperformanceliquidchromatographywithevaporativelightscatteringdetection（HPLC-ELSD）.MethodsThedeterminationwascarriedoutonaKromasilODSC18（150mm×4.6mm，5μm）withmobilephaseofacetonitrile-water（32:68）.Theflowratewas2.6ml/min.ResultsTherewasagoodlinearrelationshipintherangeof1.8792～18.7920μg.Theaveragerecoverywas96.7%withRSD1.68%.ConelusionThemethodissimple,highlyrepeatableandaccurate,anditcanbeusedtocontrolthequalityofthepreparation.

【Keywords】astragalosideIV;HPLC;ELSD

心肌康顆粒由黃芪、當(dāng)歸、丹參、紅花等中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰，活血解毒的功效。方中黃芪具有補氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌等功能［1］，而黃芪甲苷為黃芪主要有效成分，因而能夠反映心肌康顆粒的主要作用。原標(biāo)準(zhǔn)其含量測定采用薄層色譜法測定，方法重現(xiàn)性差，測定結(jié)果不準(zhǔn)確。本文參考《中國藥典》2005年版一部及相關(guān)文獻，建立了心肌康顆粒中黃芪甲苷含量測定的HPLC-ELSD法。結(jié)果顯示本法準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

1儀器與試劑

1.1儀器Agilent1100高效液相色譜儀；Alltech2000型蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）。

1.2試藥黃芪甲苷對照品：中國藥品生物制品檢定所，批號：0781-200311（供含量控制用）。甲醇、乙腈為色譜用試劑，其他試劑均為分析純；水為重蒸水；心肌康顆粒（青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司提供）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性檢測條件色譜柱：KromasilODSC18，（5μm，150mm×4.6mm）；流動相：乙腈-水（32：68）；柱溫：40℃；流速：1.0ml/min；ELSD檢測器漂移管溫度：105℃，霧化氣體為壓縮空氣，流速：2.6ml/min；理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4000。色譜圖見圖1、圖2。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每毫升中含0.5mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇100ml回流提取4h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20ml,合并正丁醇液，濃縮，用1%氫氧化鈉溶液洗滌2次，每次20ml，棄去氫氧化鈉溶液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml,棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得［3］。

2.3線性關(guān)系考察精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇配制成每毫升含黃芪甲苷0.9396mg的溶液，分別精密量取1、2、4、6、7ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，稀釋成濃度為0.09396，0.18792，0.37584，0.56376，0.65772mg/ml的溶液，分別精密吸取20μl，注入高效液相色譜儀，依法測定，以黃芪甲苷峰面積常用對數(shù)值為縱坐標(biāo)Y，濃度常用對數(shù)值為橫坐標(biāo)X，進行線性回歸，得回歸方程：

LgA=1.6518LgC+6.8322r=0.9998。

結(jié)果表明黃芪甲苷在1.8792～18.7920μg之間呈良好的線性關(guān)系。

2.4重復(fù)性試驗精密稱取同一供試品5份，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣10μl,測得峰面積值，計算黃芪甲苷含量平均值為0.587mg/g，RSD=0.53%。

2.5穩(wěn)定性試驗精密稱取供試品，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液20μl，在0、1、12、24、48、72h內(nèi)測定，共6次，測得黃芪甲苷峰面積積分值的平均值為2883506，其RSD=1.26%。結(jié)果表明，本方法的供試品溶液在3天內(nèi)穩(wěn)定。

2.6回收率試驗采用加樣回收法，精密稱取已知含量的心肌康顆粒（批號：070101）適量，分別精密加入濃度為0.5064mg/ml的黃芪甲苷對照品溶液2ml，按“2.2.2”項下提取，測定，計算回收率，所得回收率為96.7%，RSD=1.68%。結(jié)果見表1。表1回收率試驗結(jié)果

2.7樣品含量測定取不同批號的心肌康顆粒，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，精密吸取對照品溶液10、20μl，供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算。樣品含量測定結(jié)果見表2。

3討論

因黃芪甲苷紫外吸收較差，是末端吸收，若用紫外檢測器檢測，則其靈敏度低，干擾較大，重現(xiàn)性較差，尤其復(fù)方制劑，測定其含量更加困難，因此，此方表2樣品含量測定面的報道較少，一般采用薄層掃描法，而薄層掃描法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較差，且操作繁瑣。近幾年來，HPLC-ELSD法測定黃芪甲苷含量的文獻有報道，其靈敏度、穩(wěn)定性及重現(xiàn)性均能符合含量測定的要求。本試驗即參考了文獻中的條件，考察了蒸發(fā)光檢測器的漂移管溫度和霧化器氣體流量對黃芪甲苷的響應(yīng)值的影響，通過分別逐漸改變漂移管溫度和霧化器氣體流量，記錄峰面積與信噪比的變化，選擇了最優(yōu)的溫度和載氣的流速［2］。

【參考文獻】

1國家藥典委員會.中華人民共和國藥典，2005年版一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，212-213.

2鄢立新.不同廠家黃芪注射液中黃芪甲苷的含量考察.中成藥，2004，26（8）：626-628.

3陳岳蓉.HPLC-ELSD測定芪鹿益腎片中黃芪甲苷的含量.中成藥，2004，26（8）：629-631.