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      仙魚湯對小鼠Lewis肺癌作用

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      仙魚湯對小鼠Lewis肺癌作用

      表1各組Lewis肺癌小鼠的瘤體質量及抑瘤率比較(略)

      Table1Comparisonoftumormassweightandtumorinhibitoryrateindifferentgroups

      統計方法:單因素方差分析;①P<0.05,②P<0.01,與模型組比較

      2.3各組細胞凋亡率及細胞周期分析仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組小鼠lewis肺癌細胞凋亡率均高于模型組(P<0.05或P<0.01),各仙魚湯組隨著劑量的增大,凋亡率亦逐漸增加。仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組處于G0/G1期細胞的比例均高于模型組,其中仙魚湯高劑量組、CTX組與模型組比較,差異有顯著性意義(P<0.01)。仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組處于S期細胞的比例均顯著性低于模型組(P<0.05或P<0.01),呈現明顯的G0/G1期阻滯現象。仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組處于G2/M期細胞的比例與模型組比較,差異無顯著性意義(P>0.05)。結果見表2、圖1。

      2.4光鏡觀察模型組癌細胞大小和形態很不一致,可見瘤巨細胞;癌細胞核體積增大,細胞核和細胞漿比例增大,核的大小、形狀、染色不一,可見巨核、多核,核染色深,核染色質呈粗顆粒狀,分布不均勻;核仁肥大,數目增多,核分裂相增多,可見不對稱性、多極性及頓挫性等病理性核分裂相,間質內淋巴細胞少見(圖2-a)。CTX組可見大片壞死,間質見較多的淋巴細胞等炎細胞浸潤,纖維組織反應性增生(圖2-b)。仙魚湯各劑量組可見癌巢內壞死面積增大,間質可見淋巴細胞等炎細胞浸潤,可見較多的細胞凋亡小體(圖2-c、d、e)。

      2.5各組bcl2染色強度指數凋亡相關基因bcl2的陽性產物主要位于細胞漿,可見大量的細胞漿棕黃色顆粒染色。仙魚湯各劑量組bcl2的染色強度指數均顯著低于模型組(P<0.01),并呈劑量依賴性,而CTX組與模型組比較差異無顯著性意義(P>0.05)。結果見表3、圖3。

      表2各組小鼠Lewis肺癌組織的細胞凋亡率及細胞周期分析(略)

      Table2Comparisonofcellapoptosisratioandcellcycleanalysisindifferentgroups

      統計方法:單因素方差分析;①P<0.05,②P<0.01,與模型組比較

      a.模型組b.CTX組c.仙魚湯低劑量組d.仙魚湯中劑量組e.仙魚湯高劑量組

      圖1各組凋亡率檢測流式細胞圖譜比較(略)

      Figure1Resultsofcellapoptosisratiodetectedbyflowcytometerindifferentgroups

      a.模型組b.CTX組c.仙魚湯低劑量組d.仙魚湯中劑量組e.仙魚湯高劑量組

      圖2各組腫瘤組織形態比較(HE染色,×400)(略)

      Figure2Morphologicalchangesoftumorcellsunderlightmicroscopeindifferentgroups(HEstaining,×400)

      a.模型組b.CTX組c.仙魚湯低劑量組d.仙魚湯中劑量組e.仙魚湯高劑量組

      圖3各組bcl2陽性表達比較(免疫組化,×400)(略)

      Figure3Positiveexpressionofbcl2indifferentgroupsdetectedbyimmunohistochemicalmethod

      表3各組bcl2染色強度指數比較(略)

      Table3Comparisonofstainingintensityindexofbcl2indifferentgroups

      統計方法:單因素方差分析;①P<0.01,與模型組比較

      3討論

      多數學者認為,肺癌發生發展的中醫病機可以用"痰、瘀、虛"3個字高度概括。其中正虛是肺癌發生的基礎,《醫宗必讀》云:"積之成者,正氣不足,而后邪氣踞之。"正虛又以脾虛為主,"脾為生痰之源,肺為貯痰之器"。正是脾虛導致痰濁內生,進一步血停成瘀,瘀血內生,痰瘀內阻,蘊積肺部,日久而發為本病。

      廣州中醫藥大學陳銳深教授從肺癌病因病機出發,以健脾清肺、化痰祛瘀為治療大法,自擬了治療肺癌的經驗方"仙魚湯"。方中君藥為黨參,具有補中益氣、健脾益肺、生津養血的功效,為補益肺脾氣之要藥。黃芪配合黨參,以補肺脾之氣;浙貝母清熱化痰、開郁散結;貓爪草散結消腫;三七片化瘀散結止痛,共為臣藥。仙鶴草收斂止血、解毒抗癌;魚腥草清熱解毒、消癰排膿;天冬養陰清肺生津;山海螺解毒消腫、排膿祛痰;山慈菇清熱解毒、化痰消腫散結;守宮散結止痛,共為佐藥。炙甘草調和諸藥,為使藥。綜合全方,扶正祛邪,攻補兼施,使祛邪而不傷正,共奏健脾清肺、化痰祛瘀之功效。

      腫瘤的發生和發展不僅與腫瘤細胞的增殖、分化異常有關,而且與細胞凋亡的調控失常有關。人類細胞的凋亡機制十分復雜,目前已鑒定出了構成凋亡途徑的多種成分,揭示出凋亡是受多種基因調控的,例如p53、p16、cmyc、bcl2、bax等相關基因均參與了細胞凋亡的調控[7]。bcl2是一種凋亡相關基因,被激活的bcl2基因的主要作用是抑制細胞凋亡,下調bcl2基因的表達,對腫瘤細胞有顯著的生長抑制作用。bcl2可能通過阻斷凋亡的公共信號傳遞通路(如抑制線粒體釋放細胞色素C)達到抑制或阻斷多種細胞及細胞系的細胞凋亡過程。隨著該基因蛋白產物的過度表達,使得細胞增殖與凋亡的平衡發生紊亂,從而阻斷細胞凋亡的最后共同通道,從而抑制細胞凋亡,導致癌變[8-11]。

      本研究通過動物移植性腫瘤實驗法探討仙魚湯對Lewis肺癌生長及腫瘤細胞凋亡的作用。結果表明,仙魚湯具有一定的抗腫瘤作用,而且其抑瘤作用隨著劑量的增加而增強。從HE染色的病理切片中發現,不同劑量仙魚湯組可見癌巢內壞死面積增大,間質可見較多的淋巴細胞等炎細胞浸潤,可見較多的細胞凋亡小體。進一步采用流式細胞儀檢測凋亡率,結果表明仙魚湯具有促進小鼠Lewis肺癌細胞凋亡的作用,并且隨著劑量的增加作用也逐漸增強。仙魚湯各劑量組處于G0/G1期細胞的比例均高于模型組,處于S期細胞的比例均低于模型組,呈現明顯的G0/G1期阻滯現象,提示仙魚湯可能使G1期細胞不能通過細胞周期檢測點進入S期,從而發生G0/G1期阻滯,阻斷DNA復制,干擾腫瘤細胞周期正常進行,以起到抑制腫瘤的作用。免疫組化檢測結果顯示,仙魚湯各劑量組bcl2蛋白表達均顯著低于模型組,并隨著仙魚湯劑量的加大,腫瘤組織bcl2的染色強度指數也逐漸降低。本研究實驗結果提示仙魚湯可能通過降低bcl2表達的途徑促進腫瘤細胞凋亡,從而發揮抗腫瘤作用,對臨床用藥具有一定的指導意義。

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