丹參酮ⅡA乳劑對小鼠腦缺血保護作用

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【摘要】目的觀察丹參酮ⅡA對小鼠腦缺血、腦缺血再灌注損傷的保護作用。方法采用小鼠斷頭模型、小鼠腦卒中模型、小鼠腦缺血再灌注模型，觀察丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠斷頭后存活時間、喘氣次數，小鼠腦卒中后的神經行為，小鼠腦缺血再灌注后腦內SOD活性、MDA含量的影響。結果丹參酮ⅡA能延長小鼠斷頭后的存活時間、增加斷頭后的喘氣次數，改善腦卒中小鼠的神經行為，提高腦缺血再灌注損傷后小鼠腦組織中SOD酶活性,降低MDA含量。結論丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠腦缺血及腦缺血再灌注損傷具有保護作用。

【關鍵詞】丹參酮ⅡA注射乳劑；腦缺血；腦缺血再灌注；自由基

Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofTanshinoneⅡAagainstbraininjuryinmiceinducedbycerebralischemiaorcerebralischemia-reperfusion.MethodsMicewerepretreatedwithTanshinoneⅡAatthedoseof7.8,3.9,1.9mg/kgi.v.respectively.Themodelsofmicecerebralischemiaandcerebralischemia-reperfusionweremade.Thesurvivaltime,gaspingtimebydecapitationandbehaviorwereevaluated.TheSODactivityandMDAcontentweremeasured.ResultsTanshinoneⅡAcouldsignificantlyincreasethesurvivaltimeandgaspingtime,improvethebehaviorofmice.TanshinoneⅡAcouldalsoenhancethesuperoxidedismutase(SOD)activityandreducethemalonyldialdehyde(MDA)contentinmicebraintissueatthesametime.ConclusionTanshinoneⅡAhasprotectiveeffectagainstbraindamageinducedbycerebralischemiaandcerebralischemia-reperfusioninmice.

Keywords:TanshinoneⅡAemulsion;cerebralischemia;cerebralischemia-reperfusion;freeradical

丹參酮（tanshinone）是丹參的有效活性成分，包括丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB等脂溶性成分和丹酚酸甲、丹酚酸乙、丹參素等水溶性成分，其中丹參酮ⅡA為丹參酮中含量最高的活性成分［1］。為了解決丹參酮ⅡA不溶于水，成鹽后注射給藥不易透過血腦屏障，將丹參酮ⅡA做成微乳制劑，在不改變其理化性質的基礎上，保持其原有的脂溶性和穿過脂雙層生物膜、透過血腦屏障的能力。本文利用小鼠腦缺血及腦缺血再灌注模型，觀察丹參酮ⅡA對腦缺血的保護作用，探討其作用機制。

1材料

1.1藥品與試劑

受試品：丹參酮ⅡA注射乳劑（0.3mg·mL-1，批號200606，北京中?？悼萍奸_發公司提供，臨用前用5％葡萄糖注射液稀釋至所需濃度），MDA、SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2儀器

CL770全自動生化分析儀，日本島津公司生產。

1.3動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體質量18～24g，中國醫科大學第二臨床學院醫學試驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號SCXK［遼］2003-0013號。

1.4統計方法

所有實驗數據均以±s表示，采用SPSS11.0統計軟件進行方差分析（onewayANOVA），組間比較采用LSD檢驗,以P<0.05為差異有顯著性。

2方法

2.1小鼠斷頭喘氣模型［2］取體質量18～22g的昆明種小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。實驗組分別尾靜脈丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9、1.9mg/kg；陽性對照組尾靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液5.2mg/kg；空白對照組尾靜脈注射等容量的5％葡萄糖注射液20mL/kg。給藥10min后，迅速從小鼠雙耳后頸部斷頭，觀察小鼠斷頭喘氣的時間及喘氣次數，實驗結果進行LSD檢驗。

2.2小鼠腦卒中模型［3］

取體質量22～24g的雄性昆明種小鼠50只，分組、給藥同實驗“2.1”。給藥后10min小鼠用乙醚淺麻醉，分離兩側頸總動脈及迷走神經，左側頸總動脈連同迷走神經下置一根直徑為0.2mm的細鋼絲，結扎后將鋼絲抽出，右側頸總動脈及迷走神經完全結扎。術后按下述指標觀察缺血1.5h內卒中指數，每0.5小時記錄1次，并計算3次分數總和。評分標準：

（1）毛蓬亂豎起，動作緩慢或活動減少，觸耳反應加強，眼瞼下垂，腦卒中指數各1分，總計4分；

（2）頭翹起，眼球固定，后肢向外向后伸展，轉圈，抽搐或痙攣，腦卒中指數各3分，總計15分；

（3）昏迷，腦卒中指數為6分。

2.3小鼠腦缺血再灌注模型［4］

取體質量22～24g的雄性昆明種小鼠60只，隨機分6組，每組10只，實驗組與陽性對照組分組與給藥劑量同實驗“2.1”，假模型組及模型組尾靜脈注射等容量的5％葡萄糖注射液20mL/kg。給藥后10min，各組小鼠用乙醚麻醉，分離兩側頸總動脈并結扎，導致腦缺血，結扎20min后松開，恢復頸總動脈血流，造成缺血再灌，小鼠手術后縫合并繼續飼養。連續給藥3d，每天1次。假模型組只分離雙側頸總動脈而不結扎。末次給藥后30min將各組小鼠處死，取腦，試劑盒測定MDA的含量及SOD酶活性。

3結果

3.1丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠斷頭喘氣時間及次數的影響

丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9mg/kg可以顯著延長小鼠斷頭后的存活時間，增加喘氣次數，與空白對照組比較差異顯著（P<0.05,P<0.01）,見表1。

3.2丹參酮ⅡA注射乳劑對缺血小鼠腦卒中指數的影響

由表2可見，小鼠腦卒中后腦卒中指數明顯增加；丹參酮ⅡA預防給藥后，小鼠腦卒中指數明顯降低，丹參酮各劑量組腦卒中指數與模型組比較差異均有顯著性（P<0.05,P<0.01）。

表1丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠斷頭喘氣時間及次數的影響（略）

Tab.1TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononsurvivaltimeandgaspingtimebydecapitationinmice

與5%葡萄糖組比較：*P<0.05;**P<0.01

表2丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血小鼠腦卒中指數的影響（略）

Tab.2TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononstrokeindexinmicesubjectedtocerebralischemia

與模型組比較：*P<0.05;**P<0.01

3.3丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血再灌注損傷小鼠腦內SOD活性及MDA含量的影響

由表3可見，小鼠在腦缺血再灌注后，腦組織SOD活性明顯下降，MDA含量顯著升高，模型組與假手術組比較差異顯著（P<0.01）。與模型組比較，丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9mg/kg的腦組織SOD活性顯著上升（P<0.05,P<0.01），MDA含量極顯著下降（P<0.01）。提示丹參酮ⅡA注射乳劑能使腦缺血再灌注小鼠的腦組織過氧化程度受到明顯抑制，提高機體清除自由基的能力。

表3丹參酮ⅡA注射乳劑對缺血再灌注小鼠腦SOD和MDA的影響（略）

Tab.3TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononMDAcontentandSODactivityinmicesubjectedtocerebralischemia/reperfusion

與模型組比較：*P<0.05;**P<0.01

4討論

當腦缺血發生時，腦微血管系統中存在的谷胱甘肽-谷胱甘肽還原酶自由基清除系統的含量下降［5］，再灌注時則導致微血管周圍有大量自由基產生。氧自由基則會損傷血腦屏障，促進腦水腫的形成、血管內皮黏附分子的表達以及白細胞和血小板與內皮的黏附，加重再灌注后腦微循環障礙［6］，因此自由基損傷也是防治腦缺血再灌注損傷的機理之一。MDA是自由基與生物膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化的產物，它的含量反映氧自由基的水平及脂質過氧化的程度。此外，MDA可與核酸及蛋白質發生交聯，使之受損。因此，MDA不僅是細胞損傷的代謝產物，而且也是導致細胞損傷的機制之一。SOD是一種金屬酶，此酶可以催化超氧自由基發生岐化反應，能夠清除氧自由基，保護生物膜免受自由基的攻擊損害。

本次試驗采用小鼠斷頭、小鼠腦卒中及小鼠腦缺血再灌注模型，研究丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血及腦缺血再灌注損傷的保護作用。試驗結果表明，丹參酮ⅡA注射乳劑可以升高腦組織內SOD酶的活力，降低MDA含量，延長小鼠斷頭后的存活時間、增加喘氣次數，改善腦卒中小鼠的神經行為。由此可見，丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血及腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護作用，該作用的產生可能與其抑制脂質過氧化反應有關。

【參考文獻】

［1］華守明，管耘園，金恒，等.復方丹參對血漿內皮素和一氧化氮濃度的影響［J］.中國臨床藥理學與治療學，2000，5：363-364.

［2］張忠華，朱萱萱，陳德芝，等.腦血通顆粒對腦缺血的試驗研究［J］.時珍國醫國藥，2003，14（12）：12-13.

［3］馮亦璞.小鼠腦缺血后的能量代謝改變和藥物的作用［J］.藥學學報，1989，24（2）：89.

［4］王軍，張薇，王玉升，等.生姜水提物對腦缺血再灌注損傷的保護作用［J］.中醫藥臨床雜志，2007，19（1）：23-24.

［5］李冬亮，王小引，韓華，等.孕酮對缺氧缺血新生大鼠腦組織SOD和GSHPx活性的影響［J］.中國藥理學通報，2007，23（2）：276-277.

［6］宋寧寧，魏欣冰，劉睿，等.丹皮酚對原代培養的大鼠皮質和海馬神經元缺糖缺氧再灌注損傷的保護作用［J］.中國藥學雜志，2007，42（5）：353-357.