免疫組化技術

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免疫組化技術范文第1篇

【關鍵詞】細胞學；薄層液基涂片；染色；方法

【Abstract】objective:tostudythin-layerliquid-basedcytologysmeartechniqueanditsapplicationinImmunohistochemistry.Method:theuseofcomparativesignificanceoftwogroupsofcases.Therewere74casesofadenocarcinomainpleuralfluid-basedsmear.40casesofsmallcell,resolvingphlegmandsmear.Secondgenerationusingimmunohistochemicaltwo-stepdye.Results:adenocarcinomainpleuraleffusionandascitesinathinlayerofliquidbasedsmearsadenocarcinomacellsonCEAantibody-negative,Mesothelialcellstomesothelin(mesothelin)antibody-positivesmallsmallcellundifferentiatedcarcinomacellandresolvingphlegmsmearonCHAantibody-positive.OnLCAantibody-positivelymphocytes.Conclusion:ImmunohistochemicalAntigen-antibodyreactionisahighdegreeofspecificityandsensitivityofbiochemicalreactions,toaspecificantigenrecognitionandstrong.Incells,subcellularleveldetectionAntigenmoleculeisdifficultforotherbiotechnologyandalternative.Onthecytologyhasbroadapplicationprospects.

【Keywords】Cytology;thinlayerliquidbasedsmears;dyeing;method.

【中圖分類號】R156.3【文獻標識碼】B【文章編號】1005-0515(2011)12-0308-02

免疫組化是用特異性抗體對細胞或組織內的抗原進行定性、定位或定量檢測。凡能作為抗原半抗原的物質，都可用免疫組化方法檢測，近年免疫組化技術在病理組織學上廣泛應用，但少見于細胞學薄層液基涂片的報道。本文總結細胞學薄層液基涂片的免疫組化染色實驗，探討免疫組化技術在細胞學上的應用。

1材料與方法

1.1材料：選用有對比意義的細胞學檢材，記有腺癌性胸腹水薄層液基涂片74例，小細胞未分化癌涂片40例，試劑選用邁新公司Elivsionplus免疫組化試劑盒。

1.2方法：免疫組化二代二步染色法：1）胸腹水、痰薄層液基涂片、固定、潮干、PBS液洗滌。2）胰酶消化修復抗原，膠酶濃縮劑與稀釋液按1:3滴加，37℃孵育15分鐘，PBS液洗滌。3）阻斷：滴加3%過氧化氫液，37℃孵育15分鐘，以阻斷內源性過氧化物酶活性，PBS液洗滌。4）免疫反應，抗體依需要自選，滴加后37℃孵育1小時，PBS液洗滌。5增強反應，滴加增強劑，37℃孵育30分鐘，PBS液洗滌.6）標記：滴加酶標抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30分鐘，PBS液洗滌。7）顯色，滴加新制DAB液，鏡下觀察，顯色適當后放入蒸餾水中終止反應。8）蘇木素復染，中性樹膠封固。

2結果

經反復實驗總結出以上染色方法，可使陽性細胞液基涂片中的陽性細胞呈黃棕色或棕褐色。74例腺癌性胸腹水離心涂片中，變形未圓形、卵圓形，聚集成團的深染的腺癌細胞，與增生間皮細胞在鏡下難以區別；通過免疫組化染色，腺癌細胞對CEA抗體顯陽性，間皮細胞對mesothelin（間皮素）抗體顯陰性。40例小細胞未分化癌痰涂片中，小細胞未分化癌細胞略大于淋巴細胞，圓形、卵形、短小梭形，核深染，與大淋巴細胞難以鑒別。通過免疫組化染色，小細胞未分化癌細胞對CHA抗體顯陽性，淋巴細胞對LCA抗體顯陰性，這樣可以鑒別開來。

免疫組化技術范文第2篇

一、滿族面具藝術的文化內涵

滿族面具藝術是薩滿教觀念的物化形態和表現形式，蘊含著北方文化的神韻，是宗教、民俗、藝術等多重文化的積淀。它具有原始藝術的形態特征，可謂人類歷史文化的“活化石”。

滿族面具藝術的出現與北方漁獵游牧生活直接關聯。《璦琿十里長江俗記》記載：“白熊皮蓋面，狼伙不敢進”，“以鹿獐頭骨遮身，可得其仔”。可以說狩獵經驗與對自然的敬畏心理統一起來，就誕生了祭祀中的面具形式。往昔，滿族先世女真人適應狩獵生產的特點而舉行的春、秋常例祭，就是戴面具祭神娛神的儀式(郭淑云《原始態文化――薩滿教透視》，上海人民出版社2001年版，第575―586頁)。

滿族面具是薩滿教的核心――“萬物有靈”觀念的具體體現。滿族面具藝術的類型與人類原始崇拜的類型一致，同樣分為自然崇拜、圖騰崇拜、祖先崇拜三種。自然崇拜類型的滿族面具體現了滿族先民對自然現象的敬畏心理，在恐懼與期望中創造了無數幻念中的神靈，盛行以自然崇拜為主要內容的部落大祭，如火祭、雪祭、海祭等。例如黑龍江省愛輝縣五大家子滿族徐姓家族至今保存一枚星神面具，族人尊稱“烏西哈恩都力”，為星祭時主祭薩滿所佩戴(同上，第586頁)。圖騰崇拜類型的滿族面具源于祖先相信自己與植物動物有特殊聯系，同時相信植物動物是生命迫切依賴的食物([法]列維?斯特勞斯《圖騰制度》，上海人民出版社2002年版，第11頁)，是生命力的源泉。出于食物崇拜心理，滿族先民把花、蘑菇、蛇、鷹等作為崇拜對象，例如滿族面具中有花神(伊爾哈思都哩)、蛇神(七彩梅合)等形象。這些都是采集與狩獵生活遺留在滿族面具藝術中的原始印記。隨著生產力的發展，人們認識到對本氏族有重要貢獻的“英雄人物”的重要性，認為他們死后“靈魂不散”，依然守護著本氏族，因此出現禮儀繁縟的祖先崇拜祭祀。在滿族面具類型中祖先崇拜類型具有非常重要的地位，數量眾多，如大罕祖先神、七乳媽媽(那丹忽渾赫赫)、始母神(佛朵赫赫、佛多媽媽)等都是為人熟知的滿族面具形象。其中始母神后演化為保嬰神，主司氏族子嗣繁衍。在滿族古代大祭中，主祭只有戴上始母神面具才有權傳達神諭(郭淑云《原始態文化――薩滿教透視》第586頁)。

二、滿族面具的審美特征

滿族面具從形制上看有戴式、掛式、替身式(較小，用后即焚)。遺存的面具圖稿是由毛筆或鉛筆畫成的簡要底稿。一般情況下，薩滿完成祭祀儀式后不敢保留面具的圖稿，都要燒掉，唯恐受到神靈責罰。但長白山寧安地區滿族鑲黃旗富察氏家族族長傅英仁卻是一位勇于革新的薩滿，他保留了許多珍貴的面具圖稿資料(王松林《中國滿族面具藝術》，遼寧民族出版社2002年版，第51頁)。這份藏品為我們展示了滿族面具的鮮明特征。

有些學者在總結滿族面具的造型特征時，大多概括為：象征性、擬態性、幻化性、夸張性、符號性等，但這些審美特征并不能說明滿族面具的獨特性。其實宗教祭祀儀式中的滿族面具形態具有不同于一般民間面具的審美特征，我們可以通過以下三個方面進行研究：

(一)夸張局部特征的造型手段與樸素的受眾審美心理之間的有機統一

滿族面具圖案或神授或師傳，它們是宗教祭祀圣物，具有絕對的神圣性。宗教性是其基本屬性，其審美標準是“靈驗”，而不是為藝術而藝術的觀賞品。例如醫神(天花媽媽)就是滿族用來放在出水痘的小孩床前祛痘治病的。“天花媽媽”是滿臉黑點的婦女形象。在人們看來，如果這個面具治好的孩子越多，就越靈驗，也就證明畫得最好。族眾的審美心理是樸素的，并不對藝術性提出要求，而是在面具“功能符號”明顯的情況下，要求其靈驗。他們眼中的“功能符號”就是面具夸張的局部特征。從“靈驗”的功利心理出發，面具夸張的局部特征是與其功能相適應的。如“七乳媽媽”(那丹忽渾赫)突出，木神(毛恩都哩)面頰覆蓋樹葉，白芍藥花神頭頂白花，金神(愛新恩都哩)面鑲“大錢兒”，雨神(阿嘎恩都哩)滿臉雨滴。

(二)突出原始印記的圖案造型與神秘的審美體驗之間的有機統一

滿族面具圖案類型反映了薩滿教自然崇拜、圖騰崇拜、祖先崇拜的發展過程，同時反映了遠古社會的生活風貌。植物神、動物神、祖先神等圖案造型體現了先民在與大自然共處中認識自然、描繪自然的心理歷程，其中包括許多源于漁牧生活的實踐經驗。滿族面具的整體圖案造型存留濃郁的遠古遺風，具有神秘的象征性，原始印記是其視覺傳達的特色。這種顏料繪制的面具圖案從功能上看，優勢是顯著的(孫運來《黑龍江流域民族的造型藝術》，天津古籍出版社1990年版，第25頁)。獨特的圖案造型既貼近生活又傳達出因時代久遠而不可言說的神秘氣息。這種神秘性與薩滿佩戴面具所要傳達給族眾的、與神溝通的宗教體驗不謀而合。在祭祀祈禱中圖案的原始印記是引導族眾“入境”的有利因素。

滿族面具圖案造型的原始印記表現了人們對自然神靈崇拜的虔誠的宗教心理。與神接近、與神溝通是人們所向往的，而滿族面具向人們傳達的審美體驗也恰恰是與神靈共處的體驗。為什么滿族面具多為善相?因為人們希望與人相處的都是善良的神靈。滿族面具體現了北方民族的樸素理想和樂觀性格。從遺存的實物來看，面具以神靈為主，少有猙獰丑陋的鬼怪形象，這又與滿族神話中描述的主題是一致的，如神話中描述的自然神、創世神、祖先神都是棄惡揚善、勇于獻身的偉大形象，由此可看出滿族先民的民族精神所在。瑪虎藝術也滲透著人們虔誠的宗教感情和對真善美的追求。

(三)恪遵祖訓的制作與神圣空間的有機統一

因為滿族面具圖樣不可留存，祭祀后被燒掉，滿族面具的形態大多是薩滿根據秘傳的描述繪制出來的。民俗鄉規中祭祀的面具制作是祭祀儀式的重要組成部分，有嚴格的繪制、供祭、存藏、修繕等禁忌，必由德高望眾的面具師傅制作，不得隨意變更，否則被視為觸犯神靈。手工精良技藝嫻熟的面具師傅受當地滿族人崇敬。莊嚴的祭祀儀式決定了工藝的精良，人們獻出上等的皮張及各種配飾。

滿族面具恪遵祖訓的制作是為更好地烘托神圣空間而服務的。薩滿祭祀通常有一個以祭壇為中心的祭祀空間，是神靈降臨處，在宗教人類學中被稱為神圣空間。在中時間和空間都可有世俗和神圣之分。在祭祀中世俗和神圣之間發生轉換，神案、供桌在族眾面前成為神圣化的象征物。同樣，面具也具有象征性。薩滿祭祀中，戴面具被視為有宗教意味的神圣舉動，面具具有警示注目的作用，是與神靈世界相通的標識和徽記。薩滿身穿神服，邊敲神鼓邊唱神歌，迎請各方神靈，借助面具完成世俗和神圣的轉換，實現神靈附體，扮演“代神立言”的角色。另外，在信仰薩滿教的滿族民眾心里，面具即是神祗。例如根據滿族學者石偉光、富育光的調查，琿春滿族何姓直至解放前仍有面具神偶，并尊為“瞞爺”。又如滿族吳姓祖傳的三位皮臉神也屬供祭面具。《吳氏我射庫祭譜》記述：“原祖居下江，傳奉皮臉神三具，媽媽神壹，熊頭神壹，巴柱神臉壹。二祖阿塔里率族西遷，船逆水遇風，神器僅馀神書數冊，豈非天意……”(郭淑云《原始態文化――薩滿教透視》，第590頁)。可見，滿族有著豐富的面具文化，面具是神圣空間的重要組成部分。

免疫組化技術范文第3篇

【論文摘要】近年來分子生物學技術以及其它高、新技術在病理領域得到廣泛的應用，同樣作為體育界的基礎研究學科運動人體科學的發展已經不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫學檢驗以及病理學實驗技術在運動人體科學廣泛應用，尤其是組織病理學技術中定位技術，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學常用的定位技術的方法進行綜述。

1免疫組織化學實驗技術

隨著免疫組織化學染色技術的廣泛應用，病理學研究產生了劃時代的飛躍。免疫組織化學是病理學實驗中常用的方法，是在蛋白質水平用各種特異性抗體檢測細胞內各種抗原物質。根據標記物的不同，免疫組織化學技術可分為免疫熒光細胞化學技術、免疫酶細胞化學技術、免疫鐵蛋白技術、免疫金-銀細胞化學技術、親和免疫細胞化學技術、免疫電子顯微鏡技術等。

1.1免疫組織化學實驗步驟免疫組化技術是在組織化學的方法上結合免疫學的理論和技術發展起來的一門新技術。其原理是利用免疫學的核心——抗原體特異性結合的原理，用標記抗體追蹤抗原，通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進行觀察，以達到檢測抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術的優點免疫組化技術的優點：①特異性強，免疫組化中抗體與組織細胞中的抗原的結合是特異的。如白細胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和鏈酶素—過氧化物酶連接（SP）法的出現，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術更加可靠。③定位準確，由于抗原抗體的結合是特異的，因而免疫組化技術可在組織和細胞內準確定位，對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，將形態與功能相結合，對疾病進行深入的研究。

2原位雜交實驗技術

原位雜交是將組織化學與分子生物學技術結合來檢測合定位核酸的技術。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細胞內是否存在欲檢測物質的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個層次的檢驗方法。根據所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術的應用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細胞的形態結構，將形態學與基因功能活動的變化相結合進行多層面的研究。主要應用：①細胞特異性mRNA轉錄的定位可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的監測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細胞遺傳學的研究。

2.2原位雜交技術與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區別原位雜交與免疫組化染色技術相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機制是抗原-抗體的特異性結合，是蛋白質表達水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補配對的原則與待測靶序列結合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實驗方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對小；原位雜交技術無論從實驗設計上，還是從實際操作上均較免疫組化染色復雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關。一般而言，直接選用商品化的標記探測和檢測試劑盒的實驗成本較高；熒光標記探針較非熒光標記探針的成本高，對樣本及實驗條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標技術雙標技術是在同一張組織切片上標記兩種不同的抗體或同時應用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術，在不同層次來檢測同一細胞上某些物質的表達是否有相關性的一種實驗方法。與傳統的單項檢測相比，雙標記具有無可比擬的優越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時間或空間的樣本誤差。實驗方法上先進行原位雜交會減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進行原位雜交后進行免疫組化標記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實驗設備必須經DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時須帶口罩及手套；②當雜交步驟完成后，切片必須認真浸泡及長時間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時間均須適當延長，以增加抗原抗體間的結合，楊青春等人研究發現每個步驟均延長2～3倍時間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復染，以免遮蓋核信號。

參考文獻

[1]紀小龍，施作霖.診斷免疫組織化學[M].北京：軍事醫學科學出版社，1997.5.

免疫組化技術范文第4篇

【關鍵詞】 抗原修復液；固定時間；免疫組化

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.089 文章編號：1004-7484（2012）-08-2487-02

隨著醫學技術和相關領域的不斷發展，免疫組織化學技術作為一門新興的學科出現了。它是一門基于免疫和分子生物學與病理形態學等學科綜合的技術，主要是通過已知抗體或抗原進行對實驗中的組織細胞中探測的抗原或抗體檢測。典型特征包括操作易于實現，準確性高和特異性強，并且能夠將形態和機能相互整合。該種技術已在實際中能夠進行病理和鑒別診斷，組織胚胎和神經解剖等相關領域的實驗研究[1]。通常情況下，只有在正確及時的固定離體組織前提下，免疫組化技術才能得出精確度高的實驗結果。但是，由于實際操作中存在大量的影響因素造成不能正確及時的固定離體組織，特別是在進行尸檢標本時，對實驗的要求更高。本文的研究重點就是考察這些組織是否能夠做免疫組化實驗，對于不同抗原修復液和固定時間對免疫組化結果的影響。

1 材料與方法

1.1 一般資料 采集本院在2008年1月至2009年12月手術中送檢，并且確診為乳腺浸潤性導管癌的26例標本。在實驗中，每一標本中選取4塊腫塊部位，其中的四個時間點分別是：t1，t2，t3和t4。t1，t2，t3和t4分別代表立即固定組，延遲12小時固定組，延遲24小時固定組，延遲48小時固定組。將其中的1塊標本馬上置于10%的中爾馬林液中進行固定，并將實驗中的其余3塊分別于延遲12、24、48小時后放入10%中爾馬林液進行固定。然后對于以上標本固定滿24小時后進行脫水、透明、浸蠟和包埋相關操作，再進行切片行HE染色驗證腫瘤組織。并且將染色結果為陰性者立即固定組免疫組化，同時不再做與其相應延遲固定組的標本標記染色。

1.2 試劑與方法 采用的試劑包括：鼠抗人CK7單抗，抗人C-erbB-2，單抗兔抗人ER單抗和鼠及ElivisionTM plus（即用型檢測試劑盒和DAB試劑盒均購于福建邁新生物技術開發有限公司）。采用兩步法進行免疫組化，即分別用檸檬酸高壓熱修復和胃酶修復，并且嚴格按照ElivisionTM plus試劑盒要求的操作步驟進行操作。其中，脫水透明，中性樹膠封片，DAB顯色和蘇木素輕度復染，并且用PBS進行替換一抗作為陰性對照。其中，不同抗原修復液分組：pH為9.0的高溫高壓EDTA緩沖液修復（A），pH為8.0高溫高壓EDTA緩沖液修復（B），pH為6.0高溫高壓檸檬酸鹽緩沖液修復（C），pH為9.0微波爐EDTA緩沖液修復（D），pH為8.0微波爐EDTA緩沖液修復（E），pH為6.0微波爐檸檬酸鹽修復法（F）。

1.3 結果判定 進行陽性定位在細胞漿和陽性定位在細胞核的免疫組化切片，將其中具有特征代表的10個在400倍視野中觀察，對其中的陽性細胞占整體細胞的比例進行計數如下：計陽性細胞數占整體細胞比例在25%以下記做（±），占整體細胞比例在25%-50%記做（+），占整體細胞比例在50%-75%記為（++），占整體細胞比例在75%以上記為（+++），并且相應的評價分為1，2，3，4分；同樣的，以（±），（+），（++）表示染色強度，并且相應的評價分為1，2，3分。最后，將兩種記分乘積作為染色效果指數。另外，對陽性定位于細胞膜的免疫組化進行切片，其中的染色效果參照文獻[2]標準判定，同樣的以符號±，+，++，+++，++++進行評價，并且相應的評價分為1，2，3，4，5分，將兩種分數的乘積作為染色效果指數。

1.4 統計學分析 基于統計軟件SPSS13.0進行數字統計處理。在進行統計中，進行隨機區間設計的秩和檢驗，并將檢驗結果在P

2 結 果

2.1 通過在A-F抗原修復液以及固定時間不同乳癌組織中，CK7的表現結果如下：在乳癌組織中，CK7的陽性顯示為黃褐色的顆粒，其定位于細胞漿中，在總共26例標本中立即固定組均陽性。并且，在立即固定組、12小時后固定組、24小時后固定組和48小時后固定組間的染色效果指數差異，有統計學意義（P

2.2 通過在A-F抗原修復液以及固定時間不同乳癌組織中，ER的表現結果如下：在乳癌組織，ER的陽性顯示為黃褐色顆粒，其定位于細胞核中，在所有的標本中有22例立即固定組標本呈現出了陽性。在立即固定組、12小時后固定組、24小時后固定組和48小時后固定組間的染色效果指數之間的差異P

2.3 通過在A-F抗原修復液以及固定時間不同乳癌組織中，C-erbB-2的表現結果如下：在乳癌組織，C-erbB-2陽性顯示為黃褐色顆粒，并且陽性定位在細胞膜中，在所有的標本中有18例立即固定組標本呈現陽性。在立即固定組、12小時后固定組、24小時后固定組和48小時后固定組間的染色效果指數之間的差異P

3 討 論

由組織病理學基本理論可知，無論在組織切片活著進行電鏡大體標本的保存，應該及時適當進行有效的固定。通過這種操作，才能達到使組織和細胞內蛋白凝固并能夠在特定位置保留，進而可以防止破壞及自溶內外源性酶，從而最大程度的對組織和細胞的固有形態、結構實施了保護。當出現組織內沒未能進行有效的固定時，內外源性酶將能夠造成組織細胞結構破壞，甚至使某些特定部位的蛋白向周圍擴散并出現降解。在本實驗中，通過采用不同抗原修復液，并采用在延遲時間不等的固定組織，進行特定部位的蛋白免疫組化檢測，在結果中可以看到特定陽性部位周圍有不同的化程度的陽性背景。并且，在進行CK7免疫標記時，癌巢周圍陽性背景隨著抗原修復液A到F，固定時間的增長而逐漸加深；在進行ER免疫標記過程中，在核陽性減弱的同時出現胞漿的陽性背景；在進行C-erbB-2免疫標記過程中，胞膜陽性同時胞膜兩側均出現陽性背景。并且，從統計學角度，在CK7、ER和C-erbB-2在4組固定時間不等的乳癌組織間的表達效果具有統計意義。

免疫組織化學技術基本原理：基于抗原抗體反應或者組織化學的呈色反應，通過借助顯色劑來標記特異性抗體在組織細胞原位，從而能夠對相應抗原進行定性、定位和定量診斷。其中，組織固定不理想對于免疫組化染色結果有非常大的關系，其固定的結果程度和抗原保存有直接關系，因此應該進行盡快組織固定。在進行大標本和有包膜的標本實驗時，由文獻[3，4]應該進行切開固定。在其中的組織細胞不能及時有效固定，就會導致細胞內蛋白破壞降解，甚至導致免疫組化檢測失敗[5，6]。免疫組化染色中，組織結構的保存和抗原性等的改變程度有多方面的影響因素，主要包括：溫度、抗原、固定液的pH值、固定劑種類、灌注速度和進行固定后處理方法等方面。

在本實驗中，所選用得CK7、ER和C-erbB-2抗體，進行了在不同抗原修復液，在立即固定、延遲12小時固定、延遲24小時固定和延遲48小時固定的4組乳癌組織中，并且最終標記了細胞漿、細胞核和細胞膜等部位的相應蛋白。通過實驗看出，在抗原修復液E和F及在延遲48小時中的不到明確的膜陽性。因此，延遲固定對膜蛋白免疫組化效果的影響更明顯。延遲固定大幅弱化了免疫組化效果，其中的原因可能是延遲固定和內外源性蛋白酶對部分蛋白的降解，以及部分蛋白向周圍擴散造成。抗原修復液E和F延遲固定太長，不太適宜進行檢測，而抗原修復液A、B、C和D可以進行延遲固定組織免疫組化檢測。可以得出，盡管在實驗中免疫組化效果變差，但是可以分辨出特定部位的陽性結果。因此，對延遲固定組織只要充分固定和選用抗原修復液抗原修復液A、修復液B、修復液C和修復液D可以做免疫組化檢測的，同時應注意減少實驗延遲固定時間。

綜上所述，對于那些客觀因素造導致延遲固定標本，在其延遲時間未達到48小時之前，并且沒有進行免疫組化輔助診斷，可以選用抗原修復液A、B、C和D進行免疫組化檢測。應當注意的，判定檢測結果應充分考慮到延遲固定帶來的影響。因此，只要通過有效的措施排除了延遲固定產生的不良影響，免疫組化在一定意義上能夠起到輔助診斷的作用。

參考文獻

[1] 楊美娟.組織標本固定方法與免疫組織化學染色效果的關系[J].解剖科學進展，2003，9（1）：89-90.

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[4] 楊紅.免疫組化質量控制中的3個基本影響因素[J].臨床與實驗病理學雜志，2001，17（2）：183-185.

免疫組化技術范文第5篇

關鍵詞：胸腔積液細胞塊；臨床病理技術；細胞塊切片；免疫組化染色

【中圖分類號】R561 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）05-0072-02

胸腔積液主要是由非小細胞肺癌?肺腺癌以及惡性間皮癌引起的，在臨床上主要依據細胞涂片來進行檢查診斷，具有78%左右的診斷敏感度[1]?不過，這種診斷方法不能有效鑒別轉移性癌和原發性間皮腫瘤，嚴重影響該疾病的臨床治療效果?現階段有資料顯示采用細胞塊切片并免疫組化染色進行診斷的效果要更加理想?為此，本文對細胞塊切片并免疫組化染色應用在胸腔積液診斷中的臨床效果進行了詳細的研究，并取得了一定的成果，現報告如下?

1資料與方法

1.1一般資料

從我院在2011年11月至2014年10月期間收治的胸腔積液患者中選取78例作為本研究對象，均以胸腔積液作為送檢標本，對所有患者進行常規的細胞涂片和細胞塊切片并免疫組化染色兩種方法的檢查診斷?在78例患者中有41例男性患者，37例女性患者，他們的年齡在18歲-75歲之間?所有患者均是自愿參與本研究并已簽署知情同意書，且在性別?年齡等方面無明顯差別，P>0.05，無統計學意義，具有可比性?

1.2診斷方法

護理人員需要在患者住院的第二天進行100毫升新鮮胸腔積液的收集，分別裝在4支試管中，同時進行離心操作，設置2500r/min為離心轉速，10-15min為離心時間?離心完成之后應用移液槍對上清液進行吸出，然后通過常規細胞涂片方法對部分沉渣進行檢查?

剩余沉渣則需要進行合并處理，然后通過2.5毫升戊二醛的加入進行固定并離心，設置2500r/min為離心轉速，5min為離心時間?離心完成之后應用移液槍對上清液進行吸出，然后用濾紙將取出之后的沉渣進行包裹，采用常規方法進行脫水，采用石蠟包埋方法對其進行切片并檢查?

對兩組檢查方法分別進行HE和免疫組化染色?免疫組化染色可以通過免疫組織化學的Maxvision快捷方法來進行，其中所應用到的Maxvision試劑盒?DAB顯色試劑以及CEA?CK7和CR?WT-1抗體均來自福州邁新有限公司?染色過程需要根據試劑盒說明來嚴格進行?

1.3臨床觀察指標

對兩組方法的診斷陽性率進行對比分析，其中，在胞漿或是胞漿胞膜中CEA和CK7同時有棕黃色出現，在細胞膜或是細胞漿膜以及細胞核和細胞漿中Calretinin有棕黃色出現，在細胞核中WT-1有黃色顆粒出現，在腺癌或間皮細胞的細胞陽性大于10%，這些現象均可以視為陽性診斷?

1.4統計學方法

本研究分析和處理數據采用的是SPSS15.0統計學軟件包，采用卡方檢驗，計數資料采用（n，%）表示，P

2結果

經過常規的細胞涂片檢查方法診斷，在78例患者中有43例陽性，其陽性率為55.1%，經過細胞塊切片并免疫組化染色檢查方法診斷，在78例患者中有78例陽性，其陽性率為100%，對比發現后者要明顯高于前者，P

3結論

在胸部腫瘤中，最為常見的一種并發癥就是胸腔積液[2]，出現此并發癥后，患者的腫瘤和間皮細胞均會處于一個胸腔積液浸泡的狀態，容易使這兩種細胞的形態學發生變化，進而影響常規方法的鑒別診斷效果[3]?以往采用細胞涂片作為檢查診斷的主要方法，其具有操作簡單?對細胞形態特點進行保持的優點，但是在診斷敏感度方面，特別是診斷胸腔積液的敏感度較弱?采用細胞塊切片并免疫組化染色的檢查診斷方法可以通過處于已標記狀態的特異性抗體對細胞內部的未知抗原進行檢測，同時還可以利用酶的著色反應來對細胞活性?分布以及鄧偉等進行顯示?該方法具有非常高陽性率，操作簡單，而且還可以對細胞圖片的缺點進行良好的彌補，提高檢查診斷的準確率?在本研究中，細胞塊切片并免疫組化染色診斷的陽性率要明顯高于細胞涂片診斷的陽性率，P

綜上所述，在胸腔積液的臨床診斷中應用細胞塊切片并免疫組化染色的效果較為明顯，值得在臨床上得到進一步推廣與應用?

參考文獻

[1] 斯向東，李慶.細胞塊切片及免疫組化在惡性漿膜腔積液診斷中的應用體會[J].中國現代醫生，2011，49（28）：114-115.