生物藥劑動(dòng)力學(xué)

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生物藥劑動(dòng)力學(xué)范文第1篇

[關(guān)鍵詞] 生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué);教學(xué)體會(huì);教學(xué)質(zhì)量

[中圖分類(lèi)號(hào)] R9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]1674-4721(2010)05(a)-137-02

生物藥劑學(xué)是研究藥物及其劑型在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程,闡明藥物的劑型因素、機(jī)體生物因素和藥物療效之間相互關(guān)系的一門(mén)學(xué)科[1]。要求學(xué)生通過(guò)這門(mén)課的學(xué)習(xí),具備合理設(shè)計(jì)制劑處方、科學(xué)評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量、科學(xué)制訂給藥方案等方面的基本理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能,為從事制劑研究和應(yīng)用工作奠定基礎(chǔ)。

為達(dá)到上述教學(xué)要求,不斷提高教學(xué)質(zhì)量,筆者回顧近年《生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)》教學(xué)中實(shí)踐過(guò)程,調(diào)閱教研室多年上課后的師生評(píng)語(yǔ)及追尋學(xué)生走上工作崗位后的反饋信息,結(jié)合本學(xué)科當(dāng)前的教學(xué)工作狀況,廣泛閱讀他人已發(fā)表的教學(xué)改革方法和經(jīng)驗(yàn),總結(jié)以往教學(xué)工作中存在的問(wèn)題和值得肯定的地方,擬采百家之長(zhǎng),進(jìn)一步提高該課程的教學(xué)質(zhì)量,為社會(huì)培養(yǎng)有用之才。

1 大學(xué)課程的時(shí)間設(shè)置

《生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)》這門(mén)專(zhuān)業(yè)課程在多數(shù)院校都是安排在大學(xué)的最后一個(gè)學(xué)年才開(kāi)始學(xué)習(xí),但其內(nèi)容涉及到許多《高等數(shù)學(xué)》 (微積分、線性代數(shù)等)的基礎(chǔ)知識(shí),而《高等數(shù)學(xué)》則安排在大學(xué)一年級(jí),其后幾年的課程均很少涉及[2],這樣就造成多數(shù)學(xué)生對(duì)一些高等數(shù)學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)的遺忘,尤其對(duì)那些原來(lái)數(shù)學(xué)基礎(chǔ)較差的學(xué)生來(lái)說(shuō),面對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)部分中大量的公式推導(dǎo),感到既抽象難懂,又枯燥乏味;另外,《生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)》這門(mén)課程本身安排的學(xué)時(shí)就很少,教師課堂上沒(méi)時(shí)間為學(xué)生補(bǔ)習(xí)高等數(shù)學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí),部分學(xué)生學(xué)習(xí)上感覺(jué)困難。因此,建議在課程時(shí)間的安排上,召開(kāi)基礎(chǔ)課代課教師與相應(yīng)專(zhuān)業(yè)課代課教師的座談,明確專(zhuān)業(yè)課中需要基礎(chǔ)課教師重點(diǎn)講授的內(nèi)容,進(jìn)而在時(shí)間上兩者相銜接,盡早讓大學(xué)生學(xué)習(xí)過(guò)基礎(chǔ)課后,即開(kāi)始相應(yīng)專(zhuān)業(yè)課的學(xué)習(xí),這樣既有利于基礎(chǔ)課知識(shí)的鞏固,也為學(xué)好專(zhuān)業(yè)課打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),同時(shí)也不必對(duì)相同內(nèi)容進(jìn)行重復(fù)教育,從而節(jié)約教育資源。

2多媒體課件的應(yīng)用

本院自從2004年在本科藥學(xué)專(zhuān)業(yè)開(kāi)展《生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)》課程教學(xué)以來(lái),全部采用Powerpoint課件進(jìn)行教學(xué),該教學(xué)模式可將抽象的概念直觀化,復(fù)雜的作用機(jī)制簡(jiǎn)單化,同時(shí)輔以鮮明、生動(dòng)的動(dòng)畫(huà),總體上受到了學(xué)生的廣泛好評(píng),也使教師從整節(jié)課的“寫(xiě)寫(xiě)擦擦”中解放出來(lái);但從聽(tīng)課教師及學(xué)生的反饋中也發(fā)現(xiàn)不少問(wèn)題:①個(gè)別課件制作的質(zhì)量問(wèn)題,如非關(guān)鍵字過(guò)多;內(nèi)容擺放位置不協(xié)調(diào);字體大小、顏色對(duì)比不合適,動(dòng)畫(huà)制作質(zhì)量參差不齊等;②教師在教學(xué)工作中主導(dǎo)作用的減弱,由于在整個(gè)教學(xué)活動(dòng)中,全部使用Powerpoint課件,個(gè)別教師甘于居于幕后充當(dāng)“配音演員”的角色,缺少了形體語(yǔ)言的表達(dá),給學(xué)生造成照本宣科的感覺(jué),使得師生的互動(dòng)及學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情明顯的降低;③不同教學(xué)內(nèi)容應(yīng)采用適宜的授課方式,如教材中生物藥劑學(xué)部分關(guān)于不同制劑在體內(nèi)、體外的吸收、分布、代謝和排泄,多為文字性的內(nèi)容,采用Powerpoint課件教學(xué),以動(dòng)畫(huà)對(duì)藥物的體內(nèi)過(guò)程進(jìn)行生動(dòng)的演示,可使枯燥的內(nèi)容變得鮮活起來(lái),使學(xué)生更好地理解和記憶,從而增加學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣;而在藥代動(dòng)力學(xué)部分,由于存在大量公式的推導(dǎo),教學(xué)過(guò)程中,采用Powerpoint進(jìn)行授課,同時(shí)利用Excel中作圖及計(jì)算功能縮短公式的推導(dǎo)和計(jì)算時(shí)間,由于屏幕尺寸的限制,致使公式推導(dǎo)的過(guò)程前后無(wú)法連貫,個(gè)別學(xué)生反映課件顯示速度過(guò)快,思維跟不上。因此,在今后的教學(xué)工作中,對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)部分的教學(xué)應(yīng)在Excel輔助計(jì)算的基礎(chǔ)上,結(jié)合文獻(xiàn)[3]提供的方法“課件與板書(shū)相結(jié)合,由板書(shū)逐步講解其中的推導(dǎo)過(guò)程并隨時(shí)與學(xué)生進(jìn)行交流,讓學(xué)生慢慢地跟隨教師的講解把握其來(lái)龍去脈,放映的課件中只清晰地列出重要的中間公式及最后的結(jié)果”進(jìn)行教學(xué),或許可收到較好的效果;④多媒體課件的廣泛應(yīng)用,使部分教師其他方面的教學(xué)能力出現(xiàn)下降的趨勢(shì),由于制作Powerpoint課件,尤其其中的動(dòng)畫(huà)需要大量的時(shí)間,加上教學(xué)中其他教學(xué)方式的較少應(yīng)用,致使部分教師對(duì)板書(shū)、教案及教學(xué)筆記的書(shū)寫(xiě)與更新、學(xué)生思想動(dòng)態(tài)方面的研究等方面的能力有所下降,因此,應(yīng)提高對(duì)教師多方面的要求和考核,使之各方面的水平不斷提高。

3 實(shí)驗(yàn)部分的教學(xué)

《生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)》是一門(mén)實(shí)踐性很強(qiáng)的課程,實(shí)驗(yàn)課是培養(yǎng)學(xué)生掌握操作技能的重要教學(xué)環(huán)節(jié),加強(qiáng)實(shí)踐教學(xué),突出能力培養(yǎng)是實(shí)用型人才教育的重點(diǎn)。在教學(xué)過(guò)程中,為了培養(yǎng)學(xué)生查閱文獻(xiàn)、課題設(shè)計(jì)、操作技能、論文寫(xiě)作和課題匯報(bào)的能力。筆者嘗試了以下方法:

3.1驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)

驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)是采用經(jīng)典的基本實(shí)驗(yàn)方法和基本操作技能,驗(yàn)證以往的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)課前,教師圍繞實(shí)驗(yàn)內(nèi)容提出系列問(wèn)題,讓學(xué)生帶著問(wèn)題預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,熟悉相關(guān)理論和實(shí)驗(yàn)步驟,做到心中有數(shù);上課時(shí)教師隨機(jī)對(duì)學(xué)生進(jìn)行提問(wèn),增強(qiáng)學(xué)生的參與意識(shí),促使學(xué)生課前認(rèn)真預(yù)習(xí),當(dāng)然,學(xué)生也可自由說(shuō)出對(duì)同一個(gè)問(wèn)題的不同看法;實(shí)驗(yàn)中,學(xué)生不一定非要按課本或老師要求去做,可以有自己的主張和創(chuàng)新,允許學(xué)生實(shí)驗(yàn)失敗;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,各小組成員不得擅自提前離開(kāi),要逐組匯報(bào)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和心得,共同探討實(shí)驗(yàn)成敗的原因;最后,由教師進(jìn)行總結(jié),提出實(shí)驗(yàn)中的觀點(diǎn)和注意事項(xiàng),對(duì)實(shí)驗(yàn)成功的小組進(jìn)行表?yè)P(yáng),對(duì)于實(shí)驗(yàn)失敗的小組,只要對(duì)失敗的原因分析的有條有理,同樣給予鼓勵(lì)。

對(duì)一些實(shí)驗(yàn)前的教師演示性實(shí)驗(yàn),以后的教學(xué)活動(dòng)中可借鑒文獻(xiàn)[3]的方法,實(shí)施全程錄像,錄像中用一些特寫(xiě)鏡頭將實(shí)驗(yàn)操作的難點(diǎn)表現(xiàn)出來(lái),學(xué)生就可清晰地看到每一個(gè)操作步驟;另外,學(xué)生如果對(duì)某一部分不理解,可以對(duì)這部分重復(fù)觀看,教師只需進(jìn)行必要的講解和指導(dǎo),這樣就減少了復(fù)雜的示范操作,提高了學(xué)生的學(xué)習(xí)效果。

3.2 綜合性實(shí)驗(yàn)

綜合性實(shí)驗(yàn)是提高學(xué)生綜合能力和創(chuàng)新能力的重要途徑,主要涵蓋了藥劑學(xué)、生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)、藥物分析學(xué)等多學(xué)科的內(nèi)容。在教學(xué)活動(dòng)中,以國(guó)家藥品臨床研究機(jī)構(gòu)I期實(shí)驗(yàn)室為依托,把接到的橫向課題按實(shí)驗(yàn)要求對(duì)學(xué)生進(jìn)行講解,要求學(xué)生按照科研的一般程序,在學(xué)校圖書(shū)館或系部電子教室自行查閱相關(guān)文獻(xiàn),按照擬定的格式和目錄,以其所學(xué)盡力撰寫(xiě)研究者手冊(cè)、實(shí)驗(yàn)方案和知情同意書(shū),選擇較優(yōu)者在全班公開(kāi)討論,對(duì)一些大膽的設(shè)想和有創(chuàng)意的設(shè)計(jì)方案及時(shí)給予表?yè)P(yáng)和鼓勵(lì),并對(duì)其可行性組織學(xué)生進(jìn)行討論,這樣既有利于開(kāi)發(fā)學(xué)生的潛能,培養(yǎng)創(chuàng)新能力,又可達(dá)到教學(xué)相長(zhǎng)的目的;受試者篩選期間組織學(xué)生參與和見(jiàn)證健康受試者的知情同意書(shū)的簽署和身體檢查等各環(huán)節(jié),從參與實(shí)驗(yàn)中更清楚地認(rèn)識(shí)受試者的入選、剔除的條件;樣本采集過(guò)程中,分批組織學(xué)生參與受試者的管理、監(jiān)督服藥、樣本采集、樣本的分離及受試者的監(jiān)護(hù)工作;樣本檢測(cè)過(guò)程中,指導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)高效液相色譜的使用、實(shí)驗(yàn)條件的摸索、樣本的預(yù)處理、進(jìn)樣分析等;數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用專(zhuān)業(yè)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,生成統(tǒng)計(jì)報(bào)告;然后按照一定的格式撰寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告;最后制作幻燈,要求學(xué)生隨機(jī)個(gè)別匯報(bào),師生共同評(píng)定;最后,要求主要參與者撰寫(xiě)科研論文,在學(xué)報(bào)的大學(xué)生園地版面上發(fā)表。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中學(xué)生逐步掌握了文獻(xiàn)的檢索方法、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)中注意的事項(xiàng)、報(bào)告的撰寫(xiě)和科研論文的寫(xiě)作及匯報(bào),目前已在學(xué)報(bào)的大學(xué)生園地上發(fā)表了“阿奇霉素分散片生物等效性評(píng)價(jià)”等科研論文2篇;并且學(xué)生從幻燈片制作、課題匯報(bào)的過(guò)程中體會(huì)到了教師授課的艱辛,也對(duì)教師在教學(xué)過(guò)程中偶爾的出現(xiàn)小瑕疵能夠給予充分的理解。經(jīng)過(guò)綜合性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的學(xué)習(xí)和訓(xùn)練后,多數(shù)學(xué)生基本能夠應(yīng)用所學(xué)知識(shí)、分析并解決較復(fù)雜問(wèn)題,并具有一定的科學(xué)思維和創(chuàng)新意識(shí)。

3.3 探索性實(shí)驗(yàn)

探索性實(shí)驗(yàn)是以提高學(xué)生獨(dú)立實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Α⒅R(shí)的綜合運(yùn)用能力、創(chuàng)新能力為主要目的。從去年開(kāi)始,本院對(duì)藥學(xué)學(xué)生實(shí)行導(dǎo)師制培養(yǎng),就是每個(gè)教師都要從班級(jí)里隨機(jī)抽取數(shù)名學(xué)生,負(fù)責(zé)學(xué)生的日常生活、學(xué)習(xí)及科研能力的培養(yǎng)。各個(gè)教師根據(jù)自己的研究領(lǐng)域,先把自己的研究情況介紹給大家,然后分發(fā)材料,讓學(xué)生逐漸熟悉研究?jī)?nèi)容并跟隨教師或教師的碩士研究生學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)技術(shù),聆聽(tīng)碩士生的課題匯報(bào),再?gòu)闹袊?guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)中下載相關(guān)文獻(xiàn),反復(fù)研讀,初步掌握基本的科研思路和實(shí)驗(yàn)方法,然后自己選題或根據(jù)教師的課題制定研究方案和計(jì)劃,相互學(xué)習(xí)、共同討論,促進(jìn)學(xué)生個(gè)體之間知識(shí)的交叉,同時(shí)學(xué)生的熱情、無(wú)拘無(wú)束,充滿想象力的問(wèn)題和解決問(wèn)題的新思路,也不斷激發(fā)教師的靈感,為其研究帶來(lái)新的思路。

4 講授例題與作業(yè)設(shè)計(jì)

藥代動(dòng)力學(xué)部分涉及大量的計(jì)算,必須通過(guò)不斷的計(jì)算演練,才能熟練掌握各藥代參數(shù)之間的相互關(guān)系及解題思路,因此,例題與作業(yè)是課程設(shè)計(jì)中的必要部分[4]。對(duì)于典型例題講授時(shí)應(yīng)著重于解題思路的點(diǎn)撥;其次,可選擇《生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)》(人民衛(wèi)生出版社)第3版配套的習(xí)題集,選擇其中與實(shí)際應(yīng)用密切聯(lián)系的題目進(jìn)行講解,也可給學(xué)生進(jìn)行針對(duì)性地布置一些作業(yè)。下次上課時(shí),先行提問(wèn),再相互討論,鼓勵(lì)學(xué)生積極發(fā)言,提出不同的解題思路。從而培養(yǎng)學(xué)生解決實(shí)際問(wèn)題的能力。

5 考核工作

5.1 理論課的考核

目前對(duì)學(xué)生的理論課的考核,主要還是通過(guò)傳統(tǒng)的閉卷式考試來(lái)進(jìn)行,但閉卷考試因限于考試篇幅和難度的需要,主要考察的是學(xué)生對(duì)知識(shí)本身的記憶能力,而考察理解與應(yīng)用能力的題目相對(duì)較少。考試成績(jī)的高低并不能完全反映學(xué)生的學(xué)習(xí)能力,很大程度上只是片面反映學(xué)生的短期記憶能力。文獻(xiàn)[5]所介紹的半開(kāi)卷考試的考核方法,一方面注重學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解和應(yīng)用的培養(yǎng),另一方面也注重了學(xué)生歸納總結(jié)能力的培養(yǎng),值得借鑒。

5.2 實(shí)驗(yàn)課的考核

為加強(qiáng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)技能、應(yīng)用能力和創(chuàng)新能力的培養(yǎng),我們將實(shí)驗(yàn)課的成績(jī)占期末總成績(jī)的比重由原來(lái)的15%提高到30%,實(shí)驗(yàn)課的考核內(nèi)容包括:實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)中的操作技能、實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫(xiě)及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的回報(bào)等,尤其對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中那些表現(xiàn)突出、有獨(dú)到觀點(diǎn)的學(xué)生,要求教師應(yīng)記錄在案,給予適當(dāng)?shù)募臃止膭?lì)。

總之,本院從2004年開(kāi)始開(kāi)設(shè)《生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)》這門(mén)課程以來(lái),經(jīng)過(guò)幾年的教學(xué)實(shí)踐,在教學(xué)內(nèi)容和方法上雖取得了一點(diǎn)成績(jī),但應(yīng)該更清醒地認(rèn)識(shí)到教學(xué)中的不足,今后一定努力加強(qiáng)自身素質(zhì)和業(yè)務(wù)水平的提高,“以生為本”,博采眾長(zhǎng),不斷提高教學(xué)水平。

[參考文獻(xiàn)]

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[4]鄒豪, 陳琰,魯瑩,等. 藥物動(dòng)力學(xué)教學(xué)實(shí)踐中常見(jiàn)問(wèn)題的探討[J]. 藥學(xué)實(shí)踐雜志,2008,26(3):226-227.

生物藥劑動(dòng)力學(xué)范文第2篇

[關(guān)鍵詞] 多媒體技術(shù)；生物藥劑學(xué)

[中圖分類(lèi)號(hào)]R94 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]1673-7210（2008）05（c）-109-02

生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)是藥學(xué)類(lèi)專(zhuān)業(yè)本科生的主要專(zhuān)業(yè)課程之一。生物藥劑學(xué)(Biopharmaceutics)是研究藥物及其劑型在體內(nèi)的吸收、分布、代謝與排泄過(guò)程，闡明藥物的劑型因素、機(jī)體生物因素和藥物治療之間相互關(guān)系的科學(xué)。而藥物動(dòng)力學(xué)(Pharmacokinetics)是應(yīng)用動(dòng)力學(xué)原理和數(shù)學(xué)處理方法，定量地描述藥物通過(guò)各種途徑進(jìn)入體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄(即ADME)過(guò)程的“量時(shí)”變化或“血藥濃度經(jīng)時(shí)”變化及動(dòng)態(tài)規(guī)律的科學(xué)[1]。

生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)是一門(mén)實(shí)驗(yàn)操作性很強(qiáng)的課程，而實(shí)驗(yàn)課是鞏固學(xué)生學(xué)習(xí)的理論知識(shí)，培養(yǎng)學(xué)生掌握操作技能，提高學(xué)生分析解決問(wèn)題能力的有效教學(xué)手段。然而，在傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中我們發(fā)現(xiàn)，僅用傳統(tǒng)的板書(shū)教學(xué)手段難以在學(xué)生的大腦中留下深刻印象，尤其是對(duì)于生物藥劑學(xué)和藥物動(dòng)力學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分（如大鼠在體小腸灌流實(shí)驗(yàn)和撲熱息痛家兔血藥濃度測(cè)定實(shí)驗(yàn)），更難以準(zhǔn)確操作。而使用多媒體教學(xué)手段，可以將抽象的理論做成生動(dòng)、形象的課件，引發(fā)學(xué)生的興趣，充分調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性[2~4]。近年來(lái)，我教研室錄制了相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的視頻，在實(shí)驗(yàn)時(shí)以播放視頻作為主要的教學(xué)手段，并輔助以板書(shū)、圖片進(jìn)行講解，取得了較好效果。

1 教學(xué)改革內(nèi)容

1.1 簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)教材文字

之前使用的生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)教材具有理論性、邏輯性強(qiáng)的特點(diǎn)，但其內(nèi)容抽象、復(fù)雜，知識(shí)量有限，重點(diǎn)不突出，教學(xué)目的不明確，教材內(nèi)容不符合學(xué)生的認(rèn)知規(guī)律。有的太簡(jiǎn)單，只有文字和簡(jiǎn)單的插圖，缺乏動(dòng)態(tài)效果。在新版的生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)教材中，我們?cè)诤?jiǎn)化文字內(nèi)容的基礎(chǔ)上，使新教材內(nèi)容更豐富，信息量更充足，聯(lián)系問(wèn)題更廣泛。如大鼠在體小腸灌流實(shí)驗(yàn)中關(guān)于大鼠的腹腔麻醉、腸管的剝離、小腸位置的確定等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容著重突出；減少文字?jǐn)⑹觯詧D表形式勾畫(huà)實(shí)驗(yàn)操作步驟；強(qiáng)調(diào)操作中的細(xì)節(jié)和提出的注意事項(xiàng)，以求文字教材簡(jiǎn)單、易懂、重點(diǎn)突出。

1.2 加入圖片多媒體課件和相關(guān)影音文件素材

我們收集了主流教學(xué)資料包括雜志、教科書(shū)、相關(guān)書(shū)籍上的圖片，并摘錄了相關(guān)解剖學(xué)圖譜，還從互聯(lián)網(wǎng)上下載高清圖片。圖片素材盡量做到內(nèi)容簡(jiǎn)明、重點(diǎn)突出，同時(shí)，盡可能減少圖片間的頻繁切換，以免分散學(xué)生的注意力。視頻方面，我們攝錄了《大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn)》、《家兔口服撲熱息痛血藥濃度的測(cè)定》等總片長(zhǎng)100分鐘的資料，內(nèi)容包括從儀器準(zhǔn)備、動(dòng)物處理、動(dòng)物給藥到動(dòng)物在體操作的全過(guò)程，特別突出在體操作技術(shù)中相關(guān)步驟等，以上教學(xué)片基本涵蓋了操作中的重點(diǎn)、難點(diǎn)及應(yīng)急處理等知識(shí)。

1.3 加入實(shí)驗(yàn)flas

在教學(xué)中，使用flash軟件，設(shè)計(jì)制作了生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的動(dòng)畫(huà)，可從4個(gè)不同方位（正視圖、仰視圖、俯視圖和側(cè)視圖）觀察實(shí)驗(yàn)操作，加深了學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的理解。

2 多媒體技術(shù)在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用體會(huì)

2.1 簡(jiǎn)化文字教材，突出重點(diǎn)，易于學(xué)生理解和記憶

生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容具有理論性強(qiáng)、抽象、復(fù)雜的特點(diǎn)，如果單純通過(guò)板書(shū)的形式來(lái)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)原理、操作過(guò)程、注意事項(xiàng)等，學(xué)生不易理解，如能采用相關(guān)軟件制作關(guān)于實(shí)驗(yàn)原理的流程圖，并以錄像視頻作為內(nèi)容，那么學(xué)生更易理解該實(shí)驗(yàn)的目的和原理。如大鼠在體小腸灌流實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于大鼠的腹腔麻醉、腸管的剝離、小腸位置的確定、插管方向、循環(huán)控制等都是該實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)內(nèi)容，學(xué)生在第一次做實(shí)驗(yàn)時(shí)，由于沒(méi)有直觀的接觸，常常會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤操作導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗，而對(duì)學(xué)生播放實(shí)驗(yàn)視頻錄像可以對(duì)需要注意的地方重點(diǎn)講解，加深學(xué)生理解，提高生物藥劑實(shí)驗(yàn)的成功率。

2.2 豐富實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式

以往的實(shí)驗(yàn)教學(xué)程序是由學(xué)生課前預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，教師在課堂上講解本次實(shí)驗(yàn)相關(guān)內(nèi)容并提出該實(shí)驗(yàn)的要求和操作注意事項(xiàng)，學(xué)生按講義或要求進(jìn)行操作，然后進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、撰寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。這種教學(xué)模式單調(diào)、呆板，難以激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，達(dá)不到真正學(xué)習(xí)知識(shí)、運(yùn)用知識(shí)、解決實(shí)際問(wèn)題的目的。由于被動(dòng)接受式學(xué)習(xí)沒(méi)有充分調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性和主動(dòng)性，學(xué)生普遍存在重理論輕實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象。而采用多媒體技術(shù)可以激發(fā)學(xué)生自主學(xué)習(xí)的興趣，使認(rèn)知過(guò)程由被動(dòng)傳授轉(zhuǎn)變?yōu)橹鲃?dòng)學(xué)習(xí)[5]。

2.3 加強(qiáng)理論課教學(xué)與實(shí)驗(yàn)課教學(xué)的結(jié)合

生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)理論課的教學(xué)中有一節(jié)內(nèi)容為應(yīng)用藥物動(dòng)力學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，在講解的過(guò)程中，讓學(xué)生應(yīng)用3P97動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件及自行編寫(xiě)的非隔室模型法計(jì)算藥動(dòng)學(xué)數(shù)的Excel 程序處理自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并與手動(dòng)計(jì)算的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，這樣不僅可以提高理論課學(xué)習(xí)的效果，還能提高學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)課的興趣，引起學(xué)生的重視，真正做到理論學(xué)習(xí)與實(shí)驗(yàn)的有機(jī)結(jié)合。

3 多媒體技術(shù)應(yīng)用的教學(xué)效果

2006學(xué)年(未采用多媒體教學(xué))與2007學(xué)年(采用多媒體教學(xué))相比，考題難度基本持平，其中理論和實(shí)際操作各占50%，難度也基本相當(dāng)。采用多媒體教學(xué)的2007學(xué)年學(xué)生成績(jī)有明顯提高：學(xué)生平均成績(jī)?yōu)?4.8分，較2006學(xué)年提高13.5個(gè)百分點(diǎn)，優(yōu)秀率達(dá)到15.7%；良好率提高11.5個(gè)百分點(diǎn)，達(dá)到73.3%；不及格率下降了4.2個(gè)百分點(diǎn)。我們?cè)趯?duì)2007學(xué)年學(xué)生(總?cè)藬?shù)366人)的問(wèn)卷調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，87.5%的學(xué)生認(rèn)為利用多媒體進(jìn)行教學(xué)，效果明顯好于傳統(tǒng)的教學(xué)方法，主要表現(xiàn)在同學(xué)上課注意力集中，具有比較高的學(xué)習(xí)積極性，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作形象直觀，通俗易懂。因此，我們認(rèn)為，正確處理好多媒體教學(xué)和傳統(tǒng)教學(xué)的關(guān)系，能明顯提高教學(xué)效能，起到事半功倍的作用。

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[4]張永紅，李泳.多媒體教學(xué)的應(yīng)用于思考[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，3（29）：77.

生物藥劑動(dòng)力學(xué)范文第3篇

[關(guān)鍵詞] 四氫姜黃素；生物利用度；固體分散體；HPLC-MS/MS

姜黃Curcumae Longae Rhizoma為姜科植物姜黃Curcumae longae L.的干燥根莖，其化學(xué)成分主要為姜黃素類(lèi)及揮發(fā)油兩大類(lèi)，此外尚有糖類(lèi)、甾醇等。姜黃素類(lèi)主要有姜黃素、去甲氧基姜黃素及雙去甲氧基姜黃素。姜黃素具有抗炎、抗氧化、消除氧自由基、保護(hù)肝臟、抗纖維化等多種藥理作用。姜黃素在體內(nèi)迅速代謝為葡萄糖醛酸結(jié)合物、硫酸結(jié)合物、二氫姜黃素、四氫姜黃素及六氫姜黃素，而二氫與六氫又轉(zhuǎn)化為四氫姜黃素[1]。四氫姜黃素（tetrahydroeurcumin，THC）作為姜黃素在體內(nèi)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的最為活躍和主要的代謝產(chǎn)物，亦受到國(guó)內(nèi)外廣泛關(guān)注[2]。研究表明四氫姜黃素具有保肝、抗腫瘤、抗氧化、降血糖[3]、降血脂[4-5]等藥理活性。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)THC對(duì)代謝綜合征[6]、肥胖型2型糖尿病[7]、高血壓[8] 、肥胖[9]以及胰島素抵抗綜合征相關(guān)疾病[10]均有較好治療效果，具有廣泛的藥理學(xué)作用。然而，由于四氫姜黃素水溶性差，導(dǎo)致其口服吸收利用度低[11]，臨床應(yīng)用受到很大限制。本實(shí)驗(yàn)建立了快速、靈敏、簡(jiǎn)便的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）測(cè)定小鼠血漿中四氫姜黃素方法，比較四氫姜黃素及其固體分散體的相對(duì)生物利用度，為四氫姜黃素固體分散體的研究開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 受試藥物

四氫姜黃素（純度≥99%）、四氫姜黃素固體分散體均由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院分析測(cè)試中心提供。四氫姜黃素固體分散體制備按照業(yè)已公開(kāi)的方法：稱取一定量PEG4000，于 70～80 ℃加熱至完全熔融，按一定比例加入四氫姜黃素，攪勻，繼續(xù)加熱至完全熔融，迅速放入冰水浴中冷卻固化，粉碎過(guò)80目篩，即得四氫四氫姜黃素/PEG 固體分散體[10]。

1.2 試劑

四氫姜黃素對(duì)照品（純度≥95.0%，sigma公司生產(chǎn)），批號(hào)86J72390V；β-葡萄糖醛酸苷酶（1 mg?kU-1，Sigma Chemical Company，批號(hào)SLBD7403V）；地西泮（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.9%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈、甲醇（色譜純，E.Merk Chemical Co.）；乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲酸為色譜純（市售），其余的醋酸鹽、磷酸鹽等化學(xué)試劑均分析純（市售）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)KM種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK（川）2008-0019。

1.4 儀器

美國(guó)Agilent 6410 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，配有G1312B四元泵、G1322A真空脫氣機(jī)、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器和G1316B柱溫箱。使用MassHunter軟件控制系統(tǒng)及數(shù)據(jù)處理；超純水系統(tǒng)（Millipore，美國(guó)）；CP-225D型精密電子天平（Sartorius），可調(diào)式（固定式）混勻儀[MX-S（F），京君龍實(shí)驗(yàn)儀器（北京）有限公司]，超純水系統(tǒng)（Millipore，美國(guó)），PB-10酸度計(jì)（Sartorius），ALLEGRAX-15R臺(tái)式冷凍離心機(jī)（Beckman，美國(guó)），離心濃縮儀（LABCONCO，美國(guó)）。

2 方法

2.1 HPLC-MS/MS測(cè)定小鼠血漿四氫姜黃素（THC）

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Agilent SB C18柱 （4.6 mm×50 mm， 1.8 μm） ；流動(dòng)相乙腈-水（50∶50）含 0.1%的甲酸；流速0.3 mL?min-1；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.1.2 質(zhì)譜條件 采用電噴霧離子化源（ESI+），正離子模式，噴霧電壓4 000 V，源溫度為100 ℃；霧化氣為氮?dú)猓F化壓力為275.8 kPa；去溶劑氣為氮?dú)猓瑴囟?50 ℃，流速為10 L?mL-1；碰撞氣為高純氮?dú)猓瑝毫?.1 MPa；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式對(duì)藥物離子濃度進(jìn)行測(cè)定，質(zhì)譜條件如下：四氫姜黃素、地西泮的母離子（m/z）、子離子（m/z）、碰撞碎片電壓（V）、毛細(xì)管電壓（V）分別為373.3，137.1，90，20和285.2，193.1，135，31。

2.1.3 溶液的配置 四氫姜黃素（THC）對(duì)照液：精密稱取THC對(duì)照品適量，乙腈溶解并定容，配成質(zhì)量濃度為48.6 mg?L-1的對(duì)照品乙腈儲(chǔ)備液，用乙腈-水 70∶30稀釋得相應(yīng)濃度的工作液。所有對(duì)照品溶液均于4 ℃冰箱避光保存待用。

內(nèi)標(biāo)對(duì)照品溶液：精密稱取適量地西泮，乙腈溶解并定容，配成23.4 μg?L-1的乙腈儲(chǔ)備液，用乙腈-水 70∶30稀釋得402.48 μg?L-1的內(nèi)標(biāo)工作液。

磷酸鹽緩沖液（pH 6.8，0.1 mmol?L-1）：準(zhǔn)確稱取6.8 g KH2PO4，用蒸餾水溶解定容至250 mL，稱取2 g NaOH，蒸餾水溶解定容至250 mL，量取118 mL NaOH液和250 mL KH2PO4液加蒸餾水定容至1 000 mL即得。

醋酸鹽緩沖液（pH 4.5，0.1 mmol?L-1）：稱取醋酸鈉18.25 g，加冰醋酸9.80 mL，再加蒸餾水稀釋至1 000 mL即得。

β-葡萄糖醛酸苷酶工作液：準(zhǔn)確稱取一定量的β-葡萄糖醛酸苷酶，用磷酸鹽緩沖液（pH 6.8，0.1 mmol?L-1）配成5 000 U?mL-1的β-葡萄糖醛酸苷酶工作液，-20 ℃冰箱保存待用。

2.1.4 血漿樣品處理 準(zhǔn)確移取血漿 100 μL，加入100 μL含500 U的β-葡萄糖醛酸苷酶的磷酸二氫鉀溶液，37 ℃水浴孵育1 h，依次加入20 μL 402.48 μg?L-1的地西泮及100 μL醋酸鹽緩沖液，渦旋30 s混合均勻，酸化5 min，加4 mL混合萃取液（乙酸乙酯-環(huán)己烷 2∶1），渦旋10 min，5 000 r?min-1低溫離心15 min，分離上清液，35 ℃真空減壓濃縮揮干，加100 μL含0.1%甲酸的乙腈-水 70∶30的溶液，渦旋10 min復(fù)溶，最后5 000 r?min-1低溫離心15 min，吸取上清液進(jìn)樣。

2.1.5 方法學(xué)考查 血漿樣品中THC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取空白血漿 100 μL，加入不同濃度THC系列標(biāo)準(zhǔn)溶液40 μL配置成THC血漿標(biāo)準(zhǔn)系列，質(zhì)量濃度分別為9.06，45.35，75.58，125.97，349.92，583.20，972.00 μg?L-1，每一濃度平行配置3份，按2.1.4血漿樣品處理項(xiàng)操作后檢測(cè)。以血漿樣品中THC濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)，繪制THC標(biāo)準(zhǔn)曲線。

方法回收率的測(cè)定：制備THC低、中、高 3 個(gè)質(zhì)量濃度（9.06，349.92，972.00 μg?L-1）的質(zhì)量控制（QC）樣品，每個(gè)濃度平行5份，按2.1.4血漿樣品處理項(xiàng)操作，以提取后的色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)溶液的峰面積比值帶入回歸方程，所得濃度與實(shí)際濃度的比值即為方法回收率。

精密度與準(zhǔn)確度：制備THC低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度（9.06，349.92，972.00 μg?L-1）為質(zhì)量控制（QC）樣品。每個(gè)濃度平行處理5份，按照2.1.4血漿樣品處理項(xiàng)操作，每個(gè)樣品測(cè)定1次，于1個(gè)工作日內(nèi)完成，計(jì)算日內(nèi)精密度。同樣的QC樣品連續(xù)重復(fù)測(cè)3 d，計(jì)算日間精密度。

基質(zhì)效應(yīng)考查：準(zhǔn)確移取空白血漿 200 μL，加入100 μL含500 U的β-葡萄糖醛酸苷酶的磷酸二氫鉀溶液，37 ℃水浴孵育1 h，加入100 μL醋酸緩沖鹽酸化5 min， 渦旋30 s混合均勻，加4 mL混合萃取液（乙酸乙酯-環(huán)己烷 2∶1），渦旋10 min，5 000 r?min-1低溫離心15 min，分離上清液，35 ℃真空減壓揮干，依次加入40 μL高、中、低3種濃度的THC標(biāo)準(zhǔn)液和20 μL 402.48 μg?L-1的地西泮，以及140 μL含0.1%甲酸的乙腈-水 70∶30的溶液復(fù)溶，渦旋10 min，5 000 r?min-1低溫離心15 min，吸取上清液進(jìn)樣分析。計(jì)算血漿萃取物的基質(zhì)效應(yīng)的影響。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：用空白血漿配制低、中、高3個(gè)不同質(zhì)量濃度（9.06，349.92，972.00 μg?L-1）的THC樣品各5份，分別進(jìn)行室溫放置試驗(yàn)（25 ℃，24 h）和冷藏放置實(shí)驗(yàn)（4 ℃，12 h），最后以實(shí)測(cè)濃度的RSD值計(jì)算THC的穩(wěn)定性。

2.2 小鼠四氫姜黃素（THC）藥動(dòng)學(xué)研究

2.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 200只SPF級(jí)KM種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g。按體重性別隨機(jī)分為2組，每組100只，給藥前12 h和給藥后2 h禁食不禁水，Ⅰ，Ⅱ組分別灌胃給予四氫姜黃素及四氫姜黃素固體分散體，給藥劑量以THC計(jì)均為400 mg?kg-1（受試藥物均現(xiàn)用現(xiàn)配，稱取4 g四氫姜黃素原粉藥，加蒸餾水溶解研磨均勻，定容至100 mL，配成40 g?L-1溶液即得；四氫姜黃素固體分散體的配置方法同上，以四氫姜黃素計(jì)質(zhì)量濃度為40 g?L-1）。分別于給藥前和給藥后15，30，45 min，1，1.5，2，3，4，6，24 h摘除眼球取血于肝素鋰抗凝管中，30 min內(nèi)3 000 r?min-1離心10 min，分離上層血漿（-40 ℃冰箱凍存?zhèn)錅y(cè)），按血漿樣品處理后進(jìn)樣檢測(cè)，帶入回歸方程，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度。

2.2.2 藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 將測(cè)得的數(shù)據(jù)采用Phoenix WinNonlin智能分析軟件以非房室模型計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

生物利用度（F）=AUCTHC固體分散體/AUCTHC×100%，相對(duì)生物利用度（F）按均數(shù)計(jì)算。

3 結(jié)果

3.1 HPLC-MS/MS測(cè)定小鼠血漿四氫姜黃素（THC）

3.1.1 方法專(zhuān)屬性 取小鼠空白血漿0.1 mL，按照2.1.4項(xiàng)下操作，將一定濃度的四氫姜黃素對(duì)照溶液加入空白血漿中依同法操作，見(jiàn)圖1；將一定濃度的地西泮內(nèi)標(biāo)液加入空白血漿中依同法操作，見(jiàn)圖2；取受試小鼠服藥后的血漿樣品，依同法操作，見(jiàn)圖3。結(jié)果表明，空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不會(huì)干擾四氫姜黃素和內(nèi)標(biāo)物的測(cè)定。

3.1.2 方法學(xué)考察 標(biāo)準(zhǔn)曲線和最低檢測(cè)限：以THC濃度為橫坐標(biāo)，THC和內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，求得回歸方程為Y=0.002X-0.002（R2=0.999）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，THC在9.06～972.00 μg?L-1線性關(guān)系良好，定量下限為2 μg?L-1。采用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行LC-MS/MS檢測(cè)，檢測(cè)限（S/N=3）為0.7 μg?L-1。

回收率： THC的平均萃取回收率在75.1%～101.5%，平均方法回收率在79.8%～108%；RSD均小于11%，見(jiàn)表1。

精密度：日內(nèi)日間精密度RSD均小于13%，符合生物分析方法指導(dǎo)原則的要求，見(jiàn)表2。

基質(zhì)效應(yīng)：血樣中THC提取回收率較高且穩(wěn)定，血樣中基質(zhì)對(duì)THC的影響均較小（

穩(wěn)定性考查： THC血漿樣品穩(wěn)定性良好。實(shí)測(cè)濃度的RSD均小于15%，見(jiàn)表4。

3.2 小鼠四氫姜黃素（THC）藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果

3.2.1 小鼠口服四氫姜黃素及其固體分散體藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 小鼠單次口服四氫姜黃素及其固體分散體后藥物濃度-時(shí)間曲線圖，見(jiàn)圖4，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表5。四氫姜黃素固體分散體組達(dá)峰時(shí)間縮短，消除半衰期延長(zhǎng)，分布體積減小，清除率降低，AUC 增大，MRT 延長(zhǎng)。

3.2.2 相對(duì)生物利用度 由2.2.2所述相對(duì)生物利用度計(jì)算公式，結(jié)果表明四氫姜黃素固體分散體的相對(duì)生物利用度是四氫姜黃素的1.34倍。由此可見(jiàn)四氫姜黃素固體分散體能有效的提高四氫姜黃素在小鼠體內(nèi)血藥濃度，使其發(fā)揮更好的臨床療效。

4 討論

由于THC生物利用度低，在血漿中的含量很少，分子化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，其分子量小，因此基質(zhì)效應(yīng)對(duì)其影響較大，很多檢測(cè)方法都不能滿足其低濃度的檢測(cè)。筆者采用的HPLC-MS/MS方法，質(zhì)譜電噴霧電離源（ESI+）將樣品離子化，多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）準(zhǔn)分子離子峰，具有選擇性好、靈敏度高、分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，能夠迅速、靈敏的檢測(cè)THC的血藥濃度。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中最初參考文獻(xiàn)乙腈蛋白沉淀[1]、乙酸乙酯液-液萃取[12]法，而后又嘗試了正己烷-二氯甲烷-異丙醇 2∶1∶0.1的三元萃取，回收率和基質(zhì)效應(yīng)始終不能同時(shí)達(dá)到要求。在經(jīng)過(guò)一系列的實(shí)驗(yàn)篩選后，筆者發(fā)現(xiàn)毒性小的環(huán)己烷按1∶2的比列與乙酸乙酯混合后，提取的血漿樣品本底比較干凈，基質(zhì)效應(yīng)符合生物檢測(cè)的要求，儀器損耗小，提取時(shí)不易乳化，溶劑易吹干，提取方法簡(jiǎn)便，符合四氫姜黃素在小鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，分別采用乙腈-水（70∶30），0.1%甲酸或者0.2%的甲酸-乙腈-水（60∶40）， 0.1%甲酸或者0.2%的甲酸；乙腈-水（50∶50），0.1%甲酸或者0.2%的甲酸等對(duì)流動(dòng)相條件進(jìn)行篩選，最終確定乙腈-水（50∶50），0.1%甲酸此流動(dòng)相條件下檢測(cè)靈敏度和保留時(shí)間均達(dá)到了比較理想的效果[12-17]。

由THC及其固體分散體在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可以看出固體分散體組的MRT較四氫姜黃素相比，有明顯的延長(zhǎng)，這可能是兩親性高分子化合物聚乙二醇能使胃的排空時(shí)間延緩，或者它對(duì)胃黏膜表面有一定的黏附性能，能使藥物黏附于胃黏膜上皮部位，從而延長(zhǎng)了藥物自胃腸道的滯留的時(shí)間，促進(jìn)藥物的吸收，提高其生物利用度[18]；就AUC0-24 h，AUC0-∞和 Cmax來(lái)看，固體分散體明顯優(yōu)于四氫姜黃素，說(shuō)明四氫姜黃素固體分散體能明顯提高四氫姜黃素的生物利用度。這可能與課題組所選的輔料聚乙二醇的兩親性性質(zhì)有關(guān)。一方面，當(dāng)聚乙二醇與四氫姜黃素結(jié)合以后，其親脂性的性質(zhì)能提高機(jī)體的膜通透性，使四氫姜黃素能更好的通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入機(jī)體而被吸收；另一方面，聚乙二醇與四氫姜黃素結(jié)合后，能使其外表面涂上一層親水性膜，不但能降低四氫姜黃素界面張力的作用，利用加快其在黏膜黏液層和絨毛間的擴(kuò)散，而且還能增加其粒子表面的濕潤(rùn)性，加速其溶出和吸收，從而提高其生物利用度[19-20]。

小鼠口服THC固體分散體后，生物利用度有明顯提高。由此可見(jiàn)，采用兩親性高分子化合物聚乙二醇，按照一定比例與四氫姜黃素混合，制備成四氫姜黃素固體分散體，能夠明顯提高四氫姜黃素在小鼠體內(nèi)的血藥濃度，改善其生物利用度。實(shí)驗(yàn)室前期試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物性別對(duì)此藥物的吸收是有差異的，這可能跟體內(nèi)激素水平有關(guān)，還需要進(jìn)一步探索與研究；另一方面，四氫姜黃素本身就作為一個(gè)主要代謝產(chǎn)物，在進(jìn)入機(jī)體以后是以何種形式被吸收，其分布、代謝及排泄機(jī)制也尚待進(jìn)一步研究。

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Pharmacokinetics and relative bioavailability of THC and THC-solid

dispersion orally to mice at single dose

LIAO Li 2， HUA Hua ZHAO Jun-ning LUO Heng YANG An-dong1

（1. Institute of Pharmacology Toxicology of Sichuan Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，

the State Administration of Traditional Chinese Medicine and Key Laboratory of Quality of Biological Evaluation， Authentic

Medicinal Materials in Sichuan Province Engineering Technology Research Center for System Development， Key Laboratory of

Innovation and Quality Evaluation of Chinese Herbal Medicine Research in Sichuan Province， Chengdu 610041， China；

2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611730， China）

[Abstract] To establish a fast sensitive， reproducible LC-MS/MS method to study pharmacokinetic properties of THC， and compare relative bioavailability of THC and its solid dispersion in mice. 200 mice were divided randomly into two groups， and administered orally with THC and THC-solid dispersion after fasting （calculate on THC：400 mg?kg-1）， used HPLC-MS/MS method to determine the THC concentration of each period at the following times： baseline （ predose ），15，30，45 min，1，1.5，2，3，4，6，24 h after dosing. Calculating the pharmacokinetic parameters according to the C-t curv， and then use the Phoenix WinNonlin software for data analysis. The calibration curves were linear over the range 9.06-972 μg?L-1 for THC （R2=0.999）. The limit of detection （LOD） was 0.7 μg?L-1， respectively. The average extraction recoveries for THC was above 75%， The methodology recoveries were between 79% and 108%，The intra-day and inter-day RSD were less than 13%， the stability test showed that the plasma samples was stable under different conditions （RSD

生物藥劑動(dòng)力學(xué)范文第4篇

【摘要】 目的：建立正常人血漿中紅霉胺HPLC-MS測(cè)定法，研究地紅霉素兩種腸溶制劑的人體生物利用度和藥動(dòng)學(xué)。方法：以克拉霉素為內(nèi)標(biāo)，血漿樣品堿化后用乙酸乙酯萃取，經(jīng)Thermo Hypersil-Hypurity C18柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）分離，以MS檢測(cè)器檢測(cè)。采用二周期隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將18名健康男性志愿者隨機(jī)等分成兩組，分別單劑量口服0.5 g地紅霉素腸溶顆粒劑（試驗(yàn)制劑 T）或地紅霉素腸溶片（參比制劑 R）。結(jié)果：紅霉胺與內(nèi)標(biāo)分離度好，內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾測(cè)定。紅霉胺濃度在3.1～736 μg/L 范圍內(nèi)與峰面積比線性關(guān)系良好，最小可定量濃度為3.1 μg/L。回收率為97.0%～99.1%（n=5），日內(nèi)RSD為4.0%～9.9%（n=5）；日間RSD為4.4%～11.2%（n=15）。 T與R的Tmax分別為（2.6±0.7）h、（2.6±0.8）h；Cmax分別為（339.4±118.1）μg/L和（360.8±139.5）μg/L；AUC0144分別為（3 225.0±986.5）μg·h/L和（3 188.2±1057.9）μg·h/L；T1/2 分別為（44.7±3.5）h和（42.6±5.9）h。與參比制劑相比，試驗(yàn)制劑的相對(duì)生物利用度為（103.1±17.5）%。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)多因數(shù)方差分析顯示周期間與制劑間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），雙單側(cè)t檢驗(yàn)表明接受T與R生物等效的假設(shè)，經(jīng)計(jì)算90%置信區(qū)間均在規(guī)定值內(nèi)。結(jié)論：T與R為生物等效制劑。

【關(guān)鍵詞】 地紅霉素；紅霉胺；高效液相色譜-質(zhì)譜法；相對(duì)生物利用度

［Abstract］Objective: To establish an HPLC-MS method for determination of erythromycylamine in human plasma and to study the pharmacokinetics and the relative bioavailability of two enteric dirithromycin preparations.Methods:With clarithromycin as its internal standard， the sample of blood plasm，after alkalized，were extracted by acetic ether，then separated on a Thermo Hypersil-Hypurity column (C18 150 mm×2.1 mm，5 μm)，and detected by a MS detector.In a test of two periods of a random crossover study，an oral dose of 0.5 g dirithromycin enteric-granule (T) and its reference (R) were administrated to two groups of healthy volunteers with 9 in each. and then the pharmacokinetics and relative bioavailability were studied.Results: The calibration curve was linear within the range 3.1 to 736 μg/L， the recovery rate of erythromycylamine from plasma was in the range of 97.0%～99.1% (n=5)， inter-day and intra-day RSD were 4.0%～9.9% (n=5) and 4.4%～11.2% (n=15) respectively.The main pharmacokinetics of T and R were as following:AUC0144were (3，225.0±986.5) μg·h/L and (3，188.2±1，057.9)μg·h/L;Tmax were (2.6±0.7)h and (2.6±0.8)h;Cmax were (339.4±118.1)μg/L and (360.8±139.5)μg/L;T1/2were (44.7±3.5)h and (42.6 5.9)h.The result of ANOVA and two one-side t-test statistical analysis showed no significant differences among T and R (P>0.05).The 90% confidence interval was in the regulated range.Conclusions:T and R are bioequivalent.

［Key words］Dirithromycin;Erythromycylamine;HPLC-MS;Relative bioavailability

地紅霉素（Dirithromycin）為大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，是紅霉胺的前體藥物，口服給藥后很快轉(zhuǎn)變成紅霉胺而起作用，其抗菌譜和抗菌活性與紅霉素相似。地紅霉素在軟組織中的藥學(xué)特性較紅霉素有所改善，消除半衰期長(zhǎng)，且與其他由細(xì)胞色素P450系統(tǒng)代謝的藥物相互作用少［1］。因此，常以測(cè)定紅霉胺的血藥濃度來(lái)研究地紅霉素體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征。本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC-MS法測(cè)定紅霉胺的血藥濃度，采用二周期隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，比較了地紅霉素腸溶顆粒與腸溶片在18名健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及相對(duì)生物利用度，旨在評(píng)價(jià)試驗(yàn)制劑與參比制劑的生物等效性，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

LC-MS2010液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，LC-10AD VP低壓四元梯度泵，CTO-10A VP柱溫箱，SCL-10AD VP系統(tǒng)控制器，LC-MS solution工作站（日本島津）；DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；TG16-W微量高速離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；ER-182A型電子天平（日本AND公司）。

1.2 試藥

地紅霉素腸溶顆粒（0.25 g/包，海南皇隆制藥廠有限公司，批號(hào)：050701）；地紅霉素腸溶片（商品名：域大，0.25 g/片，湖南維康制藥有限公司，批號(hào)：20031201）；紅霉胺標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；克拉霉素標(biāo)準(zhǔn)品（內(nèi)標(biāo)，中國(guó)藥品生物制品檢定所，997 IU/mg），乙腈（色譜純，Caledon Company）；乙酸乙酯（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；甲醇（色譜純，浙江臨海市浙東特種試劑廠）；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純（AR級(jí)）；所有試驗(yàn)用水均為重蒸餾水。

1.3 受試者及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

受試者均為健康男性，年齡21～25歲，體重52～72 kg，無(wú)煙酒嗜好，試驗(yàn)前經(jīng)詢問(wèn)病史、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查未發(fā)現(xiàn)異常。無(wú)藥物過(guò)敏史和藥物依賴史，無(wú)慢性病史，四周內(nèi)未服用任何可能影響本品吸收、代謝的藥物。受試期間統(tǒng)一清淡飲食，不使用除試驗(yàn)（參比）制劑以外的任何藥物，不接受煙、酒及含咖啡的飲料，試驗(yàn)前簽署知情同意書(shū)。

采用二周期隨機(jī)交叉自身對(duì)照試驗(yàn)，將18名受試者等分成二組。分別在二周期內(nèi)口服地紅霉素受試制劑和參比制劑0.5 g，服藥前及服藥后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0、96.0、120.0、144.0 h分別取血5 mL。洗脫期為14 d，交叉給藥后取血方法和時(shí)間相同。取血后離心分取血漿，-20 ℃保存。血漿樣品用新建立的HPLC-MS方法測(cè)定。

1.4 血樣測(cè)定

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 紅霉胺溶液：精確稱取紅霉胺18.4 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度（184 μg/mL）。置于4 ℃冰箱中保存，使用時(shí)用流動(dòng)相稀釋至所需濃度。內(nèi)標(biāo)溶液：稱取克拉霉素12.5 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，應(yīng)用時(shí)進(jìn)一步稀釋為12.5 μg/mL，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 色譜條件及質(zhì)譜條件 色譜柱：Thermo Hypersil-Hypurity C18（150 mm×2.1 mm，5 μm）；柱溫：45 ℃；流動(dòng)相：10 mmol/L醋酸銨（pH 6.4）-甲醇-乙腈=50 ∶10 ∶30；流速：0.2 mL/min。質(zhì)譜條件：電噴霧電離源（ESI），選擇性正離子監(jiān)測(cè)（SIM），監(jiān)測(cè)質(zhì)荷比（M/Z）368（紅霉胺，M+2H）和237（克拉霉素，M+H）帶正電荷的分子離子峰，電離源電壓4.5 kV，噴霧氣氮?dú)猓∟2），流速1.5 L/min，脫溶劑溫度250 ℃，檢測(cè)器電壓1.5 kV。

1.4.3 血漿樣品預(yù)處理 取待測(cè)血漿0.2 mL于2 mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液（12.5 μg/L）50 μL， 加飽和碳酸鈉溶液0.1 mL，混勻，加乙酸乙酯1 mL，振蕩2 min，14 000 r/min離心5 min，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至另一管中，45 ℃真空干燥箱中抽干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相100 μL溶解，取上清液5 μL進(jìn)樣。

1.5 參數(shù)的計(jì)算與數(shù)據(jù)處理

從藥時(shí)曲線獲得兩種制劑的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，Cmax及Tmax采用實(shí)測(cè)值，AUC0144以梯形面積法計(jì)算，以消除后相血藥濃度對(duì)數(shù)值和時(shí)間回歸計(jì)算消除速率常數(shù)K和半衰期T1/2。AUC0∞=AUC0t+Ct/K，以試驗(yàn)制劑AUC0t和參比制劑AUC0t的比值計(jì)算生物利用度（F）、AUC0t和Cmax，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行藥物間、周期間、個(gè)體間的三因素方差分析，再以雙單側(cè)t檢驗(yàn)進(jìn)行等效性判斷。若受試制劑AUC0t的90%可信限落在參比制劑80%～125%范圍內(nèi)，Cmax的90%可信限落在70%～143%范圍內(nèi)，則認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效。Tmax采用原值進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 色譜行為

紅霉胺的保留時(shí)間約為5.4 min，內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間約為 3.2 min，基線平穩(wěn)，血漿內(nèi)源性物質(zhì)及其它雜質(zhì)不干擾樣品的分離測(cè)定。紅霉胺和克拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液、空白血樣、空白血樣中加入標(biāo)準(zhǔn)品及受試者服藥后3 h血漿的總離子流圖見(jiàn)圖1。

2.2 線性關(guān)系

用空白血漿將紅霉胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液稀釋成濃度分別為 3.1、9.2、18.4、36.8、73.6、147.2、368.0、736.0 μg/L的系列濃度溶液，漩渦振蕩2 min，混勻，余照“血漿樣品預(yù)處理”項(xiàng)下操作，記錄紅霉胺及內(nèi)標(biāo)的峰面積。以紅霉胺和內(nèi)標(biāo)峰面積比（A/AIS）與紅霉胺濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A/AIS＝0.0139C-0.0052，r2=0.9981，紅霉胺濃度在3.1～736.0 μg/L 范圍內(nèi)與峰面積比線性關(guān)系良好，最小可定量濃度為3.1 μg/L。

2.3 回收率及精密度

配制含紅霉胺濃度分別為3.1、73.6、736.0 μg/L的血漿樣品各5份，按“血漿樣品預(yù)處理”項(xiàng)下操作，記錄紅霉胺和內(nèi)標(biāo)峰面積，按回歸方程計(jì)算測(cè)得濃度，以測(cè)得值與加入值的比值計(jì)算回收率，并計(jì)算日內(nèi)精密度，高、中、低濃度回收率為（99.1±4.0）%、（97.0±3.7）%、（98.7±9.9）%（n=5），日內(nèi)RSD為4.0%～10.0%（n=5）。對(duì)上述樣品連續(xù)測(cè)定3 d，考察日間精密度，日間精密度為4.4%～11.2%（n=15）。

2.4 血樣測(cè)定和藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)

18例健康志愿者單劑量口服地紅霉素試驗(yàn)制劑或參比制劑0.5 g后，紅霉胺的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1，平均血藥濃度時(shí)間曲線見(jiàn)圖2。表1 健康受試者口服0.5 g地紅霉素后主要

藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（略）血漿紅霉胺平均濃度-時(shí)間曲線(0～24 h)

2.5 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果

對(duì)地紅霉素試驗(yàn)制劑與參比制劑的Cmax及AUC0144經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)沒(méi)有顯著差異（P>0.05），雙單側(cè)t檢驗(yàn)及90%可信限檢驗(yàn)表明試驗(yàn)制劑Cmax及AUC0144的均值落在規(guī)定范圍內(nèi)，結(jié)果見(jiàn)表2。Tmax原值經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)，兩種制劑間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表2 健康受試者口服0.5 g地紅霉素后Cmax及AUC0144雙單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果和90％置信區(qū)間（略）

3 討論

有關(guān)紅霉胺血藥濃度測(cè)定的方法國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的通常采用微生物法［2-3］和HPLC-UV法［4］，也有采用HPLC-MS［5-6］法和HPLC-ECD［7-8］法的報(bào)道。與其他大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物一樣，紅霉胺僅在短波長(zhǎng)范圍內(nèi)有很弱的紫外吸收，用紫外法測(cè)定生物樣品時(shí)靈敏度低。而

微生物法測(cè)定的是樣品對(duì)敏感菌株的抑菌活性，可能受到血漿蛋白結(jié)合、活性代謝物等因素的影響，選擇性差。采用ED可實(shí)現(xiàn)靈敏檢測(cè)，但對(duì)流動(dòng)相或樣品進(jìn)行加電壓增敏處理時(shí)同時(shí)增加了基線噪音和干擾峰，影響測(cè)定結(jié)果。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有色譜分離和質(zhì)譜分離的雙重功能，可以依靠質(zhì)譜的分辨能力區(qū)分不同物質(zhì)的色譜峰，抗干擾能力強(qiáng)［5-6］。本文新建立的HPLC-MS法，取樣量小，樣品處理快速簡(jiǎn)便，方法選擇性好，干擾少，回收率高，最小可定量濃度為3.1 μg/L，完全能夠滿足本試驗(yàn)低濃度藥物測(cè)定以及藥物動(dòng)力學(xué)研究的要求。

試驗(yàn)證實(shí)地紅霉素腸溶顆粒與腸溶片在健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明試驗(yàn)制劑與參比制劑生物等效。

參考文獻(xiàn)

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生物藥劑動(dòng)力學(xué)范文第5篇

【摘要】

目的比較葛根素衍生物4ac混懸液及其納米粒在Beagle犬體內(nèi)的生物利用度。方法分別于給藥后不同時(shí)間取血，高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定血清中葛根素衍生物4ac的血藥濃度，應(yīng)用3P97藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)血藥濃度數(shù)據(jù)擬合。結(jié)果葛根素衍生物4ac混懸液及其納米粒在Beagle犬體內(nèi)過(guò)程均符合二室開(kāi)放模型。結(jié)論葛根素衍生物4ac納米粒較葛根素衍生物4ac混懸液相比能明顯提高在Beagle犬體內(nèi)的生物利用度。

【關(guān)鍵詞】 葛根素衍生物4ac； 藥物動(dòng)力學(xué)； 高效液相色譜

Abstract：ObjectiveTo study the pharmacokinetics of suspension and nanopaticles in beagle dogs.MethodsBlood was collected at different time. The plasma concentration of the derivatives-4ac was determined by HPLC. The compartment model was calculated with 3p97 program and the pharmacokinetic parameters were compared with SPSS program. ResultsThe suspension and nanopaticles of derivatives-4ac could be fitted to two-compartment model in beagle dogs. ConclusionNanopaticle of derivatives-4ac can obviously improve the bioavailability in beagle dogs.

Key words：Derivatives-4ac； Pharmacokinetics ； HPLC

葛根素是葛根心腦血管活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)［1，2］，臨床上常用于治療冠心病、心絞痛及腦血栓等疾病［3～5］。實(shí)驗(yàn)證明，犬口服葛根素的生物利用度低，其絕對(duì)生物利用度約為3%，大部分以原形從糞便中排出。為了提高葛根素的生物利用度，制備了葛根素的衍生物4ac及其衍生物4ac的納米粒。本實(shí)驗(yàn)旨在采用高效液相色譜法，測(cè)定葛根素衍生物4ac混懸液及其納米粒在Beagle犬體內(nèi)的生物利用度。

1 器材

1.1 藥品與試劑葛根素衍生物4ac由香港理工大學(xué)楊大堅(jiān)教授提供，經(jīng)HPLC法測(cè)定含量均在98%以上。葛根素衍生物4ac混懸液為4ac加蒸餾水制成的混懸型水針劑；葛根素衍生物4ac納米粒凍干針劑（4ac-PLA-NP，香港理工大學(xué)中藥研究所自制）為衍生物4ac經(jīng)溶劑揮發(fā)法制備的納米膠體溶液經(jīng)冷凍干燥制成的凍干粉針劑。 乙腈、甲醇均為HPLC級(jí)，水為重蒸餾水。

1.2 儀器與色譜條件Agillent1100高效液相色譜儀，DAD二極管陣列檢測(cè)器，HP1100色譜工作站；Agillent XDB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；預(yù)柱為Agillent XDB-C18柱（4.6 mm×12.5 mm ，5 μm）；梯度洗脫：0 min 乙腈∶水（10∶90） 0.7ml/min；15 min乙腈：水（60∶40）0.7 ml/min；20 min 乙腈∶水（70∶30） 0.7 ml/min；30 min 乙腈∶水（100∶0） 0.7 ml/min；柱溫為室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。

1.3 動(dòng)物Beagle犬，體重（10±0.1）kg，雌雄兼用，由廣州醫(yī)藥工業(yè)研究院Beagle犬培育中心供應(yīng)。

2 方法與結(jié)果

2.1 葛根素衍生物4ac納米粒（4ac-PLA-NP)的制備稱取聚乳酸100 mg，4ac30 mg，卵磷脂0.2 ml（預(yù)先用二氯甲烷配成25％的溶液），加入1 ml二氯甲烷中溶解，作為有機(jī)相；另取普流羅尼克68（F-68）300 mg溶于蒸餾水中，作為連續(xù)相；將有機(jī)相加入連續(xù)相中，攪拌除去有機(jī)溶劑即得。

2.2 樣品采集取Beagle犬6只，隨機(jī)分為兩組，每組3只，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h， 4ac混懸水針劑、4ac-PLA-NP凍干針劑分別按含4ac 6 mg/kg靜脈注射給藥，于給藥后0，0.083，0.25，0.5，1.0，3.0，6.0，12，24， 48，72，96，144 h取血，靜置30 min后離心，取上層血清備用。

2.3 樣品處理精密吸取0.5 ml血清，加入甲醇2.0 ml，旋渦振蕩1 min，離心15 min（3 000 r/min），上清液用氮?dú)饬鞔蹈桑瑲堅(jiān)?.2 ml甲醇溶解，離心10 min（10 000 r/min），取上清液進(jìn)樣。

2.3.1 色譜條件葛根素對(duì)照品液、空白血清、含藥血清經(jīng)處理后的溶液的HPLC色譜圖見(jiàn)圖1～3。由圖可見(jiàn)血清中內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)葛根素的測(cè)定無(wú)干擾，葛根素的保留時(shí)間為8.3 min。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備稱取葛根素對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成每毫升約含0.1 mg的溶液，作為貯備液。精密吸取此貯備液用甲醇稀釋為含葛根素為18.75，12.5，9.375，6.25，3.125 μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取以上標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 ml，加入空白血清0.5 ml，按樣品處理方法進(jìn)行處理，得一系列對(duì)照品溶液。分別吸取以上系列對(duì)照品溶液20 μl，進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以葛根素濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得葛根素對(duì)照品在血液中的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為A=149 750C-55.665 （r=0.996 3），在0.156 3 ～0.937 5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。由于回歸方程中b/a＞＞100，因此采用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。

2.3.3 回收率實(shí)驗(yàn)取0.5 ml空白血清6份，分別加入不同量的葛根素對(duì)照品溶液，旋渦混合均勻，分別加入甲醇2.0 ml，旋渦振蕩1 min，離心15 min，3 000 r/min，上清液用氮?dú)饬鞔蹈桑瑲堅(jiān)?.2 ml甲醇溶解，離心10 min，10 000 r/min，取上清液進(jìn)樣。記錄峰面積，求回收率。高、中、低濃度的平均回收率為96.58%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)（略）

結(jié)果表明，回收率在要求范圍內(nèi)， 該方法合理、可行。

2.3.4 精密度實(shí)驗(yàn)取含葛根素的血清樣品0.5 ml，加入甲醇2.0 ml，旋渦振蕩1 min，離心15 min（3 000 r/min），上清液用氮?dú)饬鞔蹈桑瑲堅(jiān)?.2 ml甲醇溶解，離心10 min（10 000 r/min），取上清液進(jìn)樣。采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，求RSD（％）。結(jié)果見(jiàn)表2～3。

表2 日內(nèi)精密度（略）

表3 日間精密度（略）

結(jié)果表明，日內(nèi)及日間精密度均

2.4 數(shù)據(jù)分析按“2.3”樣品處理方法項(xiàng)下對(duì)各樣品進(jìn)行處理，進(jìn)樣，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出各樣品的血藥濃度，將測(cè)得的血藥數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)，用3P97藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)程序處理，結(jié)果表明游離4ac及其納米粒的體內(nèi)過(guò)程均符合二室開(kāi)放模型。其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表4。

表4 4ac混懸液及其納米粒主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（略）

從表4數(shù)據(jù)直觀來(lái)看，納米粒在體內(nèi)血藥濃度與時(shí)間曲線下的面積遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于4ac混懸液組，經(jīng)t檢驗(yàn)， 4ac混懸液與納米粒組比較有極顯著性差異（t

圖1 空白血清色譜圖（略）

圖2 血液樣品色譜圖（略）

圖3 葛根素色譜圖（略）

3 討論

在進(jìn)行含量測(cè)定中發(fā)現(xiàn)，血清樣品中，4ac在Beagle犬體內(nèi)主要以葛根素的形式存在，分析其原因可能是由于衍生物在犬體內(nèi)水解，脫乙酰基而成為葛根素的緣故。因此，含量測(cè)定中采用葛根素為對(duì)照品進(jìn)行含量測(cè)定。

由于葛根素衍生物4ac的脂溶性較強(qiáng)，制備成注射液時(shí)需要大量的增溶劑；為此制備了葛根素衍生物4ac的納米粒，旨在提高其生物利用度，通過(guò)Beagle犬體內(nèi)的生物利用度比較實(shí)驗(yàn)可以看出，制成納米粒后其生物利用度明顯提高。分析其主要原因在于消除半衰期明顯延長(zhǎng)，增加了藥物在體內(nèi)吸收的緣故。

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