楊絳隱身衣

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楊絳隱身衣范文第1篇

1997年，被楊絳稱為“我平生唯一杰作”的愛女錢瑗去世。一年后，錢鐘書臨終，一眼未合好，楊絳附他耳邊說：“你放心，有我呢！”其內心之沉穩和強大，令人肅然起敬?！板X鐘書逃走了，我也想逃走，但是逃到哪里去呢？我壓根不能逃，得留在人世間，打掃現場，盡我應盡的責任?！碑斈暌呀攀啐g的楊絳開始翻譯柏拉圖的《斐多篇》。2003年，《我們仨》出版問世，這本書寫盡了她對丈夫和女兒最深切綿長的懷念，感動了無數中國人。時隔四年后，96歲的楊絳又推出一本散文集《走到人生邊上》，探討人生價值和靈魂的去向，被評論家稱贊：“九十六歲的文字，竟具有初生嬰兒的純真和美麗?！弊叩饺松吷?，她愈戰愈勇，20卷的《錢鐘書手稿集?中文筆記》也在2011年面世……這位百歲老人的意志和精力，讓所有人驚嘆。

這是她一貫身心修養的成果。據楊絳的親戚講述，她嚴格控制飲食，少吃油膩，喜歡買了大棒骨敲碎煮湯，再將湯煮黑木耳，每天一小碗，以保持骨骼硬朗。她還習慣每日早上散步、做大雁功，時常徘徊樹下，低吟淺詠，呼吸新鮮空氣。高齡后，改為每天在家里慢走7000步，直到現在還能彎腰手碰到地面。

當然更多的秘訣來自內心的安寧與淡泊。楊絳有篇散文名為《隱身衣》，文中直抒她和錢鐘書最想要的“仙家法寶”莫過于“隱身衣”，隱于世事喧嘩之外，陶陶然專心治學。生活中的她的確幾近“隱身”，低調至極，幾乎婉拒一切媒體的來訪。2004年《楊絳文集》出版，出版社準備大張旗鼓籌劃其作品研討會，楊絳打了比方風趣回絕：“稿子交出去了，賣書就不是我該管的事了。我只是一滴清水，不是肥皂水，不能吹泡泡?！?/p>

錢鐘書去世后，楊絳以全家三人的名義，將高達800多萬元的稿費和版稅全部捐給母校清華大學，設立了“好讀書”獎學金。楊絳和錢鐘書一樣，出了名的不喜過生日，九十歲壽辰時，她為避打擾，專門躲進清華大學招待所住了幾日。她早就借翻譯英國詩人蘭德那首著名的詩，寫下自己無聲的心語：“我和誰都不爭，和誰爭我都不屑；我愛大自然，其次就是藝術；我雙手烤著生命之火取暖；火萎了，我也準備走了。”（金琴）

老戲骨雷恪生 喜歡爬山喝藥酒

曾在《大宅門》、《雷雨》、《水滸》、《秋菊打官司》等一百多部影視劇、話劇中飾演各類角色，被人們譽為“影壇常青樹”的老戲骨雷恪生，而今雖已76歲高齡，但仍舊精力旺盛。每年要接拍4-5部影視劇，主演多部話劇，有時還在央視春晚的小品中“客串”。

老人之所以能承受如此大的工作量，全靠他長期以來關注健康，重視養生。

雷老住在景山附近，空閑時便去爬山，這已成了他的一個習慣。他認為爬山有三個好處：一是鍛煉人的筋骨；二是能提高人的肺活量，改善人的腸胃功能；三是邊爬山邊欣賞周圍美景，呼吸著清新空氣，人會感到心曠神怡。他說：“我已70多歲高齡，每次體檢絕大多數指標都合格。身體這么好，與長年堅持爬山，練得一身好身體不無關系?！?/p>

楊絳隱身衣范文第2篇

【關鍵詞】 姜黃素

Inhibitory Effect of Curcumin on Angiogenesis Induced by Brain Derived Neurotrophic Factor from Multiple Myeloma Cells

Abstract

In order to explore the probability of curcumin treating multiple myeloma (MM) via the inhibition of angiogenesis，the expressions of brain derived neurotrophic factor(BDNF) and its specific receptor in human MM cells and endothelial cells were detected by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The angiogenic activity was evaluated by endothelial cell migration assay and tubule formation assay in vitro. The results showed that exogenous BDNF significantly induced endothelial cell tubule formation and endothelial cell migration，these two effects were inhibited by curcumin. Furthermore，BDNF was detected in the MM cell and TrkB was detected in the endothelial cell and curcumin depressed the mRNA expression of BDNF and TrkB in the dose- and time-dependent manners. It is concluded that BDNF is a novel angiogenesis protein. Curcumin interrupts the interaction between multiple myeloma cells and endothelial cells by reducing TrkB expression in endothelial cells and inhibiting BDNF production in multiple myeloma cells，eventually，resulting in inhibition of angiogenesis. This is probably one part of the mechanism of the curcumin treating MM via the inhibition of angiogenesis.

Key words curcumin；brain derived neurotrophic factor；multiple myeloma；angiogenesis

血管新生在多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）的發生與發展中占有重要的地位，我們近期的研究結果表明，MM患者高表達腦源性神經營養因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF），且BDNF具有促進血管增殖活性［1，2］。在本試驗中我們檢測了姜黃素對BDNF體外誘導的內皮細胞血管新生的影響及MM細胞、內皮細胞中BDNF和TrkB轉錄水平的改變，以初步探討姜黃素通過抑制血管新生途徑治療MM的可能機制。

材料和方法

細胞株及其培養

人多發性骨髓瘤細胞株KM3由上海醫院候健教授惠贈，內皮細胞株 ECV304 購于武漢大學典型物種保藏中心。將 KM3 和 ECV304 分別置于含

10%胎牛血清的RPMI 1640和DMEM培養液（Gibcol）中，在37℃、 5％ CO2及飽和濕度的培養箱中培養。取對數生長期的細胞進行實驗。

主要試劑

姜黃素（Sigma公司），以二甲亞砜(DMSO)配成8 mmol/L儲存液，使用前用無菌的PBS稀釋至工作濃度。BDNF（R&D system）用含1%牛血清白蛋白的PBS溶解至50 μg/ml，儲存于-20℃；使用時終濃度為100 ng/ml。去生長因子基質膠（Matrigel） 為Becton Dickinson公司產品。引物由上海生工公司合成（引物序列及擴增片段大小見表1），M-MLV逆轉錄酶、Oligo(15dt)為promega公司產品，RNasin、Taq酶為Biostar公司產品，dNTP為MBI公司產品。Table 1. Sequence of primers and size of amplified fragments（略）

內皮細胞遷移試驗

參考早期文獻［3］報道，于12孔細胞培養板每孔接種1×105 ECV304細胞。單層培養至細胞覆蓋率為90％左右時，換1% FBS的DMEM培養12小時，使細胞同步化。用橡膠刮片在孔內刮出兩條整齊而平行的20 mm×5 mm刮痕，棄上清，加入新鮮含1％血清的培養液1 ml并在不同孔內加入實驗相應空白對照（PBS）、陽性對照（BDNF）和試驗組（ BDNF＋不同濃度的姜黃素）。37℃、5％ CO2下培養24小時。4％多聚甲醛固定，瑞氏-姬姆薩染色后光學顯微鏡下（×100）觀察刮痕。每孔隨機選擇5個視野，進行遷移細胞計數，每組重復3次。

內皮細胞小管形成試驗

參考早期文獻［4］報道，ECV304在含1％血清的DMEM培養液中培養12小時后收獲。于24孔細胞培養板每孔加入250 μl Matrigel，37℃，5％ CO2下溫育90分鐘使膠凝固。每孔加入ECV304制成的5×105/ml不含血清的細胞懸液400 μl，并添加實驗所需的空白對照（PBS）、陽性對照（BDNF）和試驗組（ BDNF＋不同濃度的姜黃素）。37℃，5％ CO2下培養，24小時后光學顯微鏡下（×100）觀察細胞管狀排列及管狀結構數量、完整程度。

逆轉錄PCR（RT-PCR）檢測BDNF的和TrkB的mRNA

細胞總RNA的提取 采用異硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法提取KM3與ECV304的總RNA，用DNA/RNA紫外檢測儀測定其含量及純度。

逆轉錄 取總RNA 9 μl，加入M-MLV逆轉錄酶1 μl，5×Rt buffer 4 μl，Oligo(dt)1 μl，RNasin 0.5 μl，dNTP 4 μl，用DEPC處理過的雙蒸水補充至20 μl。42 ℃水浴1小時，95 ℃ 5分鐘滅活M-MLV逆轉錄酶，-20℃保存或即用。

PCR擴增 取1 μg cDNA，加Taq酶0.5 μl，10×buffer 5 μl，dNTP 2 μl，BDNF、TrkB或β -actin上下游引物各2 μl，用DEPC處理過的雙蒸水補充至50 μl，上機檢測。BDNF與TrkB擴增條件分別為: 95 ℃預變性4分鐘，95 ℃變性60秒，55 ℃退火30秒，72 ℃延伸60秒，共30個循環；94 ℃預變性4分鐘，94 ℃變性30秒，65 ℃退火30秒，72 ℃延伸60秒，共32個循環。

電泳 取PCR產物4 μl于1.5%瓊脂糖凝膠上電泳15分鐘，紫外光顯影。

統計學分析

應用SPSS 11.5軟件進行統計學分析，實驗結果以x±SD 表示，組間分析采用兩獨立樣本的t檢驗。

結果

姜黃素阻斷BDNF誘導的內皮細胞遷移效應

在未作任何處理的情況下，內皮細胞具有一定的遷移能力，100 ng/ml 的BDNF能明顯促進其遷移，每個視野的遷移細胞總數明顯地增加。姜黃素阻斷BDNF誘導的遷移效應，遷移細胞總數隨著姜黃素濃度的升高而下降，20 μmol/L時幾乎無細胞移動，30 μmol/L時貼壁的細胞部分開始脫落，細胞皺縮凋亡，40 μmol/L時絕大多數細胞脫落、皺縮凋亡（圖1）。BDNF組與對照組之間、姜黃素組（10，20 μmol/L）與BDNF組相比，遷移細胞總數具有顯著差異（P

姜黃素阻斷BDNF誘導的內皮細胞小管形成效應

BDNF誘導內皮細胞在Matrigel上形成小管狀結構，管壁完整，管腔大。姜黃素具有抑制BDNF誘導的小管形成效應的能力，并隨濃度的增加而增強。30 μmol/L時幾乎無管狀結構形成，部分細胞皺縮凋亡，40 μmol/L時細胞聚集成團，貼壁困難（圖2）。BDNF組與對照組之間、姜黃素組（10，20，30 μmol/L）與BDNF組相比，小管總面積具有顯著差異（P

姜黃素對KM3細胞BDNF表達的影響

用0、10、 20、 30、40 μmol/L 的姜黃素孵育KM3細胞24小時，以0.5%的DMSO作為對照，排除DMSO對KM3的影響。結果顯示，隨著濃度的增加KM3細胞表達的BDNF mRNA逐漸減少，40 μmol/L時已檢測不到BDNF mRNA的表達（圖3）。

以20 μmol/L 的姜黃素分別孵育KM3細胞12、24、36、48小時，隨著時間的增加KM3細胞表達的BDNF mRNA逐漸減少，作用48小時后KM3細胞無BDNF mRNA表達（圖4）。

姜黃素對ECV304細胞TrkB表達的影響

用0、 10、 20、 30、40 μmol/L 的姜黃素孵育ECV304細胞24小時，以0.5%的DMSO作為對照，排除DMSO對ECV304的影響。結果表明，隨著濃度的增加ECV304細胞表達的TrkB mRNA逐漸減少，在姜黃素濃度為30 μmol/L時已檢測不到TrkB mRNA的表達（圖5）。

以20 μmol/L 的姜黃素分別孵育ECV304細胞12、24、36、48小時，結果隨著時間的增加ECV304細胞表達的TrkBmRNA逐漸減少，作用36小時后ECV304細胞無TrkB mRNA表達（圖6）。

討 論

姜黃素是從草本植物姜黃的根莖中提取出來的一種酚類色素，其抗癌作用倍受矚目，它主要通過抑制腫瘤細胞的增殖、調控癌基因和抑癌基因的表達、誘導細胞周期停滯和細胞凋亡等機制發揮抗腫瘤效應［5，6］。近年來國外學者將姜黃素的研究延伸到防治MM中。Alok等［7，8］證實，姜黃素下調NF-κB及由NF-κB調節的基因產物IκBα、Bcl-2、Bcl-xl、cycle D1和IL-6，將細胞周期阻滯于G1/S，繼而抑制MM細胞系的增殖；從MM患者骨髓中分離的CD138+細胞常規表達活化形式的NF-κB和STAT3，姜黃素能抑制這些轉錄因子的活性、削弱細胞分泌細胞因子和黏附于骨髓基質細胞的能力。

血管新生在MM的發生發展中占重要地位，以抑制血管新生為目標的治療已成為難治性/復發性MM的重要著眼點。有研究表明姜黃素具有抗血管新生的活性［9，10］，Passos等［11］在對激光誘導的脈絡膜血管新生大鼠動物模型的研究中發現，膜內注射姜黃素能有效抑制脈絡膜的血管新生。Thaloor等［9］的試驗表明，姜黃素能夠抑制內皮細胞小管形成，在內皮細胞形態發生過程中充當血管新生阻滯劑的角色。然而，姜黃素是否能抑制MM的血管新生，在國內外尚無人研究。

內皮細胞遷移試驗和小管形成試驗是評價體外內皮細胞血管形成能力的兩種重要指標。在本實驗中100 ng/ml的BDNF能夠有效地促進內皮細胞的遷移和小管形成，而姜黃素可明顯阻斷BDNF誘導的這一血管新生效應，并呈劑量依賴性。另外，我們以往的研究結果證實，BDNF是一種具有促進血管新生活性的細胞因子，且與MM有著密切的聯系，高表達于MM患者外周血血漿中，其升高趨勢與VEGF的升高趨勢具有相關性［1，2］。因此推測姜黃素可能會通過抑制BDNF誘導的血管新生而起到治療MM的作用。

通過阻斷血管新生的方法來防治腫瘤的關鍵在于下調血管新生因子，阻斷腫瘤細胞與內皮細胞間的相互作用，繼而抑制血管新生。Pollmann等［12］指出，姜黃素通過下調HL-60與HeLa細胞c-jun蛋白的表達，減少大約75% VEGF蛋白的分泌，達到抗腫瘤、抗血管新生的效應。本實驗數據顯示，在MM細胞和內皮細胞中，在轉錄水平上能分別檢測到BDNF及其特異性的受體TrkB的表達，而姜黃素能同時阻斷兩種細胞中目標產物的表達，兩者均呈時間-劑量依賴性。眾所周知，腫瘤細胞分泌的細胞因子與內皮細胞膜上的特異性受體結合是血管新生的始動因素，姜黃素同時下調兩種細胞BDNF和TrkB表達，必然阻礙了MM細胞和內皮細胞通過BDNF介導的生物信息的傳遞。

綜上所述，BDNF是一種具有促進血管增殖活性的細胞因子，姜黃素可以分別下調MM細胞BDNF與內皮細胞TrkB的表達，阻礙兩者間的相互作用，從而抑制血管新生，這可能成為治療MM潛在的作用靶點。

【參考文獻】

1王雅丹，胡豫，魏文寧等. 腦源性神經營養因子在多發性骨髓瘤患者血漿中的表達.臨床血液學雜志，2004；17: 82-86

2胡豫，孫春艷，王雅丹等. 腦源性神經營養因子（BDNF）在多發性骨髓瘤患者血漿中的表達增高及其意義的初步研究. 中國實驗血液學雜志，2005；13: 104-109

3Sharma GD，He JC，Bazan HE. p38 and ERK1/2 coordinate cellular migration and proliferation in epithelial wound healing: evidence of cross-talk activation between MAP kinase cascades. J Biol Chem，2003；278: 21989-21997

4Yahata Y，Shirakata Y，Tokumaru S，et al. Nuclear translocation of phosphorylated STAT3 Is essential for vascular endothelial growth factor-induced human dermal microvascular endothelial cell migration and tube formation. J Biol Chem，2003；278: 40026-40031

5陳偉紅，陳燕，谷俊俠等. 姜黃素對K562細胞STAT5信號分子的影響. 中華血液學雜志，2004；25：151-153

6吳裕丹，陳燕，何靜等. 姜黃素在急性髓性白血病HL-60細胞中對凋亡調控蛋白Bax、Bak、Mcl-1的影響. 同濟醫科大學學報，2001；30：25-27

7Bharti AC，Donato N，Singh S，et al. Curcumin (diferuloylmethane) down-regulates the constitutive activation of nuclear factor-κB and IκBα kinase in human multiple myeloma cells，leading to suppression of proliferation and induction of apoptosis. Blood，2003；101: 1053-1062

8Bharti AC，Shishodia S，Reuben JM，et al. Nuclear factor-κB and STAT3 are constitutively active in CD138+ cells derived from multiple myeloma patients，and suppression of these transcription factors leads to apoptosis. Blood，2004；103: 3175-3184

9Thaloor D，Singh AK，Sidhu GS，et al. Inhibition of angiogenic differentiation of human umbilical vein endothelial cells by curcumin. Cell Growth Differ，1998；9: 305-312

10Arbiser JL，Klauber N，Rohan R，et al. Curcumin is an in vivo inhibitior of angiogenesis. Mol Med，1998；4: 376-383